李雅婷 田夢(mèng)麗 謝換換 郭天宇 牛 津劉永堅(jiān) 田麗霞

（中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院水生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物研究所，廣州 510275）

飼料中添加肌肉生長(zhǎng)抑制素抑制肽對(duì)海鱸生長(zhǎng)性能、體組成、血清生化指標(biāo)及肝臟與血清免疫指標(biāo)的影響

李雅婷 田夢(mèng)麗 謝換換 郭天宇 牛 津?劉永堅(jiān) 田麗霞

（中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院水生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物研究所，廣州 510275）

本試驗(yàn)旨在研究飼料中添加肌肉生長(zhǎng)抑制素抑制肽對(duì)海鱸生長(zhǎng)性能、體組成、血清生化指標(biāo)及肝臟與血清免疫指標(biāo)的影響。以初始均重為（9.05±0.05）g的海鱸幼魚(yú)為試驗(yàn)動(dòng)物，暫養(yǎng)1周后，挑選規(guī)格一致的健康試驗(yàn)魚(yú)480尾，隨機(jī)分為4組，每組4個(gè)重復(fù)（水族箱），每個(gè)重復(fù)放養(yǎng)30尾魚(yú)。4組試驗(yàn)魚(yú)分別投喂肌肉生長(zhǎng)抑制素抑制肽添加水平為0（對(duì)照）、0.25%、0.50%、0.75%的試驗(yàn)飼料135 d。結(jié)果顯示：1）0.50%組的增重率（WGR）、特定生長(zhǎng)率（SGR）和成活率（SR）均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），各添加組的飼料系數(shù)（FCR）均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），且以0.50%組的FCR最低；2）各添加組的背肌粗脂肪含量均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），0.50%組的背肌粗蛋白質(zhì)含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），全魚(yú)的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分和背肌的水分、粗灰分含量在各組之間沒(méi)有顯著差異（P＞0.05）；3）0.25%組的血清總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）和總膽固醇（TC）含量顯著低于其他各組（P＜0.05），血清甘油三酯（TG）含量各組間不存在顯著差異（P＞0.05）；4）0.50%和0.75%組的血清堿性磷酸酶（ALP）活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），0.25%和0.50%組的肝臟溶菌酶（LZM）活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），肝臟與血清的總抗氧化能力（T-AOC）和肝臟超氧化物歧化酶（SOD）活性各組間不存在顯著差異（P＞0.05）。綜上所述，在飼料中添加肌肉生長(zhǎng)抑制素抑制肽能夠促進(jìn)海鱸的生長(zhǎng)并提高免疫能力，本試驗(yàn)條件下最適添加水平為0.50%。

肌肉生長(zhǎng)抑制素抑制肽；海鱸；生長(zhǎng)性能；血清生化指標(biāo)；免疫指標(biāo)

肌肉生長(zhǎng)抑制素（myostatin，MSTN）是動(dòng)物肌肉細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控中的一種負(fù)調(diào)控因子，即生長(zhǎng)分化因子8（growth differentiation factor 8，GDF-8），屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β（transforming growth factor β，TGF-β）家族成員。在魚(yú)類中，MSTN分布廣泛，其基因可在肌肉、腦、鰓、腸道、腎臟、性腺等處表達(dá)［1］。有研究報(bào)道，白鱸（Morone chrysops）的MSTN基因表達(dá)部位在肌肉中［2］。MSTN在肌肉生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)方面一直起負(fù)調(diào)節(jié)作用［3］，魚(yú)類MSTN的主要作用與哺乳動(dòng)物類似。MSTN的調(diào)控機(jī)制是作為胞外信號(hào)分子與成肌細(xì)胞膜上的受體結(jié)合引起受體自身的磷酸化，啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)一系列信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程，作用于生肌決定因子（MyoD）靶基因的調(diào)控區(qū)，調(diào)節(jié)肌肉組成蛋白基因的表達(dá)［4-5］。研究表明，經(jīng)基因敲除技術(shù)構(gòu)建的MSTN基因突變純合體小鼠的肌細(xì)胞表現(xiàn)出過(guò)度增生與肥大，且相比正常小鼠其肌肉量顯著增加［3］。抑制成年鼠MSTN基因的表達(dá)能導(dǎo)致其肌肉量增加25%左右［6］。

