林靜　楊澤民

【摘要】 通過分析影響唾液淀粉酶活性的因素，探討脾虛證患者唾液淀粉酶活性異常的機制，對脾虛證臨床參考指標(biāo)引入唾液淀粉酶活性比值的研究作出綜合性評價并進行深入的思考與展望。

【關(guān)鍵詞】 脾虛證； 唾液淀粉酶； 活性； 異常； 機制

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.1.088 文獻標(biāo)識碼 A 文章編號 1674-6805（2017）01-0159-04

中醫(yī)在論述脾的生理功能時，認為“脾開竅于口”，“脾在液為涎”和“脾主涎”等，涎即為唾液，脾開竅于口是指飲食味覺感受與脾胃運化功能密切相關(guān)。唾液在脾胃調(diào)和時的分泌是適量的，在受到如食物的刺激時會分泌增多，而在一般情況下具有保護口腔環(huán)境的作用?！岸嗔飨选?在論述脾的病理時是作為重要的證候之一。另外，在臨床辯證、治療等方面，均發(fā)現(xiàn)脾與唾液有著密切的關(guān)系。因此，在生理上脾與唾液之間有密切的關(guān)系。唾液淀粉酶（sAA）是人類唾液蛋白中最為豐富的蛋白[1]，占到唾液蛋白的40%～50%[2]，常被用來考察唾液蛋白分泌的主要指標(biāo)。因此，很多學(xué)者利用sAA的活性變化對“脾主涎”及脾虛證的本質(zhì)進行了探索。

廣州中醫(yī)藥大學(xué)脾胃研究所在20世紀(jì)80年代就率先開始對脾虛證患者sAA活性進行了探索性研究，發(fā)現(xiàn)脾虛證患者在檸檬酸刺激前后的sAA活性比值（酸刺激后sAA活性/酸刺激前sAA活性）較正常人顯著下降[3]，這一結(jié)果隨后被國內(nèi)多位學(xué)者所證實[4-8]。然而，進一步的研究發(fā)現(xiàn)sAA活性比值作為脾虛證臨床參考指標(biāo)可操作性和重現(xiàn)性及精準(zhǔn)程度不夠高[9-11]，推廣應(yīng)用不理想[5、7]。

鑒于脾虛證sAA活性的研究及sAA活性比值的臨床應(yīng)用中存在的問題，本文試對脾虛證患者的sAA活性改變的機制多年來的研究概況進行了綜合，分析，并探討如下。

1 影響唾液淀粉酶（sAA）活性的因素

sAA主要由糖基化和非糖基化兩種形式的同工酶家族組成，口腔總sAA活性除了受口腔內(nèi)酶反應(yīng)環(huán)境影響外，主要取決于酶的含量和sAA同工酶的種類和比例。酶的含量與酶的合成及分泌密切相關(guān)，而sAA同工酶的種類和比例主要通過酶蛋白翻譯后糖基化修飾形成，因此，有必要從sAA基因水平、翻譯后修飾及分泌過程深入分析影響sAA活性改變的機制。

sAA活性主要受AMY1基因拷貝數(shù)變異、sAA含量、N-糖基化sAA含量及β-AR介導(dǎo)的分泌調(diào)控所影響，其中，編碼sAA的AMY1基因拷貝數(shù)變異直接影響sAA的含量，sAA含量和sAA的N-糖基化程度直接影響sAA的活性，而且sAA的分泌則主要由β-AR介導(dǎo)調(diào)控，另外β-AR還會影響sAA的N-糖基化進而影響其活性。當(dāng)然sAA活性也受其他因素的影響，包括應(yīng)激水平，吸煙、運動、藥物和飲食習(xí)慣等[12-15]，但AMY1基因拷貝數(shù)變異、sAA含量和N-糖基化sAA含量及β-AR介導(dǎo)的分泌調(diào)控是引起sAA活性變化的“內(nèi)因”，而應(yīng)激、吸煙、運動、藥物和飲食等則是“外因”，“外因”必須通過“內(nèi)因”起作用。

1.1 AMY1基因拷貝數(shù)變異與sAA活性

AMY1基因位于染色體lp21上，編碼sAA[16]。AMY1基因是人類基因組中拷貝數(shù)變異最大的基因之一[17-18]，其變異范圍達到2～15倍之多。研究顯示，AMY1基因的拷貝數(shù)與sAA含量和活性正相關(guān)[19-20]，一般來說，AMY1基因拷貝數(shù)越多，sAA含量和活性也越大。但是，如果AMY1基因拷貝數(shù)是決定sAA含量和活性的唯一因素，并不能解釋同一個人在其不同年齡階段sAA活性存在差異甚至是巨大差異的事實，因為對同一個人來講AMY1基因拷貝數(shù)是不變的，因此，有學(xué)者研究指出AMY1基因的拷貝數(shù)并不是決定sAA含量的唯一因素[16]。然而不可否認的是，AMY1基因拷貝數(shù)變異是影響人群中sAA含量和活性存在個體差異的重要遺傳學(xué)基礎(chǔ)。

