趙宇，王艷

吉林市紅十字中心血站，吉林吉林132001

科華核酸血液篩查系統(tǒng)的質(zhì)量控制

趙宇，王艷

吉林市紅十字中心血站，吉林吉林132001

目的保障臨床用血安全，提升血液檢測(cè)水平。方法對(duì)科華核酸血液篩查系統(tǒng)的質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)進(jìn)行總結(jié)、分析。結(jié)果極大降低人為誤差，節(jié)約檢測(cè)成本，保證血液質(zhì)量。結(jié)論推行對(duì)科華核酸血液篩查系統(tǒng)進(jìn)行質(zhì)量控制，可使血液檢測(cè)的管理先進(jìn)化、經(jīng)濟(jì)化。

血液篩查；核酸檢測(cè)；質(zhì)量控制

核酸檢測(cè)(nucleic acid test，簡(jiǎn)稱NAT)是提升血液安全的重要手段[1]，由于獻(xiàn)血員可能攜帶HBV/HCV/HIV等血源性傳染病病毒,為加強(qiáng)血站的安全保障能力,控制血源性疾病通過(guò)輸血傳播,目前國(guó)內(nèi)開展核酸檢測(cè)對(duì)血液進(jìn)行篩查[2]。吉林市紅十字中心血站自2012年便開展核酸血液篩查工作，選用國(guó)內(nèi)規(guī)模最大的體外診斷試劑廠家-科華血篩系統(tǒng)，采取8樣本混合檢測(cè)方案，總結(jié)日常工作中對(duì)核酸檢測(cè)工作產(chǎn)生質(zhì)量影響的關(guān)鍵點(diǎn)，進(jìn)一步規(guī)范檢測(cè)人員對(duì)核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)的操作，降低人為操作因素導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差，積極推進(jìn)全國(guó)血站核酸檢測(cè)工作,以提升血站實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平。

1 檢測(cè)技術(shù)人員要求

1.1 資質(zhì)要求

應(yīng)滿足《血站質(zhì)量管理規(guī)范》和《血站實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范》關(guān)于人員的要求，同時(shí)經(jīng)過(guò)核酸檢測(cè)相關(guān)的專業(yè)培訓(xùn)。（國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委及廠家培訓(xùn)）并取得培訓(xùn)合格證書。

1.2 培訓(xùn)要求

符合資質(zhì)的核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員應(yīng)經(jīng)過(guò)核酸檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn)并獲得合格證書。接受實(shí)驗(yàn)室生物安全、知識(shí)培訓(xùn)考核合格以及廠家的上崗前儀器設(shè)備操作、維護(hù)等的培訓(xùn)，并經(jīng)過(guò)科主任批準(zhǔn)后，方可進(jìn)入核酸實(shí)驗(yàn)室工作。每年至少進(jìn)行培訓(xùn)1次。

1.2.1 理論培訓(xùn)依據(jù)《實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)》《全國(guó)血站核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員培訓(xùn)》《血站核酸檢測(cè)質(zhì)量保證指南》《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》《生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范》《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求（GB19489-2008）》《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則》《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》《血站質(zhì)量管理培訓(xùn)教程》。

1.2.2 技術(shù)培訓(xùn)指導(dǎo)由富有經(jīng)驗(yàn)的具備資質(zhì)的人員以及廠家技術(shù)工程師指導(dǎo)新進(jìn)人員的操作培訓(xùn)。

1.2.3 培訓(xùn)期不少于1個(gè)月，并經(jīng)過(guò)評(píng)估表明合格，由站長(zhǎng)授權(quán)，給予計(jì)算機(jī)相應(yīng)的模塊操作權(quán)限。

2 設(shè)備維護(hù)