長(zhǎng)期以來(lái)人們一直認(rèn)為蛋白質(zhì)必須水解成游離的氨基酸后才能被利用，直到20世紀(jì)60年代Newey等才提出肽可以完整被吸收的證據(jù)［7］。小肽是由2個(gè)以上的氨基酸彼此以肽鍵相互連接的化合物，是一種具有多種生物學(xué)功能的肽。小肽相比氨基酸的吸收，具有速度快、耗能低、不易飽和且各種肽之間運(yùn)轉(zhuǎn)無(wú)競(jìng)爭(zhēng)性與抑制性的特點(diǎn)［8］，且有大量研究表明飼料中添加小肽能促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，改善飼料效率，提高動(dòng)物的免疫力，并具有調(diào)節(jié)肉制品風(fēng)味等特性。例如，Kotzamanis等［9］研究得出，在飼料中添加10%的小肽對(duì)歐洲鱸魚(yú)（Dicentrarchus labrax）的生長(zhǎng)起到最佳促進(jìn)作用；于輝等［10］的研究成果表明，飼料中添加酪蛋白小肽能促進(jìn)草魚(yú)（Ctenopharyngodon idella）的生長(zhǎng)及對(duì)飼料的利用。

MSTN是目前所知的最強(qiáng)的肌肉生長(zhǎng)抑制因子，因此人們一直試圖尋找MSTN的抑制物或相關(guān)技術(shù)來(lái)抑制MSTN功能的發(fā)揮。已有報(bào)道表明MSTN體外抑制物可降低其負(fù)向調(diào)節(jié)肌肉生長(zhǎng)發(fā)育的作用，導(dǎo)致肌肉量的增加［11］。Whittemore等［12］給小鼠上注射MSTN抗體，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠肌肉量和體重增加。張寧寧等［13］首先制備 MSTN抗體，然后將獲得的抗體顯微注射到大口黑鱸（Micropterus salmoides）的受精卵卵黃區(qū)，結(jié)果顯示具有促進(jìn)仔魚(yú)生長(zhǎng)的作用。MSTN抑制肽（MSTN inhibitory peptides）是一種新型小肽，作用機(jī)理同MSTN抗體類似，能抑制MSTN的活性。本試驗(yàn)以海鱸作為試驗(yàn)動(dòng)物，以肌肉生長(zhǎng)抑制素抑制肽的添加水平為變量，探究飼料中添加不同水平MSTN抑制肽對(duì)海鱸生長(zhǎng)性能、體組成、血清生化指標(biāo)、肝臟和血清免疫指標(biāo)的影響，旨在為海鱸配合飼料的基礎(chǔ)研究和生產(chǎn)實(shí)踐提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

本試驗(yàn)配制了4種等氮等脂的試驗(yàn)飼料（粗蛋白質(zhì)含量約為40.0%，粗脂肪含量約為6.5%），其組成及營(yíng)養(yǎng)水平如表1所示，試驗(yàn)飼料中MSTN抑制肽［由共鱗實(shí)業(yè)（深圳）有限公司提供］的添加水平分別為0（對(duì)照）、0.25%、0.50%和0.75%。所有飼料原料先經(jīng)粉碎，再過(guò)40目篩過(guò)濾，隨后按表1中的比例準(zhǔn)確稱重并初步混合后，在商用飼料攪拌機(jī)中攪拌15 min，之后加入預(yù)先混勻的魚(yú)油、豆油和卵磷脂，再攪拌 15 min，再加入大約40%的蒸餾水（體積/重量），繼續(xù)攪拌15 min，用雙螺桿擠條機(jī)（華南理工大學(xué)機(jī)械工程研究所制作）擠壓成粒徑分別為2.0和3.5 mm的顆粒飼料，經(jīng)打磨后在空調(diào)房中抽干至水分含量在10%左右，而后用封口塑料袋分裝，標(biāo)記后儲(chǔ)存于-20℃的冰柜中備用。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets（DM basis） %

