王樂新??+陳丹萍??高天祎

摘要：用吸收光譜法研究戊唑醇與人體血清之間的相互作用。戊唑醇溶液在221、326、566 nm處有明顯的特征吸收峰，血清水溶液在278 nm處有明顯的特征吸收峰。當(dāng)血清樣本中加入不同濃度的戊唑醇藥液后，血清的特征吸收峰出現(xiàn)衰減現(xiàn)象，而且在可見區(qū)域內(nèi)逐漸出現(xiàn)戊唑醇溶液的特征吸收峰。利用Matlab對血樣中戊唑醇藥液濃度值與326、566 nm處吸光度進行線性函數(shù)擬合，相關(guān)系數(shù)均超過0.98，擬合誤差都小于0.000 6，此結(jié)果說明線性擬合效果很好，并且在波長為566 nm處的函數(shù)模型比波長為326 nm處的函數(shù)模型擬合效果更好。因此，566 nm處的波長可作為血樣中戊唑醇農(nóng)藥殘留的特征吸收峰。此結(jié)果可為血樣中農(nóng)藥殘留吸收光譜檢測作參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：吸收光譜；戊唑醇；血清；Matlab；農(nóng)藥中毒；急救

中圖分類號：O433.4 文獻標(biāo)志碼：

文章編號：1002-1302（2016）08-0320-04

戊唑醇化學(xué)名（RS）-1-（4-氯苯基）-4，4-二甲基-3-（1H-1，2，4三唑-1-基甲基）戊-3-醇，化學(xué)式為 C16H22ClN3O。該品為無色晶體，是一種低毒、高效、廣譜、內(nèi)吸性三唑類殺菌農(nóng)藥，具有保護、治療、鏟除三大功能，殺菌譜廣、持效期長，適用于重要經(jīng)濟作物的種子處理或葉面噴撒，可有效防治禾谷類作物的多種銹病、白粉病、網(wǎng)斑病、根腐病、赤霉病、黑穗病、種傳輪斑病及早稻紋枯病等[1]，它能夠抑制真菌的麥角甾醇的生物合成，導(dǎo)致病原菌不能形成細胞膜，從而使病菌死亡。它可以在植物組織內(nèi)部轉(zhuǎn)移，殺死植物表面和內(nèi)部的病菌，不僅具有殺菌活性，還可以促進作物生長，是一種值得大力推廣的殺菌劑[2]。

目前，戊唑醇是三唑類殺菌劑中銷售量最高的一種產(chǎn)品，已有多家原藥生產(chǎn)廠，原藥最高含量超過98%，市場前景十分廣闊。近幾年對戊唑醇農(nóng)藥的研究也有很多，如丁蕊艷建立了氣相色譜氮磷檢測器檢測蘋果、水稻及土壤中戊唑醇的分析方法[3]，李洪等為了解戊唑醇在黃瓜和土壤中的殘留狀況及消解動態(tài)，通過田間試驗建立了戊唑醇在黃瓜和土壤中的高效液相色譜分析方法[4]，王漢成等研究了戊唑醇對立枯絲核菌的抑制作用及在水稻上的應(yīng)用[5]。紫外-可見吸收光譜分析方法具有快速、操作簡便、準(zhǔn)確、樣品使用量少等優(yōu)點，可以實現(xiàn)對農(nóng)藥的直接檢測，在醫(yī)學(xué)、制藥、石油化工及環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域已被廣泛應(yīng)用[6-8]。而目前利用此方法對戊唑醇農(nóng)藥檢測研究的相關(guān)文獻很少，所以本研究利用紫外-可見吸收光譜法研究血液與戊唑醇的相互作用規(guī)律，為醫(yī)學(xué)中農(nóng)藥中毒救急提供一定的參考。

1材料與方法

1.1試驗儀器及樣品

試驗研究所用的吸收光譜檢測系統(tǒng)為澳大利亞GBC科學(xué)儀器公司生產(chǎn)的UV-VIS DB-20R紫外-可見分光光度計；試驗樣品：血清樣品由健康人（GLU 4.67 mmol/L，TG 1.37 mmol/L，CHO 5.27 mmol/L）、高血糖（GLU 20.73 mmol/L，TG 0.75 mmol/L，CHO 2.24 mmol/L）、高血脂（GLU 4.56 mmol/L，TG 3.02 mmol/L，CHO 3.91 mmol/L）病人清晨空腹靜脈采血后經(jīng)離心分離后得到（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)校醫(yī)院）；北農(nóng)（海利）涿州種衣劑有限公司生產(chǎn)的6%戊唑醇懸浮種衣劑；實驗室用蒸餾水。