①擦拭儀器時(shí)用水或者75%酒精打濕無(wú)紡布，但不要過(guò)濕，避免液體滴落至儀器。②STAR上樣臺(tái)面兩塊金屬板操作中避免人為加壓。開關(guān)前蓋面板時(shí)，雙手對(duì)稱均勻用力，輕開輕關(guān)。當(dāng)儀器開始運(yùn)行后，無(wú)提示不得打開安全面板，也不可移動(dòng)臺(tái)面內(nèi)的任何載架。③向ABI7500擴(kuò)增儀放置PCR擴(kuò)增板時(shí)，需雙手推進(jìn)PCR板基座，輕開輕關(guān)。④半年維護(hù)后，廠家工程師及實(shí)驗(yàn)室工作人員填寫相關(guān)表單并簽字，實(shí)驗(yàn)室工作人員存檔校準(zhǔn)證書，并更換儀器校準(zhǔn)標(biāo)簽。

3 試劑制備

①裂解液在使用前應(yīng)在55℃水浴箱中孵育至晶體完全融化，實(shí)驗(yàn)30 min前取出陰性對(duì)照（NC）、陽(yáng)性對(duì)照（PC）和室內(nèi)質(zhì)控品（QC），平衡至室溫。擴(kuò)增試劑則在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)由-20℃轉(zhuǎn)移至4℃冰箱內(nèi)融化。在配制小劑量試劑時(shí)，均應(yīng)在漩渦混合儀混勻10 s后，在掌心離心機(jī)低速離心5 s。②配制磁珠和去抑制劑時(shí)，應(yīng)注意觀察試劑槽內(nèi)試劑的剩余量，保證一定的基底量；當(dāng)實(shí)驗(yàn)標(biāo)本數(shù)量較少時(shí)，注意要多添加裂解液的量。③室內(nèi)質(zhì)控品、內(nèi)標(biāo)及裂解液不足下次實(shí)驗(yàn)時(shí)，需提前融化備好；移液器槍頭、加樣尖、深孔板、反應(yīng)板等耗材也需提前準(zhǔn)備好。④每周將試劑槽中的試劑徹底更換1次，試劑槽用超純水清洗并晾干。⑤裂解液一定要緩慢顛倒混勻20次以上，倒入試劑槽后需除去泡沫，準(zhǔn)確放置試劑槽的位置。⑥配制陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照及質(zhì)控品時(shí)，應(yīng)勤換手套，避免交叉污染，管壁應(yīng)無(wú)殘留或氣泡，配制質(zhì)控品時(shí)，應(yīng)該選用澄清、足量的陰性血清。⑦在STAR放置磁珠試劑槽載架前，觀察磁珠狀態(tài)是否正常，手工搖勻磁珠。⑧配置反應(yīng)液時(shí)，雙人核對(duì)添加的試劑名稱，混勻并離心反應(yīng)液管。去除氣泡，以免影響加樣。⑨試劑及質(zhì)控品使用后，及時(shí)記錄出庫(kù)，使用前應(yīng)對(duì)試劑、耗材等規(guī)格與批號(hào)進(jìn)行核對(duì)。⑩擴(kuò)增試劑的試劑盒上應(yīng)注明開啟的日期、消耗的人份數(shù)，實(shí)驗(yàn)前觀察試劑量，以準(zhǔn)備待融化的擴(kuò)增試劑的劑量。?擴(kuò)增試劑的試劑盒內(nèi)陽(yáng)性對(duì)照品，應(yīng)放置在標(biāo)本制備區(qū)的冰箱內(nèi)。

4 標(biāo)本制備

①處理標(biāo)本時(shí)，應(yīng)帶乳膠防滑型手套，去除試管帽，擺入載架時(shí)應(yīng)注意輕拿輕放，以防載架翻倒，并注意防止迸濺及交叉污染。②在將匯集標(biāo)本管插入試管載架時(shí)，仔細(xì)核實(shí)標(biāo)本是否存在凝塊、未離心、溶血、乳糜、試管是否破損，標(biāo)本量是否足量等現(xiàn)象，如有以上情況發(fā)生，進(jìn)行相關(guān)處理措施后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。③匯集和提取后的標(biāo)本用一次性保鮮膜覆蓋好，放入2～8℃冰箱中保存，24 h后進(jìn)行相關(guān)醫(yī)療廢物處理。