1.2 sAA含量和N-糖基化sAA含量與sAA活性

sAA是一種含鈣金屬酶，特異性水解α-1，4糖苷鍵，能夠?qū)⒌矸鬯獬善咸烟呛望溠刻荹21]。作為唾液蛋白中重要的外分泌蛋白，sAA主要由糖基化和非糖基化兩種形式的同工酶家族組成，非糖基化sAA分子量為57kD，糖基化sAA分子量為62kD。口腔sAA活性主要除了受AMY1基因拷貝數(shù)變異影響外，還取決于sAA的含量和sAA同工酶的種類和比例，而sAA同工酶種類和比例主要通過酶蛋白翻譯后的糖基化修飾而形成。sAA主要以N-聚糖的形式進行糖基化，正常人唾液中sAA有25%～30%是糖基化的sAA。研究顯示，α-淀粉酶的糖基化修飾會影響該酶的折疊、分泌、活性及穩(wěn)定性[22-23]，并且在動物模型上證實老年大鼠相對年輕大鼠其腮腺細胞蛋白N-糖基化顯著降低[24]，另外，有報道對慢性胃炎脾虛證患者酸刺激后總唾液糖蛋白及sAA的N-聚糖結(jié)構(gòu)特點進行研究發(fā)現(xiàn)，脾虛證患者酸刺激后sAA活性低下與總唾液糖蛋白及sAA的N-糖基化均不完全有關(guān)[25]，并且在分析慢性胃炎脾虛證與脾胃濕熱患者的基因芯片數(shù)據(jù)時，也證實了脾虛證患者存在多個參與N-聚糖合成的糖基轉(zhuǎn)移酶基因表達異常[26]，可見，sAA活性不僅受sAA含量的影響，并且與sAA糖基化程度密切相關(guān)。

1.3 β-AR介導(dǎo)的分泌調(diào)控與sAA活性

唾液主要由腮腺、下頜下腺和舌下腺三個唾液腺分泌，sAA在口腔內(nèi)以唾液的形式分泌出來，其中80%的sAA是由腮腺分泌[21，27]。唾液的分泌分為基礎(chǔ)狀態(tài)下和刺激下兩種情況，在基礎(chǔ)狀態(tài)下，20%唾液來源于腮腺，65%來源于下頜下腺，7%～8%來源于舌下腺，其他小腺體貢獻10%左右。但是，在外界條件刺激下，三大唾液腺的分泌功能發(fā)生相應(yīng)改變，其中作為sAA分泌主要來源的腮腺在刺激情況下，對唾液體積的貢獻由20%上升到50%之多[28]，并且，唾液中sAA與其他成分是同時產(chǎn)生和分泌的[29]，因此，推理及研究均證實，在基礎(chǔ)狀態(tài)和外界刺激下，唾液中sAA的含量主要由腮腺貢獻，并隨著腮腺分泌的增強而增加[21，27，30-31]。

sAA的分泌受自主神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控，其中，交感神經(jīng)通過神經(jīng)末梢釋放去甲腎上腺素與腺泡細胞膜上的α和β腎上腺素受體（α-AR，β-AR）結(jié)合，α-AR通過升高細胞內(nèi)Ca2+濃度，適量增加唾液中液體的分泌，而β-AR則通過升高細胞內(nèi)cAMP，進而激活一系列蛋白激酶，誘導(dǎo)腺泡細胞通過胞吐方式分泌唾液蛋白（包括sAA）；副交感神經(jīng)通過乙酰膽堿與腺泡細胞膜上的膽堿受體M3結(jié)合，刺激產(chǎn)生DAG和IP3，其中DAG通過蛋白激酶級聯(lián)反應(yīng)促進少量唾液蛋白的分泌，IP3則通過動員內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)Ca2+，引起大量電解質(zhì)和水分的分泌[32-33]。

sAA活性被認為是交感神經(jīng)活動最為敏感的指標(biāo)[12]，大量研究通過測定sAA活性來反映應(yīng)激相關(guān)的交感神經(jīng)系統(tǒng)活動的變化[34-37]，而早期的研究發(fā)現(xiàn)，通過激活β-AR可以促進大鼠腮腺細胞內(nèi)蛋白合成、N-糖基化及分泌[38-39]，這提示交感神經(jīng)可能主要通過β-AR參與介導(dǎo)sAA的分泌及其N-糖基化。進一步研究證實了sAA的分泌主要由β-AR介導(dǎo)，如，研究顯示刺激后sAA明顯增加并伴隨β-AR的激活，同時利用β-AR激動劑能顯著提高sAA的含量和釋放量[40-42]，用β-AR阻斷劑普萘洛爾進行反證也支持這個觀點[35]；sAA的N-糖基化也通過β-AR介導(dǎo)[39，43]。由此可見，β-AR介導(dǎo)的調(diào)控對sAA分泌及其N-糖基化程度具有重要作用。

