王欣月+李思宇+羅芳麗++張微+師維+黃活石+李瑛

摘要：目的 探討復方地芬諾酯復制功能性便秘家兔模型的可行性。方法 模型組采用復方地芬諾酯混懸液經(jīng)口灌胃15 d，空白組予以相應量的蒸餾水灌胃。觀察家兔首粒黑便時間、24 h糞便顆粒數(shù)以及24 h糞便質(zhì)量，以判斷模型的復制情況。結(jié)果 與空白對照組家兔比較，模型組家兔的首粒黑便排出時間明顯延長，糞便重量減輕，糞便顆粒數(shù)減少，并表現(xiàn)出不同程度的精神狀態(tài)的改變。結(jié)論 復方地芬諾酯灌胃可用于制作家兔功能性便秘模型，但在造模過程中要盡量避免各種不利因素的影響。

關(guān)鍵詞：功能性便秘模型；復方地芬諾酯；模型制作

Experimental Research on the Functional Constipation Rabbit Model Duplicated by Compound Diphenoxylate Tablet Lavage

WANG Xin-yue，LI Si-yu，LUO Fang-li，ZHANG Wei，SHI Wei，HUANG Huo-shi，LI Ying

（School of Acupuncture and Tuina，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 610075，Sichuan，China）

Abstract：Objective To explore the feasibility on the functional constipation rabbit model duplicated by compound diphenoxylate tablet.Methods Mixed suspension of compound diphenoxylate tablet was used to conduct gavage through the mouth for 15 days in the model group. At the same time ，the control group was given the correspounding amount of distilled water lavage.The discharging time of the first grain of black feces，fecal weight and grains in 24 hours were observed to judge the replication of the model.Results Compared with the control group，the discharging time of the first grain of black feces of the model group was prolonged obviously.The fecal weight and grains were reduced，and showed different degrees of mental status change.Conclusion The gavage of compound diphenoxylate tablet can be used to make functional constipation rabbit model.However，we should avoid all kinds of unfavorable factors during the experiment.

Key words：Functional constipation rabbit model；Compound diphenoxylate tablet；Model duplication；Animal experiment

功能性便秘（functional constipation，F(xiàn)C），是指無器質(zhì)性病因，沒有組織結(jié)構(gòu)異常或代謝障礙，又排除腸易激綜合征的慢性便秘，是功能性胃腸病最常見的類型之一，主要臨床表現(xiàn)為排便次數(shù)減少、糞便干結(jié)、排便費力等。目前認為它的發(fā)病與結(jié)腸運動功能障礙、肛門直腸功能障礙、精神心理異常等因素有關(guān)[2]。近年來對功能性便秘的機制研究多采用大鼠或者小鼠作為模型動物，鮮有家兔的便秘模型制作。本研究參考了相關(guān)文獻，制作復方地芬諾酯家兔功能性便秘模型，并對其中出現(xiàn)的問題和不利因素進行歸納和探討，報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1實驗動物 4月齡的家兔20只，雌雄各半，體重2.5～3.5kg，購自成都達碩生物科技有限公司（合格證號：0014892），到實驗室后首先進行1 w的適應性喂養(yǎng)。按照隨機數(shù)字表法將家兔分為空白組、模型組2個組，每組10只，分組后每組家兔雌雄各半，體重無顯著性差異。

1.1.2 實驗藥品 復方地芬諾酯（成都第一制藥有限公司，生產(chǎn)批號：1403024）[3]，為止瀉藥，每片含鹽酸地芬諾酯2.5 mg，硫酸阿托品0.025 mg。阿拉伯樹膠粉（Gum arabic powder）（天津市化工有限公司，生產(chǎn)批號：20140725）。100目粉狀活性炭（成都瑞麗神火木炭有限公司，生產(chǎn)批號：20140712）。

1.1.3實驗器材 燒杯、玻棒、導尿管（用于灌胃[12-13]）、開口器、家兔固定器、酒精燈、糞尿分離器、注射器。

1.2實驗方法

1.2.1藥液及墨汁制備 藥液：將復方地芬諾酯片研磨成粉與30℃蒸餾水以1：1的比例配置成復方地芬諾酯混懸液，灌胃前充分搖勻。墨汁：精密稱取阿拉伯樹膠100 g，加入800 ml蒸餾水煮沸至溶液透明；取粉狀活性炭50 g，精密稱定后加入上述溶液中煮沸3次（即文火煮沸后關(guān)火，待溶液冷卻至室溫后再次文火煮沸，如此操作3次），待溶液冷卻至室溫后加蒸餾水定容至1000ml，放于0℃～5℃的冰箱保存，使用前搖勻[4]。