1.2試驗方法

（1）將蒸餾水與戊唑醇農(nóng)藥配制成濃度為0.003%的標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后對所配制的戊唑醇藥液依次進行稀釋，稀釋后的濃度為0.000 12%、0.000 17%、0.000 22%、0.000 27%、0.000 32%、0.000 37%、0.000 41%、0.000 46%、0.000 50%、0.000 54%。

（2）取正常、異常血清樣品按體積1 ∶[KG-3]40的比例配制成水溶液備用。把以上8種不同濃度的戊唑醇藥液分別取 1 mL 加入3 mL含有配制好的正常、異常血液溶液比色皿中，每次加入后都進行充分搖勻，最后得到混合溶液。

（3）試驗利用UV-VIS DB-20R紫外-可見分光光度計對戊唑醇藥液、不同生化指標(biāo)血樣水溶液以及戊唑醇藥液與血液相互作用的變化進行吸收光譜檢測，采樣間隔 0.5 nm，狹縫寬1 nm，掃描速度400 nm/min，進行快速掃描，得到相關(guān)的吸收光譜。

2結(jié)果與分析

2.1戊唑醇的紫外-可見吸收光譜的測定

將蒸餾水與戊唑醇農(nóng)藥配制成不同濃度比的戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)藥液，利用微型注射器取濃度為0.000 37%的藥液3 mL放入比色皿中，用UV-VIS DB-20R進行檢測，測量波長范圍為200～700 nm，檢測結(jié)果如圖1所示，得到戊唑醇溶液在221、326、566 nm處有特征吸收峰，并且從圖中可以看出，在250～300、390～450、500～550 nm之間有3處峰肩存在。

2.2不同生化指標(biāo)血液樣本的吸收光譜

為了對血樣中的藥物殘留作定性分析，要了解農(nóng)藥殘留藥物的吸收特征峰對血樣的吸收特征峰的影響，因此，本試驗研究不同生化指標(biāo)血清樣本水溶液的吸收光譜。將具有不同生化指標(biāo)的血清樣品按體積1 ∶[KG-3]40的比例配制成水溶液，利用UV-VIS DB-20R分光光度計進行檢測吸收光譜。試驗結(jié)果如圖2所示，血清在紫外區(qū)有明顯的特征吸收峰，而且所有血清的特征吸收峰都在278 nm處。由于血清中含有血清蛋白、糖類和無機鹽類等，血清蛋白中又含有色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸，這些氨基酸的存在都在血清溶液吸收光譜上有很好的反應(yīng)，所以所有血清樣品在278 nm處的特征吸收峰可能是由氨基酸引起的。由圖2還可以看出，高血糖血清在278 nm處的峰值比正常血清小，而高血脂血清比正常血清大，高血糖高血脂血清樣本的吸收峰值最小?？赡苁怯裳逯薪M織細胞代謝產(chǎn)物分子和含量變化引起的。

2.3戊唑醇與血清樣本相互作用的吸收光譜

在加入低濃度的戊唑醇藥液后吸光度降低，隨著加入戊唑醇藥液濃度的增加，吸光度又逐漸增加，但是一直低于血清樣本的吸光度值，并且在可見區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)戊唑醇藥液的特征吸收峰[CM（25]。說明血清樣本與戊唑醇藥液發(fā)生了相互作用，從而降低[CM）]

了血清的光照度值。這一結(jié)果可成為血液農(nóng)藥殘留檢測的參考依據(jù)。

其次研究同濃度的戊唑醇藥液對不同生化指標(biāo)血清的影響，圖3給出了濃度為0.000 37%的戊唑醇與正常、異常血清水溶液相互作用的光譜圖。由圖3可以看出，同濃度的戊唑醇加入不同生化指標(biāo)中吸收光譜的變化是相同的，但衰減的程度不同。在吸收峰為278 nm處的高血脂血清衰減程度最大，其次是高血糖血清，再次是高血糖高血脂血清，最后是正常血清?？赡苁怯捎诟哐且环N血液內(nèi)脂肪濃度過高，高血糖是體內(nèi)糖代謝紊亂，酯酶活潑性降低，再加入戊唑醇藥液后，使發(fā)生變化的組織細胞與該藥液發(fā)生反應(yīng)后，產(chǎn)物分子變化不同引起的。但是衰減后的峰值大小順序和圖2一樣，正常血清峰值比高血糖血清大，比高血脂血清小，高血糖高血脂血清樣本的吸收峰值仍然最小。

