蔡奕川+姚友生+李迎東

【摘要】 目的：探討Caveolin-1在腺性膀胱炎、膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與細(xì)胞增殖、新生血管的關(guān)系。方法：檢測(cè)人膀胱移行細(xì)胞癌、腺性膀胱炎與正常膀胱黏膜組織中Caveolin-1、PCNA與VEGF的表達(dá)，并分析各指標(biāo)間的相關(guān)性。結(jié)果：三組標(biāo)本的Caveolin-1陽(yáng)性率分別為0、7.27%與39.39%，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），并且伴隨腫瘤病理分級(jí)與臨床分期的增高Caveolin-1陽(yáng)性率不斷升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），同時(shí)腺性膀胱炎、膀胱移行細(xì)胞癌中Caveolin-1表達(dá)與PCNA、VEGF具有密切相關(guān)性。結(jié)論：Caveolin-1可作為反映腺性膀胱炎向膀胱癌轉(zhuǎn)變的重要指標(biāo)之一，與膀胱腫瘤細(xì)胞的增殖和新生血管生長(zhǎng)有協(xié)同作用。

【關(guān)鍵詞】 膀胱移行細(xì)胞癌； 腺性膀胱炎； Caveolin-1

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.34.005

腺性膀胱炎與膀胱癌有密切關(guān)聯(lián)[1]，不少研究認(rèn)為腺性膀胱炎是一種良性病變，但具有惡變傾向，認(rèn)為其可能是膀胱癌癌前病變的一種表現(xiàn)形式[2-3]。目前，有關(guān)小窩蛋白-1（Caveolin-1）的相關(guān)研究表明，其與不同類(lèi)型惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移均存在關(guān)聯(lián)[4]，與其細(xì)胞的增殖、分化以及血管生成的信號(hào)傳導(dǎo)具有相關(guān)性[5-6]。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011年1月-2015年6月在潮州市中心醫(yī)院及中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院泌尿外科住院接受手術(shù)治療的患者標(biāo)本膀胱移行細(xì)胞癌66例，腺性膀胱炎55例及正常膀胱黏膜標(biāo)本10例，全部組織均經(jīng)福爾馬林固定，石蠟包埋處理，連續(xù)切片，制成4 μm厚度的切片備染。原發(fā)性膀胱移行細(xì)胞癌手術(shù)標(biāo)本66例，包括行膀胱全切術(shù)25例，膀胱部分切除術(shù)17例和經(jīng)尿道電切術(shù)24例；其中男52例，女14例；年齡34～83歲，平均（60.17±10.40）歲；初發(fā)者40例，復(fù)發(fā)者26例；WHO病理分級(jí)中G1級(jí)24例，G2級(jí)24例，G3級(jí)18例；按UICC-TNM標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期：淺表性腫瘤（Tis～T1）39例，浸潤(rùn)性腫瘤（T2～T4）27例，所有病例術(shù)前均未行化療或放療。腺性膀胱炎手術(shù)標(biāo)本55例均行經(jīng)尿道電切，其中男6例，女

49例；年齡30～72歲，平均（54.75±12.41）歲。另取10例正常膀胱黏膜作為正常對(duì)照，取自TURP7例及開(kāi)放性前列腺摘除術(shù)3例，年齡53～76歲，平均（59.65±9.58）歲。各組患者年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 試劑及方法 SP系列試劑盒第一抗體為大鼠抗人Caveolin-1多克隆抗體，購(gòu)自Cell Signaling 公司，小鼠抗人增殖細(xì)胞核抗原單克隆抗體購(gòu)自CHEMICON公司，兔抗人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子單克隆抗體購(gòu)自北京中杉金橋公司，二抗為即用型，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照，參照UltraSensitiveTM S-P試

