蔡雙雙 ， 鄭國紅 ， 劉發(fā)志

(湖北三峽職業(yè)技術(shù)學(xué)院農(nóng)學(xué)院 ， 湖北 宜昌 443000)

2例犬傳染性性病腫瘤的病理學(xué)診斷

蔡雙雙 ， 鄭國紅 ， 劉發(fā)志

(湖北三峽職業(yè)技術(shù)學(xué)院農(nóng)學(xué)院 ， 湖北 宜昌 443000)

犬傳染性性病腫瘤(CTVT)，也被稱為犬傳染性交媾性腫瘤和Sticker′s肉瘤，是一種能夠在犬之間主要通過性傳播的一種傳染性生殖道腫瘤疾病，本病是自然發(fā)生的同種移植性腫瘤，其形成原因目前尚不清楚[1]。一般發(fā)生于性成熟的有交配經(jīng)歷的年青犬，多發(fā)年齡在 2～ 5 歲，沒有交配經(jīng)歷的幼犬或青年犬等還未發(fā)現(xiàn)過有該病的報道[2-3]。CTVT 轉(zhuǎn)移不常見，但有報道可轉(zhuǎn)移入局部淋巴結(jié)、腦、眼睛、鼻丸以及胸腹部的內(nèi)臟器官[1，4]，多見于幼犬和免疫缺陷的犬。本試驗將2例疑似犬傳染性性病腫瘤組織進行病理組織學(xué)觀察，并對Vimentin、CK、Lysomes和AAT四個指標(biāo)進行了免疫組織化學(xué)染色，結(jié)合臨床癥狀對該腫瘤進行病理學(xué)診斷，從而豐富犬傳染性性病腫瘤的臨床資料。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料 本試驗中雌性犬病例由主人送往深圳市福華寵物醫(yī)院就診的金毛犬。另一例雄性犬由主人送往武漢市明星寵物醫(yī)院就診的日本秋田犬，切除的疑似腫瘤組織送往華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院病理實驗室制作蠟塊并保存。

1.2 試驗試劑 鼠抗CK抗體(1∶200)，鼠抗Vimentin抗體(1∶200)，DAB顯色液(固體)，SABC試劑盒，5%BSA封閉液，均購自武漢博士德生物工程有限公司；兔抗Lysomes抗體(1∶200)，兔抗AAT(1∶200)抗體，購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 臨床診斷 通過對病犬的臨床檢查，了解發(fā)病過程，了解疑似腫瘤的位置，初步診斷后，經(jīng)主人同意切除腫瘤。并對切除腫瘤觀察病理特征。

1.3.2 腫瘤組織的病理學(xué)檢查 將切除的腫塊放在10%福爾馬林溶液中固定3 d后取材、脫水、浸蠟、包埋。并將組織切成3微米厚度的切片。一部分進行H.E.染色，觀察病理變化；另一部分進行免疫組織化學(xué)法(SABC法)染色，染色指標(biāo)包括Vimentin、CK、Lysomes和AAT。H.E.染色采用常規(guī)的染色方法，免疫組織化學(xué)SABC染色方法參考武漢博士德生物工程有限公司的即用型SABC免疫組化試劑盒內(nèi)說明書。

1.3.3 采圖與觀察 將H.E.染色切片和免疫組化切片在顯微鏡下觀察，并通過NIS-Elements高清晰度彩色圖文分析系統(tǒng)配合Nikon80i生物光學(xué)顯微鏡對典型病變進行顯微采圖。

2 結(jié)果

2.1 雌性金毛犬的臨床癥狀和病理學(xué)檢查結(jié)果 本病例為兩歲雌性金毛犬，患犬在就診前2個月分娩，分娩后開始陰道流血不止，雖經(jīng)治療，但是沒有明顯療效。對陰道部進行檢查發(fā)現(xiàn)有疑似腫瘤腫塊，對腫塊進行切除。

對疑似腫瘤組織的病理組織學(xué)檢查可見瘤組織位于陰道黏膜(見中插彩版圖1A)，瘤組織內(nèi)血管豐富，瘤細(xì)胞多呈圓形或卵圓形，細(xì)胞體積大小不一，細(xì)胞核大且多為圓形或卵圓形，細(xì)胞質(zhì)較豐富(見中插彩版圖1B)。

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，瘤組織內(nèi)瘤細(xì)胞的Vimentin表達(dá)陽性(見中插彩版圖1C)，CK表達(dá)呈陰性(見中插彩版圖1D)，Lysomes表達(dá)呈強陽性(見中插彩版圖1E)，AAT呈部分表達(dá)陽性(見中插彩版圖1F)。

A：瘤組織位于陰道黏膜下(H.E.染色)； B：瘤細(xì)胞排列密集，多為圓形(H.E.染色)； C：瘤細(xì)胞的Vimentin表達(dá)陽性(DAB-IHC)； D：瘤細(xì)胞CK表達(dá)呈陰性(DAB-IHC)； E：瘤細(xì)胞Lysomes表達(dá)呈強陽性(DAB-IHC)； F：瘤細(xì)胞AAT呈部分表達(dá)陽性(DAB-IHC)。

2.2 雄性秋田犬的臨床癥狀和病理學(xué)檢查結(jié)果 本病例為3歲雄性日本秋田犬。患犬就診時精神尚可，食欲正常，行動亦未見異常，但見病犬包皮口的皮毛上有血跡，并且龜頭部有滴血現(xiàn)象。經(jīng)檢查發(fā)現(xiàn)該犬陰莖根部有直徑約3 cm的腫物，懷疑為腫瘤。經(jīng)與主人溝通同意手術(shù)切除陰莖。手術(shù)切除陰莖后可清楚地看到腫瘤，瘤體基本呈粉紅色，與包皮及陰莖的顏色一致。表面呈菜花樣，分葉明顯，質(zhì)地脆而易脫落，局部有出血和壞死(見中插彩版圖2A)。