續(xù)表1

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在珠海魚(yú)蝦營(yíng)養(yǎng)研究基地進(jìn)行。選取初始均重為（9.05±0.05）g的海鱸幼魚(yú)為試驗(yàn)動(dòng)物。在試驗(yàn)開(kāi)始前將試驗(yàn)魚(yú)置于1 000 L的水泥池中暫養(yǎng)1周，以便適應(yīng)試驗(yàn)條件，暫養(yǎng)期間投喂商品飼料（廣東君有飼料有限公司1號(hào)幼蝦料，粗蛋白質(zhì)含量≥41.0%，粗脂肪含量≥4.0%），暫養(yǎng)結(jié)束后開(kāi)始正式試驗(yàn)。挑選規(guī)格一致的健康試驗(yàn)魚(yú)480尾，養(yǎng)殖于16個(gè)250 L的水族箱中，內(nèi)含200 L咸淡水，每箱放養(yǎng)30尾。每種試驗(yàn)飼料隨機(jī)投喂給 4個(gè)水族箱，每天投喂 2次（分別為08：30和18：00），試驗(yàn)1～4周投喂粒徑為2.0 mm的顆粒飼料，之后投喂粒徑為3.5 mm的顆粒飼料。試驗(yàn)期間養(yǎng)殖系統(tǒng)微流水設(shè)置，初始投喂量按初始體重的6%計(jì)算，之后根據(jù)攝食情況及時(shí)調(diào)整投喂量，同時(shí)記錄投喂量，每天清除殘餌和糞便，殘餌收集干燥稱重。養(yǎng)殖周期為135 d。試驗(yàn)期間定期進(jìn)行水質(zhì)測(cè)定，水溫為27～31℃，鹽度為6‰～7‰，溶解氧濃度為6～7 mg/L，pH為7.0～7.4，硫酸物濃度為0～0.05 mg/L，亞硝酸氮濃度為0.05～0.10 mg/L，氨氮濃度為0.20～0.40 mg/L。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖試驗(yàn)期間對(duì)魚(yú)體的攝食情況、死亡情況以及對(duì)外界刺激的反應(yīng)等進(jìn)行記錄。135 d的養(yǎng)殖期結(jié)束后，饑餓處理24 h，然后對(duì)每個(gè)水族箱中的試驗(yàn)魚(yú)進(jìn)行稱重和記數(shù)，用于計(jì)算增重率（weight gain rate，WGR）、飼料系數(shù)（feed coefficient ratio，F(xiàn)CR）、成活率（survival rate，SR）和特定生長(zhǎng)率（specific growth rate，SGR）。從每個(gè)水族箱中隨機(jī)取2尾魚(yú)作為全魚(yú)樣品。每箱再另取5尾魚(yú)，測(cè)量體長(zhǎng)和體重，用于肥滿度（condition factor，CF）的計(jì)算；然后用經(jīng)抗凝劑潤(rùn)洗過(guò)的2 mL注射器靜脈竇抽取血液，靜置 2 h后 4℃下4 000 r/min離心10 min后取上清液分裝于1.5 mL離心管中，用于血清生化和免疫指標(biāo)的測(cè)定；取血后進(jìn)行解剖，分離出對(duì)應(yīng)魚(yú)體的內(nèi)臟、肝臟和腸脂，稱重記錄用于臟體比（viscerosomatic index，VSI）、肝體比（hepatosomatic index，HSI）和脂體比（intraperitoneal fat ratio，IPF）的計(jì)算，并將肝臟樣品保存于1.5 mL離心管中后迅速凍存于液氮中，用于肝臟免疫指標(biāo)的測(cè)定；最后剝離背部肌肉，用于背肌組成的分析。

肝臟組織勻漿液的制備：取-80℃冰箱凍存的肝臟樣品（0.2～0.4 g）于冰上解凍后，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重后放入10 mL離心管中，按照1∶9的比例加入0.86%冷生理鹽水，用全自動(dòng)樣品快速研磨儀（JXFSTPRP-24，上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司）勻漿后取出，置于離心機(jī)中4℃下2 500 r/min離心10 min，取上清液分裝至1.5 mL的離心管中，保存于-80℃后用于肝臟免疫指標(biāo)的測(cè)定。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定