劑盒使用說(shuō)明。

1.3 結(jié)果判斷 Caveolin-1、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的陽(yáng)性染色模式均為以細(xì)胞膜或細(xì)胞漿著色為陽(yáng)性細(xì)胞信號(hào)，顯微鏡下每個(gè)切片隨機(jī)取5個(gè)高倍鏡視野，判定以染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比的得分之和進(jìn)行評(píng)估。（a）染色強(qiáng)度：不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。（b）陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為0分，<25%為1分，25%～50%為2分，>50%為3分。以a+b之和評(píng)價(jià)：0分為（-）、1～3分為（+）、4～6分為（++）。PCNA陽(yáng)性表達(dá)的判定：PCNA陽(yáng)性著色定位于細(xì)胞核，以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性染色。隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比，陽(yáng)性比≥10%時(shí)為表達(dá)陽(yáng)性。每張切片至少觀察到1000個(gè)細(xì)胞，計(jì)切片中每1000個(gè)腫瘤細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，取其平均值，按陽(yáng)性細(xì)胞所占比例分為Ⅰ～Ⅳ級(jí)：0～10%為Ⅰ級(jí)，10%～25%為Ⅱ級(jí)，26%～50%為Ⅲ級(jí)，51%～100%為Ⅳ級(jí)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SAS 9.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，各指標(biāo)之間的相關(guān)性分析用 字2趨勢(shì)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組標(biāo)本的Caveolin-1表達(dá) 三組標(biāo)本的Caveolin-1陽(yáng)性率分別為0、7.27%與39.39%，比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），并且伴隨腫瘤病理分級(jí)與臨床分期的增高其陽(yáng)性率不斷升高（P<0.05），見(jiàn)表1～2，圖1～2。

2.2 Caveolin-1與PCNA、VEGF的相關(guān)性 腺性膀胱炎、膀胱移行細(xì)胞癌的Caveolin-1與PCNA、VEGF具有密切相關(guān)性，見(jiàn)表3～6。

3 討論

腺性膀胱炎是一種膀胱黏膜上皮反應(yīng)性增生改變[7]，目前隨著對(duì)其認(rèn)識(shí)及診斷手段的提高，其發(fā)病率、復(fù)發(fā)率有增高的趨勢(shì)，但其具體病因仍不甚清楚[8]，相關(guān)研究認(rèn)為是移行上皮在慢性刺激因素如感染、梗阻、物理刺激和化學(xué)致癌物等作用下，化生為腺上皮并通過(guò)分泌黏液而達(dá)到自身保護(hù)目的，其發(fā)生屬于機(jī)體的一種防御機(jī)制[9-10]。小窩蛋白-1（Caveolin-1）是微囊蛋白的一種主要組成蛋白[11]，目前多數(shù)研究表明Caveolin-1在癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，并與腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移以及病理分級(jí)有關(guān)[12]，提示Caveolin-1促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移，與細(xì)胞的增殖、分子的信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)[13]。膀胱癌及前列腺癌中，Caveolin-1均能以分泌型形式存在，且Caveolin-1的缺失能導(dǎo)致表皮細(xì)胞的過(guò)度增殖進(jìn)而加速皮膚癌的發(fā)生[14]。

本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Caveolin-1在正常黏膜、腺性膀胱炎、膀胱癌有遞增的趨勢(shì)，腺性膀胱炎可能有潛在的惡變傾向，或者是正常膀胱黏膜惡變?yōu)榘螂装┑闹虚g階段。腺性膀胱炎與膀胱上皮腫瘤關(guān)系密切，人類(lèi)尿路復(fù)層移行上皮生物學(xué)行為具有多變性，它可以在某些特定的間質(zhì)影響下分化為前列腺上皮，也可以在某些條件下發(fā)生為鱗狀上皮、腺上皮等，出現(xiàn)臨床上的膀胱白斑、腺性膀胱炎、膀胱鱗狀細(xì)胞癌、膀胱腺癌、尿路移行細(xì)胞癌等一些與分化相關(guān)的疾病。而腺性膀胱炎Caveolin-1陽(yáng)性多見(jiàn)于結(jié)構(gòu)紊亂且細(xì)胞異型增生較明顯者[15]，因此，筆者考慮其可能具有惡變潛能。腺性膀胱炎Caveolin-1表達(dá)為陽(yáng)性者，當(dāng)注意其可能具有惡變的潛能。雖然本研究發(fā)現(xiàn)腺性膀胱炎組的陽(yáng)性表達(dá)率不高，且與正常黏膜組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示Caveolin-1對(duì)于區(qū)分腺性膀胱炎和正常組織可能沒(méi)有意義。筆者考慮其一是標(biāo)本量有限或者陽(yáng)性率不高的原因，其二是與腺性膀胱炎標(biāo)本的病理類(lèi)型有關(guān)。此外，在膀胱移行細(xì)胞癌中Caveolin-1陽(yáng)性率陽(yáng)性表達(dá)率隨腫瘤病理分級(jí)及臨床分期的增高而增加。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是目前已知的一族最強(qiáng)的促血管形成物質(zhì)，在許多惡性腫瘤組織中呈高表達(dá)。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：腺性膀胱炎組中VEGF陽(yáng)性表達(dá)率為29.09%，膀胱移行細(xì)胞癌組中VEGF陽(yáng)性表達(dá)率為66.67%，正常黏膜中無(wú)表達(dá)，三組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），并且正常黏膜組與腺性膀胱炎組、腺性膀胱炎組與膀胱移行細(xì)胞癌組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。說(shuō)明VEGF表達(dá)陽(yáng)性對(duì)于區(qū)別正常黏膜、腺性膀胱炎、膀胱移行細(xì)胞癌有一定的意義，在腺性膀胱炎向膀胱移行細(xì)胞癌過(guò)渡的過(guò)程中新生血管也起到一定的作用。腫瘤的浸潤(rùn)伴隨著腫瘤新生血管的形成，其關(guān)鍵環(huán)節(jié)在于血管形成誘導(dǎo)因子與抑制因子間平衡狀態(tài)的改變[16]。黃隨富等[17]發(fā)現(xiàn)VEGF在膀胱移行細(xì)胞癌中呈高表達(dá)與腫瘤的病理分級(jí)和臨床分期相關(guān)，部分腺性膀胱炎也有表達(dá)，即VEGF陽(yáng)性可能是腺性膀胱炎一種惡性變的危險(xiǎn)信號(hào)，與大多數(shù)實(shí)體腫瘤一樣，膀胱移行細(xì)胞癌也具有血管依賴性。