1.2.2家兔便秘模型制作 將家兔分籠喂養(yǎng)，每籠一只，保持室內(nèi)溫度23℃～25℃，室內(nèi)相對濕度50%～70%，室內(nèi)清潔安靜，適應性喂養(yǎng)7 d。適應喂養(yǎng)結(jié)束后，2組均禁食不禁水24 h，進行腸道功能的測定，具體方法如下：采用活性炭溶液灌胃，灌胃容量為10 ml/kg，隨后恢復正常飲食飲水[5]。從灌墨汁的時間開始記錄每只家兔的首粒黑便排出時間以及家兔24 h內(nèi)糞便的粒數(shù)及重量.隨后進行便秘模型的制作，按7.5 mg/kg的劑量對模型組家兔進行地芬諾酯混懸液經(jīng)口灌胃，空白組按照同樣方法抓取捆綁，進行蒸餾水經(jīng)口灌胃。兩組家兔均1次/d，連續(xù)灌胃15 d。然后再次進行腸道功能的檢測。

1.2.3觀測指標 觀察兩組家兔首粒黑便排出時間、24 h內(nèi)排出的糞便的重量及顆粒數(shù)。因有文獻報道[5]禁食禁水可影響動物排便改變或?qū)е卤忝匕l(fā)生，故為排除該因素對家兔的影響，觀察期24 h內(nèi)所有家兔均正常進食飲水。

1.3統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行處理，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗分析組間差異。

2結(jié)果

2.1一般情況 在灌胃15 d后，與空白對照組比較，模型組家兔有明顯的精神狀態(tài)差、食欲不振、動作遲緩、毛發(fā)失澤等癥狀，且死亡率也高于空白對照組。

2.2糞便性狀 模型組家兔糞便顆粒不規(guī)則變小、變干、偏硬，呈便秘型糞便，見圖1；空白對照組家兔糞便顆粒大小均勻、干濕適中、軟硬適中，見圖2。

2.3 兩組檢測指標對比 空白對照組家兔首粒黑便排出時間為（206.00±24.12）min，24 h大便顆粒數(shù)為（312.50±136.56）粒，24 h大便質(zhì)量為（104.20±78.88）g；而模型組家兔首粒黑便排出時間為（296.20±100.33）min，24 h大便顆粒數(shù)（235.00±76.45）粒，24 h大便質(zhì)量為（57.50±15.06）g.兩組家兔的首粒黑便排出時間、24 h大便質(zhì)量、24 h大便顆粒數(shù)均有顯著的統(tǒng)計學差異（P<0.05。

3討論

功能性便秘是指缺乏器質(zhì)性病因，沒有組織結(jié)構(gòu)異?；虼x障礙，又排除腸易激綜合征的慢性便秘[1]。功能性便秘患者可以有糞便硬度增加、排便難度增加、排便不盡感以及排便次數(shù)減少等表現(xiàn)[1]。復方地芬諾酯是一種治療功能性腹瀉的藥物，可以阻滯腸粘膜上的受體，減輕腸道蠕動使腸內(nèi)容物通過延遲，正常狀態(tài)下服用可導致便秘[6]，故很多研究均采用此藥制作便秘模型[5，7-10]。且有研究表明，采用復方地芬諾酯造?？擅黠@延長動物的首粒排便時間，便粒和便量明顯減少，為簡單高效便秘造模方法[11]。本實驗采用復方地芬諾酯灌胃建立家兔功能性便秘模型，使家兔首粒黑便排出時間明顯延長，24 h大便顆粒數(shù)及24 h糞便質(zhì)量均明顯減少，與文獻報道一致[1]，故認為模型建立成功，可用于后續(xù)實驗的模型制作。

既往功能性便秘多以大鼠模型和小鼠模型為主，未見家兔模型的相關(guān)報道，因此對于家兔模型復方地芬諾酯的灌胃劑量不明確。本研究參照《醫(yī)用實驗動物學》中不同動物之間用藥劑量的換算方法：已知A種動物每千克體重用藥劑量，預估算B種動物每千克體重用藥劑量時，先查得折算系數(shù)（W），再按下式計算：B種動物的劑量（mg/kg）=W×A種動物的劑量（mg/kg）。有研究表明[9]大鼠經(jīng)15 mg/kg復方地芬諾酯灌胃2 w后便可出現(xiàn)明顯的便秘表現(xiàn)，且與其他劑量組比較，動物死亡更少。而家兔與大白鼠的折算系數(shù)（W）為0.25，故家兔的用藥量為0.25×15mg/kg=3.75 mg/kg。由于鮮有以家兔制作便秘模型的先例，在本研究的預實驗階段，研究者采用了3.75 mg/kg，5.6 mg/kg，7.5 mg/kg即換算劑量的1倍、1.5倍、2倍三個劑量進行灌胃，最終觀察7.5 mg/kg劑量效果最理想。本實驗在吸取前期預實驗的經(jīng)驗教訓后，家兔的死亡率有所降低，歸納為以下幾點：①熟練掌握插管手法，避免生硬、粗暴地操作，以免造成家兔咽喉黏膜的損傷；②操作時仔細體會插管的走行，切記插入肺內(nèi)，且灌胃時盡量緩慢推進藥物；③改用溫熱的蒸餾水進行藥液的配置及灌胃，盡可能地避免冷水對胃黏膜的刺激可大大降低死亡率；④灌胃操作整個過程，灌胃操作人員盡可能地無菌操作。

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編輯/申磊