5 提取方法

①首先打開系統(tǒng)服務(wù)器電腦。②在進(jìn)行提取前，確認(rèn)單檢載架，提取載架，磁力條放置在相應(yīng)軌道上，與卡槽接軌。③在匯集前需觀察加樣尖是否足量，擺放位置是否準(zhǔn)確。匯集后再觀察是否足量并及時(shí)補(bǔ)充。加樣尖載版無(wú)損壞、并卡牢、無(wú)斷裂，300 μL和1 000 μL的加樣尖數(shù)量及位置不要輸錯(cuò)。④匯集前深孔板、污液槽和金屬擋板已安裝好、位置正確（污液槽未錯(cuò)位、未平放、忘放、深孔板未放反）。⑤實(shí)驗(yàn)每次開始前，核對(duì)標(biāo)本數(shù)量、匯集管數(shù)量，單檢的數(shù)量，實(shí)際數(shù)量與電腦中輸入數(shù)量要符合。⑥在進(jìn)行提取實(shí)驗(yàn)前，先觀察是否匯集管加樣足量，未有漏加并推動(dòng)匯集的載架與卡槽接軌。⑦在加入單檢標(biāo)本、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照，質(zhì)控品后，觀察是否加樣足量，待加入裂解液后再次觀察是否加樣足量。⑧不同檢測(cè)項(xiàng)目的反應(yīng)液要按順序擺放，PCR反應(yīng)板放入時(shí)與底座對(duì)齊、位置正確，并觀察深孔板中是否有磁珠。⑨封板前觀察PCR反應(yīng)板是否有殘留的磁珠或加樣量不足。⑩把PCR反應(yīng)板放入擴(kuò)增儀前確認(rèn)放置的方向正確。?ABI750擴(kuò)增儀在使用前需開機(jī)預(yù)熱，使用后要及時(shí)關(guān)機(jī)。?接收編號(hào)為當(dāng)年的4位數(shù)字，同一批實(shí)驗(yàn)中，所有文件的接收編號(hào)須一致，加做實(shí)驗(yàn)時(shí)，末尾順應(yīng)加“01”“02”。?實(shí)驗(yàn)過(guò)程中時(shí)刻保持防污染意識(shí)，勤換手套，至少15 min觀察1次儀器運(yùn)行狀態(tài)，保持確保儀器沒有因報(bào)錯(cuò)而停止運(yùn)行。?當(dāng)實(shí)驗(yàn)完成后，選中所有擴(kuò)增曲線及標(biāo)本孔，再發(fā)出報(bào)告。