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移是涉及多種分子機(jī)制的極其復(fù)雜的過(guò)程，受許多特殊基因的調(diào)控[18]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：Caveolin-1與PCNA在腺性膀胱炎、膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)呈正相關(guān)，說(shuō)明Caveolin-1和PCNA對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖可能有協(xié)同作用。Caveolin-1可能在某些環(huán)節(jié)改變PCNA的信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)，但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。而且，腺性膀胱炎Caveolin-1染色陽(yáng)性的4例中，有2例PCNA染色也陽(yáng)性，其膀胱鏡下表現(xiàn)為乳頭狀瘤樣型（1例）和絨毛樣水腫型（1例），組織切片上也有少數(shù)的異質(zhì)性細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)表明：腺性膀胱炎惡變與其分型有一定關(guān)系，乳頭狀瘤樣型惡變的潛能較大，而慢性炎癥型、黏膜無(wú)顯著改變型等其他類(lèi)型惡變幾率較小。所以對(duì)于濾泡水腫型，乳頭狀瘤樣型腺性膀胱炎，特別是Caveolin-1與PCNA染色皆陽(yáng)性的患者，存在惡變的潛能，應(yīng)視為癌前病變，予以積極外科治療，更應(yīng)注意隨訪。

有研究認(rèn)為Caveolin-1調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞分化和促進(jìn)血管生成[19-20]。趙醒等[21]發(fā)現(xiàn)在食管鱗癌中Caveolin-1促進(jìn)腫瘤微血管生成。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：Caveolin-1與VEGF在腺性膀胱炎、膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)呈正相關(guān)，說(shuō)明在腺性膀胱炎、膀胱移行細(xì)胞癌中Caveolin-1和VEGF的表達(dá)對(duì)腫瘤血管生成可能有協(xié)同作用。而且腺性膀胱炎中，Caveolin-1陽(yáng)性表達(dá)的4例，有3例VEGF也出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，其膀胱鏡下表現(xiàn)為乳頭狀瘤樣型（2例）和絨毛樣水腫型（1例）。這提示對(duì)于濾泡水腫型，乳頭狀瘤樣型腺性膀胱炎，特別是Caveolin-1與VEGF染色皆陽(yáng)性的患者，更應(yīng)注意隨訪。

綜上所述，Caveolin-1可作為反應(yīng)腺性膀胱炎向膀胱癌轉(zhuǎn)變的重要指標(biāo)之一，與膀胱腫瘤細(xì)胞的增殖和新生血管生長(zhǎng)有協(xié)同作用。同時(shí)，Caveolin-1、PCNA和VEGF可作為反映腺性膀胱炎、膀胱移行細(xì)胞癌生物學(xué)行為和預(yù)后的指標(biāo)。

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