飼料、全魚(yú)和背肌樣品經(jīng)105℃烘干至恒重，測(cè)定其水分含量，烘干后樣品磨粉后進(jìn)行粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分含量的測(cè)定，測(cè)定方法分別為凱氏定氮法（1030-Auto-Analyzer，Tecator AB，H?gan?s，瑞典），索氏抽提法（HT6，Tecator AB，H?gan?s，瑞典）、馬福爐550℃灼燒法。

1.4.2 血清生化指標(biāo)以及肝臟與血清免疫指標(biāo)的測(cè)定

血清樣品送至中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院，在日立7107A自動(dòng)生化測(cè)定儀上進(jìn)行總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）含量及堿性磷酸酶（ALP）活性的測(cè)定。

血清總抗氧化能力（T-AOC）與肝臟T-AOC和超氧化物歧化酶（SOD）、溶菌酶（LZM）活性以及肝臟蛋白質(zhì)含量均按照南京建成生物工程研究所提供的檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.5 計(jì)算公式

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS 21.0軟件，先經(jīng)單因素方差分析（one-way ANOVA），若有顯著差異，再采用Duncan氏法進(jìn)行組間的多重比較檢驗(yàn)，P＜0.05為顯著性差異。

2 結(jié) 果

2.1 飼料中添加MSTN抑制肽對(duì)海鱸生長(zhǎng)性能的影響

由表2可以看出，0.50%組的終末體重、增重率和特定生長(zhǎng)率顯著高于對(duì)照組和0.25%組（P＜0.05），但與0.75%組沒(méi)有顯著差異（P＞0.05），且0.50%組的增重率比對(duì)照組高出24.9%；0.50%組的成活率顯著高于對(duì)照組和0.75%組（P＜0.05），但與0.25%組沒(méi)有顯著差異（P＞0.05）；0.5%組的飼料系數(shù)顯著低于其他各組（P＜0.05）；各形態(tài)學(xué)指標(biāo)（肥滿度、臟體比、肝體比和脂體比）在各組間均不存在顯著性差異（P＞0.05）。

表2 飼料中添加MSTN抑制肽對(duì)海鱸生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of MSTN inhibitory peptides supplementation on growth performance of sea bass（Lateolabrax japonicas）

2.2 飼料中添加MSTN抑制肽對(duì)海鱸體組成的影響

由表3可以看出，全魚(yú)的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分的含量各組之間均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。背肌水分和粗灰分含量各組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05）；0.50%組的背肌粗蛋白質(zhì)含量顯著高于其余各組（P＜0.05），其余各組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）；添加MSTN抑制肽的3個(gè)組的背肌粗脂肪含量均顯著低于未添加MSTN抑制肽的對(duì)照組（P＜0.05）。

表3 飼料中添加MSTN抑制肽對(duì)海鱸體組成的影響（濕重基礎(chǔ)）Table 3 Effects of MSTN inhibitory peptides supplementation on body composition of sea bass（Lateolabrax japonicas）（wet weight basis） %

2.3 飼料中添加MSTN抑制肽對(duì)海鱸血清生化指標(biāo)的影響

由表4可以看出，0.25%組的血清總蛋白、白蛋白和總膽固醇的含量均顯著低于其他各組（P＜ 0.05），其他各組間不存在顯著差異（P＞0.05）；血清甘油三酯含量隨MSTN抑制肽添加水平的增加呈下降趨勢(shì)，但組間差異不顯著（P＞0.05）。

表4 飼料中添加MSTN抑制肽對(duì)海鱸血清生化指標(biāo)的影響Table 4 Effects of MSTN inhibitory peptides supplementation on serum biochemical indices of sea bass（Lateolabrax japonicas）

2.4 飼料中添加MSTN抑制肽對(duì)海鱸肝臟與血清免疫指標(biāo)的影響

由表4可以看出，肝臟與血清T-AOC、肝臟SOD活性在各組間均不存在顯著差異（P＞0.05）；0.25%與0.50%組的肝臟溶菌酶活性顯著高于對(duì)照組與0.75%組（P＜0.05）；血清堿性磷酸酶活性隨著MSTN抑制肽添加水平的增加總體呈上升趨勢(shì)，且0.50%和0.75%組顯著高于對(duì)照組和0.25%組（P＜0.05）。