對疑似腫瘤組織的病理組織學(xué)檢查可見瘤組織位于皮膚表皮下，瘤細(xì)胞多呈圓形或卵圓形，細(xì)胞體積大小不一，細(xì)胞核為圓形或卵圓形，細(xì)胞質(zhì)較豐富(見中插彩版圖2B)。

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，瘤組織內(nèi)瘤細(xì)胞的Vimentin表達(dá)陽性(見中插彩版圖2C)，CK表達(dá)陰性(見中插彩版圖2D)，部分瘤細(xì)胞Lysomes表達(dá)陽性(見中插彩版圖2E)，AAT呈強陽性表達(dá)(見中插彩版圖2F)。

A：瘤組織位于皮膚表皮下(H.E.染色)； B：瘤細(xì)胞排列密集，多為圓形(H.E.染色)； C：瘤細(xì)胞的Vimentin表達(dá)陽性(DAB-IHC)； D：瘤細(xì)胞CK表達(dá)呈陰性(DAB-IHC)； E：部分瘤細(xì)胞Lysomes表達(dá)呈陽性(DAB-IHC)； F：瘤細(xì)胞AAT呈強陽性表達(dá)(DAB-IHC)

3 討論

犬的傳染性性病腫瘤組織呈大小不一的結(jié)節(jié)狀，有些結(jié)節(jié)融合后形成菜花樣結(jié)構(gòu)。其主要生長在母犬的陰蒂窩、陰道內(nèi)壁和外陰表面，或生長在公犬的包皮內(nèi)側(cè)面和陰莖上。母犬表現(xiàn)為陰道長時間持續(xù)性滴血，十分容易與發(fā)情相混淆，但其不愿意交配。公犬主要表現(xiàn)為包皮口有淡紅色血性分泌物，在其包皮內(nèi)側(cè)或陰莖上會出現(xiàn)與母犬一樣形態(tài)的增生物。本文中兩例病犬的臨床表現(xiàn)和眼觀病變與文獻(xiàn)報道一致[5-7]，可以診斷為傳染性性病腫瘤。

通過對大量的CTVT對溶菌酶和AAT的表達(dá)情況分析，證實了這兩個標(biāo)記可以應(yīng)用在CTVT，它們用于鑒別診斷是有用的，因為他們的表達(dá)可以排除淋巴瘤、無色素性黑色素瘤、低分化癌、低分化的肥大細(xì)胞瘤(Mozosetal,1996；Perezetal,1998)。

實驗中CTVT對波形蛋白的表達(dá)呈陽性，對角蛋白的表達(dá)呈陰性。這些結(jié)果與以前的研究結(jié)果是一致的。因為9/10的淋巴瘤不表達(dá)波形蛋白，所以這種抗體可以用來鑒別生殖器外的CTVT和某些類型的淋巴瘤。角蛋白和波形蛋白的聯(lián)合應(yīng)用可以用來鑒別外陰CTVT和低分化癌[4，8]。

據(jù)實驗結(jié)果可知，該腫瘤對溶菌酶，AAT，波形蛋白特異性免疫染色的反應(yīng)為陽性，對角蛋白的免疫染色為陰性，表明該腫瘤細(xì)胞來源于組織細(xì)胞。通過對該病例中病犬的臨床癥狀，血常規(guī)檢查，生化檢驗以及病理學(xué)診斷，可以確診該腫瘤為傳染性性病腫瘤。

本實驗立足于寵物臨床實際病例的診斷，運用實驗室免疫組化診斷的方法對其進行確診，大大提高了臨床腫瘤病例診斷的科學(xué)性，具有較大的臨床價值和意義。

志謝：深圳市福華寵物醫(yī)院和武漢市明星寵物醫(yī)院提供腫瘤病例資料。

[1] Perez Jose, Day Michael J, Mozos Elena.Immunohistochemical study of the local inflammatory infiltrate in spontaneous canine transmissible venereal tumor at different stages of growth[J].Veterinary Immunology and Immunopathology, 1998，164:133-147.

[2] 劉占斌，戴宗浩，龔劍鋒，等.犬的傳染性性病腫瘤[J].中國工作犬業(yè)，2008，12：38-39.

[3] 應(yīng)璐，胡延春.犬傳染性交媾性腫瘤病例[J].中國獸醫(yī)雜志，2005，41(5): 38.

[4] Marchal T, Chabanne L, Kaplanski C,etal．Immunophenotype of the canine transmissible venereal tumor[J].Veterinary Immunology and Immunopathology, 1997，57:1-11.

[5] 張信軍，陳靜，徐劍蓉.犬傳染性性病腫瘤的診治[J].畜牧與獸醫(yī)，2014，46(4):98-100.

[6] 李培德，侯鳳香，胡霖，等.診治犬傳染性性病腫瘤[J].中國獸醫(yī)雜志，2015，51(6)：86-87.

[7] 董悅農(nóng)，袁占奎，楊萬蓮.犬轉(zhuǎn)移性性腫瘤的治療[J].中國獸醫(yī)雜志，2005，41(5):34-35.

[8] Mozos E, Mendez A, Gomez-Villamandos J C,etal. Immunohistochemical Characterization of Canine Transmissible Venereal Tumor[J].Veterinary Pathology,1996,33:257-263.

S858.292

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0529-6005(2017)08-0076-02

2017-03-20

蔡雙雙(1967-)，女，教授，本科，主要從事動物藥理、動物疫病防治的教學(xué)和技術(shù)推廣工作，E-mail：541311891@qq.com