2.4建模與分析

通過利用紫外-可見吸收光譜技術(shù)對戊唑醇藥液與血樣進行檢測，得出戊唑醇藥液能對血清吸收光譜產(chǎn)生衰減現(xiàn)象，可能是血清中加入戊唑醇后，血清分子與戊唑醇分子發(fā)生相互作用，吸光度降低。又因為不同血清（正常、高血糖、高膽固醇、高甘油三脂血清）中分子濃度不同，所以同一濃度戊唑醇藥液與不同血清相互作用，吸光度衰減的程度會不同。當(dāng)血清中加入不同濃度戊唑醇藥液后吸光度先下降再上升，可能是因為戊唑醇農(nóng)藥有復(fù)雜的分子結(jié)構(gòu)式所產(chǎn)生的，存在閉合的共軛體系產(chǎn)生強吸收峰。但是血清加入高濃度戊唑醇藥液后吸光度增加的程度要遠遠小于血清本身的吸光度。

為了研究農(nóng)藥戊唑醇與血樣之間的關(guān)系，表1列出了峰值為326、566 nm處的血清樣品中含不同濃度戊唑醇與所對應(yīng)的吸光度。以農(nóng)藥的不同濃度C作因變量，以含有農(nóng)藥殘留血樣溶液在特征波長處的吸光度D為自變量，利用Matlab作線性擬合（如圖8、圖9、圖10、圖11所示），得到不同濃度的農(nóng)藥殘留血樣在特征波長處的回歸方程（表2）。

3結(jié)論

本研究結(jié)果表明，在221、326、566 nm處戊唑醇有明顯的特[CM（25][KG3]征吸收峰，而且還有3處峰肩，位置分別在250～300、[CM）]

析。由圖2可以看出，把血清樣本按同比例配成血清水溶液后檢測的吸收光譜，得出正常、高血糖、高血脂、高血糖高血脂的吸收光譜圖基本相同，峰位也相同，都為278 nm，只是具體的峰值不同。由圖3可以看出，同一濃度的戊唑醇加入不同生化指標(biāo)血清中，278 nm處的吸收峰都產(chǎn)生顯著的衰減現(xiàn)象，但是衰減的程度不同，高血脂血清的衰減程度大于正常血清、高血糖血清和高血糖高血脂血清。通過利用Matlab對血樣中戊唑醇藥液濃度值與326、566 nm 處吸光度的關(guān)系建立了線性回歸模型，發(fā)現(xiàn)566 nm處的函數(shù)模型比326 nm處的函數(shù)模型擬合效果更好。該結(jié)果可為吸收光譜檢測不同生化指標(biāo)中農(nóng)藥殘留作參考。為進一步研究農(nóng)藥與血清樣本相互作用吸收光譜檢測作理論依據(jù)，并且在醫(yī)學(xué)上農(nóng)藥中毒急救有重要的參考價值。

參考文獻：

[1]黃新輝，張發(fā)亮，馬淑惠，等. 新型殺菌劑戊唑醇的合成工藝[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（1）：144-192.[HJ1.7mm]

[2]王愛華，徐寶強. 戊唑醇使用方法[J]. 河北果樹，2009（4）：41.

[3]丁蕊艷. 戊唑醇在蘋果、水稻及土壤上的殘留動態(tài)研究[D]. 濟南：山東大學(xué)，2012.

[4]李洪，周游，李偉聲，等. 戊唑醇在黃瓜和土壤中的檢測方法及其殘留動態(tài)研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2014，27（3）：1159-1164.

[5]王漢成，周明國，張艷軍. 戊唑醇對立枯絲核菌的抑制作用及在水稻上的應(yīng)用[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2007，9（4）：357-362.

[6]黃鑫，王隆勇，高乃云. 工業(yè)污水消毒脫色的紫外-可見吸收光譜分析[J]. 光譜學(xué)與光譜分析，2012，32（10）：2739-2742.

[7]邵思蜜，蘇海楠，張熙穎，等. 光譜學(xué)方法對鈍頂螺旋藻異藻藍蛋白活性構(gòu)象研究[J]. 光譜學(xué)與光譜分析，2010，30（6）：1643-1646.

[8]梁晶，馮素玲. 光譜法和分子對接法研究鹽酸氨溴索與人血清白蛋白的相互作用[J]. 光譜學(xué)與光譜分析，2011，31（4）：1020-1024.