表5 飼料中添加MSTN抑制肽對(duì)海鱸肝臟與血清免疫指標(biāo)的影響Table 5 Effects of MSTN inhibitory peptides supplementation on liver and serum immune indices of sea bass（Lateolabrax japonicas）

3 討 論

3.1 飼料中添加MSTN抑制肽對(duì)海鱸生長(zhǎng)性能的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加0.50%MSTN抑制肽有利于海鱸的生長(zhǎng)，并可提高成活率及降低飼料系數(shù)。查閱資料發(fā)現(xiàn)，關(guān)于MSTN抑制物在水產(chǎn)動(dòng)物飼料中應(yīng)用的研究基本沒(méi)有，其研究主要集中在免疫中和方面，即利用免疫學(xué)原理，通過(guò)主動(dòng)免疫或被動(dòng)免疫有效中和體內(nèi)的MSTN，滅活其生物學(xué)功能，進(jìn)而達(dá)到促進(jìn)肌肉生長(zhǎng)發(fā)育的目的。研究表明，給小鼠［12］、大口黑鱸受精卵［13］、肉雞卵黃［14］注射MSTN抗體后，可以使小鼠和肉雞的骨骼肌的量增加，也可促進(jìn)大口黑鱸仔魚(yú)的生長(zhǎng)。Tang等［15］給小鼠注射含MSTN的基因疫苗后發(fā)現(xiàn)，其肌肉的產(chǎn)量和力量顯著提高。給杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良（Duchenne muscular dystrophy）模型小鼠腹腔注射MSTN抗體3個(gè)月后，小鼠的體重、肌肉量、肌肉體積均增加，成年大鼠給予MSTN抗體后肌肉量增加［11］。還有其他方面的研究，比如在斑馬魚(yú)胚胎早期發(fā)育階段對(duì)MSTN轉(zhuǎn)錄子的沉默促進(jìn)了肌肉的生長(zhǎng)發(fā)育，并導(dǎo)致肌肉的增生或肥大［16-17］。轉(zhuǎn)基因小鼠過(guò)度表達(dá)顯性負(fù)型MSTN，特異性結(jié)合活化素受體蛋白（ActR）ⅡB時(shí)，會(huì)出現(xiàn)肌肉量大幅增長(zhǎng)的現(xiàn)象，相當(dāng)于MSTN基因缺失型小鼠［18］。這些研究均表明 MSTN抑制物有助于機(jī)體生長(zhǎng)及肌肉量的增加，與本試驗(yàn)添加0.5%MSTN抑制肽有助于魚(yú)體生長(zhǎng)的結(jié)果一致。同時(shí)，MSTN抑制肽是一種小肽，而大量的試驗(yàn)表明在飼料中添加小肽對(duì)水生動(dòng)物的生長(zhǎng)性能有明顯的促進(jìn)作用。例如：姜柯君［19］研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加0.75%和1.00%的小肽能顯著提高星斑川鰈幼魚(yú)（Platichthys stellatus）的增重率、攝食率和特定生長(zhǎng)率；劉福星等［20］研究發(fā)現(xiàn)，在凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）飼料中添加6%樂(lè)能小肽可提高對(duì)蝦的生長(zhǎng)速度、飼料轉(zhuǎn)化率和成活率。就目前可參考的資料來(lái)看，MSTN抑制肽助力于海鱸生長(zhǎng)和飼料吸收的原因可能有如下幾點(diǎn)：首先，MSTN抑制肽作為一種小肽，具有吸收快、耗能少、載體不易飽和等特點(diǎn)，能夠提高氨基酸的吸收速度，從而有效提高飼料蛋白質(zhì)的利用率［21］；其次，小肽可促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，改善消化機(jī)能，促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)［22］；最后，MSTN抑制肽在肌肉發(fā)育過(guò)程中抑制了MSTN功能的發(fā)揮，從而減少M(fèi)STN對(duì)成肌細(xì)胞的增生與分化的抑制作用，即降低了MSTN負(fù)向調(diào)節(jié)肌肉生長(zhǎng)發(fā)育的作用，導(dǎo)致肌肉量的增加，促進(jìn)生長(zhǎng)［11］。本試驗(yàn)中，MSTN抑制肽添加水平為0.50%時(shí)，海鱸的生長(zhǎng)性能表現(xiàn)最好，而高于該添加水平（如0.75%）對(duì)生長(zhǎng)則并未表現(xiàn)出進(jìn)一步促進(jìn)的作用，但由于本試驗(yàn)只設(shè)置了3個(gè)梯度，目前的結(jié)果還不能表明MSTN抑制肽添加水平高于0.50%時(shí)不能進(jìn)一步促進(jìn)魚(yú)體的生長(zhǎng)甚至抑制其生長(zhǎng)，建議在后續(xù)研究工作提高添加水平，以探討更高劑量添加MSTN抑制肽對(duì)魚(yú)體生長(zhǎng)及飼料利用的影響。