1.4 唾液的采集方法與sAA活性

sAA活性可能存在節(jié)律性變化，但在短時間內(nèi)變化不明顯[14]，因此，目前國外報道的有關(guān)sAA活性研究的唾液采集時間基本都是設(shè)定在一個時間段來進行，如16∶00-20∶00 [44]， 14∶00-17∶00 [36]， 14∶00-18∶00 [45]。

根據(jù)唾液的采集方法，可以將采集的唾液樣本分類為：唾液收集管采集的樣本vs.自然流出或吐出的方式采集的唾液樣本，全唾液樣本vs.特定唾液腺中采集的樣本，未刺激唾液樣本vs.刺激后分泌的唾液樣本。

如果唾液收集來自于參與者的正常日常生活（比如每日分時段收集），唾液收集管的方法較優(yōu)。收集需要注意：（1）吸收劑放的位置固定；（2）固定含吸收劑時間；（3）收集期間不能咀嚼。

不管何種采集方式，要求參與者在收集前禁食1 h（可適量飲白開水），收集前5 min用清水漱口，清除口腔內(nèi)殘余食物殘渣，防止味覺上的刺激影響唾液流率和唾液蛋白質(zhì)組分。

1.5 影響sAA活性的其他因素

sAA的聚集是一種急性的應(yīng)激反應(yīng)，因此有許多潛在的因素可以影響刺激或抑制唾液淀粉酶分泌。這些因素有：心理刺激、應(yīng)激水平，吸煙、運動、藥物和飲食習(xí)慣[46-47]。主要稱之為影響sAA分泌的“外因”。

國外大量研究顯示，測試對象在接受考試，特里爾社會壓力測試等社會心理壓力的刺激后，隨著心理壓力的增強，sAA活性也顯著增加[37，48-49]。煙草會抑制淀粉酶活性，因此有吸煙習(xí)慣的人sAA基本活性偏低。物理運動提高應(yīng)激水平，有促進sAA分泌的作用。身體有疾病的人基本的sAA活性會偏高或偏低，有服用腎上腺素促進或阻斷類藥物的將強烈影響體內(nèi)sAA的分泌。飲食作為味覺刺激也將促進sAA的分泌。

2 思考和展望

在國內(nèi)，對脾虛證患者在基礎(chǔ)狀態(tài)下和酸刺激后sAA活性異常的研究，大部分學(xué)者認為與自主神經(jīng)失調(diào)密切相關(guān)，如與副交感神經(jīng)亢進密切相關(guān)[3]，而且，大多研究證實脾虛證患者和動物體內(nèi)存在神經(jīng)遞質(zhì)如乙酰膽堿（Ach）、腎上腺素（E）和去甲腎上腺素（NE）等異常改變的現(xiàn)象[50-52]，但是更為深入、系統(tǒng)的研究自主神經(jīng)調(diào)控sAA分泌機制的鮮有報道。

結(jié)合國內(nèi)外同行研究推測：脾虛證患者存在sAA含量及其糖基化程度異常和自主神經(jīng)系統(tǒng)失調(diào)的事實，然而導(dǎo)致不同疾病間脾虛證患者基礎(chǔ)狀態(tài)下sAA活性異常且研究結(jié)果不一致和酸刺激前后sAA活性比值下降及該比值臨床應(yīng)用重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性不高的原因，與sAA基因表達和分泌調(diào)控密切相關(guān)，其中，編碼sAA的AMY1基因拷貝數(shù)變異直接影響sAA的含量，sAA含量及sAA的N-糖基化程度直接影響sAA的活性，而且sAA的分泌則主要由β-AR介導(dǎo)調(diào)控，另外β-AR還會影響sAA的N-糖基化進而影響其活性。因此，可以通過對脾虛證患者AMY1基因拷貝數(shù)、sAA含量和β-AR表達調(diào)控的進行深入的研究，這將有助于對脾虛證sAA活性改變機制的認識，為回答脾虛證sAA活性研究和臨床應(yīng)用存在的問題提供答案。

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（收稿日期：2016-09-22）