6 防污染

（1）預(yù)防為主，嚴(yán)格分區(qū)，特定操作，專區(qū)專用。（2）每天觀察3個(gè)區(qū)域的溫度、濕度、壓力等是否在正常范圍內(nèi)。（3）嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室分區(qū)，不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域的可移動(dòng)物品應(yīng)有清晰的區(qū)域標(biāo)識(shí)，以防混用。（4）每月實(shí)施暴露表面有無(wú)核酸擴(kuò)增產(chǎn)物污染的監(jiān)測(cè)。（5）實(shí)驗(yàn)室人員和物品的工作流向應(yīng)為：試劑制備區(qū)、樣本制備區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)，為單向工作流向，不得逆向流動(dòng)。（6）實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，如處理標(biāo)本、對(duì)照品，及手套被污染時(shí)，應(yīng)及時(shí)更換手套，避免和減少在已開帽的標(biāo)本、試劑和耗材上空區(qū)域說(shuō)話和活動(dòng)。（7）廢液和醫(yī)療垃圾應(yīng)及時(shí)清離實(shí)驗(yàn)室，保持臺(tái)面、地面的清潔，紫外燈照射1 h以上，實(shí)驗(yàn)室要及時(shí)通風(fēng)，必要時(shí)進(jìn)行酒精噴霧沉降。（8）處理陽(yáng)性標(biāo)本、陽(yáng)性對(duì)照品和質(zhì)控品時(shí)要小心處理，防止崩濺，及時(shí)核對(duì)好標(biāo)簽，勤換手套，并注意避免加樣槍和掌上離心機(jī)的污染。（9）非該實(shí)驗(yàn)室工作人員因工作需要，經(jīng)允許方可進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，有該實(shí)驗(yàn)室人員全程陪同并做好個(gè)人防護(hù)。（10）封板前應(yīng)換新的手套，避免對(duì)PCR反應(yīng)板說(shuō)話，整個(gè)過(guò)程盡量不要接觸封板膜PCR反應(yīng)板表面，保證每個(gè)孔都封閉好，避免污染。（11）定期進(jìn)行環(huán)境監(jiān)控，以判斷實(shí)驗(yàn)時(shí)是否存在污染，清潔消毒效果是否良好，預(yù)防污染的發(fā)生及假陽(yáng)性結(jié)果的產(chǎn)生。（12）核酸實(shí)驗(yàn)室污染時(shí)的糾正措施。①試劑污染：更換新的試劑重新檢測(cè)評(píng)估。②標(biāo)本污染：重新采樣進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)估標(biāo)本前的處理環(huán)節(jié)。③設(shè)備污染：設(shè)備整體消毒清潔或維護(hù)。④產(chǎn)物污染：全面清潔消毒實(shí)驗(yàn)室，儀器設(shè)備所有與實(shí)驗(yàn)有關(guān)物品。

7 討論

2016年我國(guó)施行全國(guó)性覆蓋核酸檢測(cè)的血液篩查模式[3]。但由于核酸檢測(cè)技術(shù)對(duì)設(shè)備、實(shí)驗(yàn)室條環(huán)境條件、操作人員技術(shù)和實(shí)驗(yàn)室管理等要求較高，而我國(guó)各血站的能力水平差異較大，若在檢測(cè)過(guò)程中對(duì)質(zhì)量控制不當(dāng)，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性等情況，甚至發(fā)生實(shí)驗(yàn)室污染等問(wèn)題。而通過(guò)該文探索，基本建立了與國(guó)內(nèi)先進(jìn)水平相接軌的血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制體系，建設(shè)了一個(gè)規(guī)范化的核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室供血站同仁參考和發(fā)展。

[1]李金明.實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社, 2012:135-162.

[2]李金明.我國(guó)血站核酸檢測(cè)及質(zhì)量管理的現(xiàn)狀與展望[J].中國(guó)輸血雜志,2012,25(10):933-934.

[3]國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).全面推進(jìn)血站核酸檢測(cè)工作實(shí)施方案(2013—2015年)[S].2013.

Quality Control of Kehua Nucleic Acid Blood Screening System

ZHAO Yu,WANG Yan
Jilin Red Cross Blood Center,Jilin,Jilin Province,132001 China

ObjectiveTo ensure the clinical medication safety and improve the blood test level.MethodsThe key points of quality control of Kehua Nucleic acid blood screening system were summarized and analyzed.ResultsThe human errors were greatly reduced,the test cost was saved and the blood quality was ensured.ConclusionThe promotion of quality control of Kehua Nucleic acid blood screening system can make the blood test management advanced and economic.

Blood screening;Nucleic acid test;Quality control

R446

A

1672-5654（2017）01（c）-0049-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.03.049

2016-10-24）

趙宇（1982.12-），女，吉林長(zhǎng)春人，研究生，主管檢驗(yàn)技師，研究方向：生物化學(xué)與分子生物學(xué)，E-mail:175961919 @qq.com。