3.2 飼料中添加MSTN抑制肽對(duì)海鱸體組成的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，0.50%組的背肌粗蛋白質(zhì)含量顯著高于其他各組，所有添加MSTN抑制肽的組的背肌粗脂肪含量顯著低于對(duì)照組，與岳志剛等［23］報(bào)道的MSTN基因缺失可導(dǎo)致動(dòng)物肌肉增加和脂肪減少的結(jié)果一致。Lin等［24］證實(shí)敲除MSTN基因的9～10月齡小鼠比正常小鼠脂肪組織減少了20%。小肽在幼齡草魚(yú)飼料中的應(yīng)用研究亦有相似結(jié)果［10］。 姜柯君［19］研究結(jié)果顯示，飼料中添加1.0%和1.5%小肽顯著提高了星斑川鰈幼魚(yú)背肌粗蛋白質(zhì)含量，而背肌粗脂肪含量在不添加小肽的對(duì)照組含量最高。造成背肌粗蛋白質(zhì)含量顯著增多的原因與促進(jìn)魚(yú)體生長(zhǎng)的原因一致。而引起背肌粗脂肪含量減少的原因，從以往的研究結(jié)果分析可能有以下4點(diǎn)：其一，小肽飼料添加劑提高了生物體蛋白質(zhì)的合成，進(jìn)而減少了氨基酸轉(zhuǎn)化為脂肪的去向，從而有效減少脂肪在魚(yú)體內(nèi)的堆積；其二，MSTN的缺少可以抑制脂肪細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育，同時(shí)促進(jìn)脂質(zhì)代謝［23］；其三，增重率提高即增加肌肉量相當(dāng)于增加靜態(tài)能量消耗，靜態(tài)能量消耗的增加使脂肪的生成量減少［25］；其四，缺少M(fèi)STN的機(jī)體環(huán)境可能對(duì)前體脂肪細(xì)胞的形成或者脂肪細(xì)胞中甘油三酯的合成有影響［25］。

3.3 飼料中添加MSTN抑制肽對(duì)海鱸血清生化指標(biāo)的影響

血清總蛋白含量反映了機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的水平，可用于衡量蛋白質(zhì)和氨基酸的利用率［26］。血清白蛋白既是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的載體，又是機(jī)體蛋白質(zhì)的來(lái)源之一，可用于維持血液滲透壓，提高能量和修補(bǔ)組織［27］。本試驗(yàn)中，0.25%組血清總蛋白和白蛋白的含量顯著低于其他各組，與以往研究結(jié)果相反。已有研究指出，飼料中添加小肽可以促進(jìn)星斑川鰈魚(yú)血清蛋白質(zhì)的合成，增加球蛋白的數(shù)量，提高機(jī)體免疫力［19］。而0.50%和0.75%組的血清白蛋白和總蛋白含量與對(duì)照組不存在顯著差異，猜測(cè)本試驗(yàn)中的MSTN抑制肽添加水平還不足以顯著增強(qiáng)海鱸血清蛋白質(zhì)的合成，甚至較少量的MSTN抑制肽還會(huì)降低血清蛋白質(zhì)的合成，具體原因還有待進(jìn)一步研究。

總膽固醇和甘油三酯是機(jī)體脂肪堆積情況的反映指標(biāo)［28］。本試驗(yàn)中，0.25%組血清總膽固醇含量顯著低于其他各組。與姜柯君［19］的報(bào)道在星斑川鰈魚(yú)中添加小肽的各試驗(yàn)組的血清總膽固醇含量低于對(duì)照組，以及Lin等［24］報(bào)道的MSTN基因敲除小鼠的血液膽固醇含量低于正常小鼠的結(jié)果相一致。其原因可能是MSTN抑制肽的添加促進(jìn)了脂質(zhì)代謝，從而降低血清中脂類物質(zhì)的含量。添加MSTN抑制肽的各組的血清甘油三酯含量均低于對(duì)照組，但各添加組間不存在顯著差異，猜測(cè)是本試驗(yàn)中的MSTN抑制肽添加水平還不足以顯著降低海鱸血清甘油三酯的含量。

3.4 飼料中添加MSTN抑制肽對(duì)海鱸肝臟與血清免疫指標(biāo)的影響

血液中的堿性磷酸酶活性是衡量磷元素是否充足的有效參考指標(biāo)，血清中的堿性磷酸酶活性可以反映組織的鈣、磷消化情況。當(dāng)魚(yú)類生長(zhǎng)需要鈣元素增多時(shí)，堿性磷酸酶可以催化骨組織釋放鈣元素滿足機(jī)體需求。因此，堿性磷酸酶活性在一定程度內(nèi)增長(zhǎng)有助于魚(yú)類生長(zhǎng)和骨骼發(fā)育。在本試驗(yàn)中，添加MSTN抑制肽的各組的血清堿性磷酸酶活性皆高于對(duì)照組，以0.50%組的活性最高，此結(jié)果與生長(zhǎng)結(jié)果相對(duì)應(yīng)。

機(jī)體防御體系的總抗氧化能力的強(qiáng)弱與健康程度有非常密切的聯(lián)系，其包括酶促抗氧化和非酶促抗氧化兩大體系，前者依賴于機(jī)體中各種抗氧化酶（如過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶等）發(fā)揮作用，后者主要依賴于金屬蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素等發(fā)揮作用［29］。其中，超氧化物歧化酶是機(jī)體過(guò)氧化物酶系統(tǒng)的一種，可特異性地催化機(jī)體由于自身代謝或外界脅迫下做產(chǎn)生的一系列有毒的超氧化物，并將其轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫和氧，再由過(guò)氧化氫酶系統(tǒng)的其他成員轉(zhuǎn)化過(guò)氧化氫為水和氧，從而保障機(jī)體正常的生理功能［30］。整個(gè)體系的防護(hù)氧化作用主要有3條途徑：其一，通過(guò)消除活性氧與自由基以抑制脂質(zhì)過(guò)度氧化；其二，分解過(guò)氧化物，阻斷過(guò)氧化鏈；其三，除去具有催化作用的金屬離子。本試驗(yàn)中，飼料添加MSTN抑制肽對(duì)肝臟總抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性與血清總抗氧化能力均沒(méi)有產(chǎn)生顯著影響，說(shuō)明MSTN抑制肽對(duì)海鱸的抗氧化能力的影響不顯著。

溶菌酶是魚(yú)類機(jī)體中巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞產(chǎn)生的一種重要的非特異性免疫因子，在魚(yú)體中起重要的防御作用。溶菌酶通過(guò)水解細(xì)菌細(xì)胞壁而致細(xì)菌死亡，且可以誘導(dǎo)調(diào)節(jié)其他免疫因子的合成分泌［31］。本試驗(yàn)中，飼料中添加0.25%與0.50%MSTN抑制肽時(shí)肝臟溶菌酶活性顯著性高于對(duì)照組。一方面，溶菌酶活性升高后可進(jìn)一步可誘導(dǎo)其他免疫因子，共同參與免疫防御，提高機(jī)體的免疫力［32］；另一方面，MSTN抑制肽提高免疫活性可能是通過(guò)水解產(chǎn)生免疫活性肽（如免疫刺激肽和抗菌肽等），免疫活性肽最終參與魚(yú)類機(jī)體內(nèi)的免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)［33］。

4 結(jié) 論

綜合上述結(jié)果，在本試驗(yàn)條件下，海鱸飼料中MSTN抑制肽的最適添加水平為0.50%。

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Effects of Myostatin Inhibitory Peptides Supplementation on Growth Performance，Body Composition，Serum Biochemical Indices，Serum and Liver Immune Indices of Sea Bass（Lateolabrax japonicas）

LI Yating TIAN Mengli XIE Huanhuan GUO Tianyu NIU Jin?LIU Yongjian TIAN Lixia
（Institute of Aquatic Economic Animals，School of Life Sciences，Sun Yat-Sen University，Guangzhou510275，China）

The study was conducted to investigate the effects of myostatin（MSTN）inhibitory peptides supplementation on growth performance，body composition，serum biochemical indices，serum and liver immune indices of sea bass（Lateolabrax japonicas）.Using juvenile sea bass with the average initial body weight of（9.05±0.05）g as test animals，after one week feeding，a total of 480 healthy sea bass with the similar size were randomly divided into 4 groups with 4 replicates（aquariums）per group and 30 fish per replicate.The fish in those 4 groups were fed experimental diets supplemented with 0（control），0.25%，0.50%and 0.75% MSTN inhibitory peptides，respectively，and lasted for 135 days.The results showed as follows：1）the weight gain rate（WGR），specific growth rate（SGR）and survival rate（SR）of fish fed diet containing 0.50% MSTN inhibitory peptides were significantly higher than those of fish fed control diet（P＜0.05），while the feed conversion ratio（FCR）of fish fed diets containing 0.25%，0.50%and 0.75%MSTN inhibitory peptides was significantly lower than that of fish fed control diet（P＜0.05），and 0.50%group had the lowest FCR.2）No significant differences were found in the contents of whole body moisture，crude protein，crude lipid and ash among all groups（P＞0.05），while dorsal muscle crude lipid content of fish fed diets containing 0.25%，0.50%and 0.75%MSTN inhibitory peptides was significantly lower than that of fish fed control diet（P＜0.05），and dorsal muscle crude protein content of fish fed diet containing 0.50%MSTN inhibitory peptides was significantly higher than that of fish fed control diet（P＜0.05）.3）Serum total protein（TP），albumin（ALB）and total cholesterol（TC）contents of fish fed diet containing 0.25%MSTN inhibitory peptides were significantly lower than those of fish fed other diets（P＜0.05）.Yet，no significant difference was discovered in serum triglycerides（TG）content among all groups（P＞0.05）.4）Serum alkaline phosphatase（ALP）activity of fish fed diets containing 0.50%and 0.75%MSTN inhibitory peptides were significantly higher than that of fish fed control diet（P＜0.05）.Liver lysozyme（LZM）activity of fish fed diets containing 0.25%and 0.50%MSTN inhibitory peptides was significantly higher than that of fish fed control diet（P＜0.05）.No significant differences were found in liver total antioxidant capacity（T-AOC）and superoxide dismutase（SOD）activity among all groups（P＞0.05）.According to the above results，it is concluded that MSTN inhibitory peptides can effectively improve growth and immune capacity of sea bass.In addition，the suitable dietary MSTN inhibitory peptides supplemental level is 0.50%for sea bass under this experimental condition.［Chinese Journal of Animal Nutrition，2017，29（2）：519-528］

MSTN inhibitory peptides；sea bass（Lateolabrax japonicas）；growth performance；serum biochemical indices；immune indices

S963

A

1006-267X（2017）02-0519-10

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.02.019

（責(zé)任編輯 菅景穎）

2016-07-26

海洋經(jīng)濟(jì)創(chuàng)新發(fā)展區(qū)域示范專項(xiàng)項(xiàng)目（GD2012-B01）

李雅婷（1992—），女，廣西桂林人，碩士研究生，從事水生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料研究。E-mail：liyat2014＠163.com

?通信作者：牛 津，副教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail：edls＠m(xù)ail.sysu.edu.cn

?Corresponding author，associate professor，E-mail：edls＠m(xù)ail.sysu.edu.cn