黃翠琴 ， 陳仁鋒 ， 王 琨 ， 溫福利 ， 王壽昆 ， 楊小燕

(1.龍巖學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院 福建省家畜傳染病防治與生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 ， 福建 龍巖 364012 ； 2.福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 福建省動(dòng)物藥物工程實(shí)驗(yàn)室 ， 福建 福州 350002 ; 3.福建龍巖閩雄生物科技有限公司 ， 福建 龍巖 364000)

弓形蟲(Toxoplasmagondii)是感染包括鳥類、人類及海洋獸類在內(nèi)的幾乎所有溫血?jiǎng)游锏臋C(jī)會(huì)致病性原蟲。該病呈全球范圍流行，全世界約有1/3的人感染，嚴(yán)重危害人類健康。衣原體(Chlamydia)是一類專性胞內(nèi)寄生的革蘭陰性菌，能夠引起動(dòng)物包括腸炎、肺炎、關(guān)節(jié)炎、腦炎、結(jié)膜炎、不孕不育甚至流產(chǎn)等多種臨床病癥，人類感染也可導(dǎo)致失明及呼吸道和泌尿生殖道的多種病癥，鸚鵡熱衣原體感染也可導(dǎo)致人死亡。福建省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所擁有全省最大的獼猴養(yǎng)殖及實(shí)驗(yàn)基地，定期對(duì)獼猴病原體的調(diào)查及凈化工作，將有利于獼猴物種的保存及今后科學(xué)實(shí)驗(yàn)工作。弓形蟲病和衣原體病均缺乏明顯的臨床癥狀且危害極大，給患病動(dòng)物的診斷帶來極大的挑戰(zhàn)，因此，弓形蟲及衣原體感染的調(diào)查顯得尤其重要。本試驗(yàn)采用改良凝集試驗(yàn)(MAT)和正向間接血凝試驗(yàn)(IHA)，分別對(duì)福建省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所123只實(shí)驗(yàn)獼猴血清進(jìn)行弓形蟲抗體(IgG)和衣原體抗體(IgG)檢測，為綜合防治獼猴衣原體病及弓形蟲病提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 檢測動(dòng)物血樣 采集福建省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所實(shí)驗(yàn)獼猴血液123份。無菌采集動(dòng)物的靜脈血，分離血清后-20 ℃保存。

1.2 檢測試劑 弓形蟲改良凝集試驗(yàn)(MAT)試劑盒(由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所朱興全教授惠贈(zèng))，衣原體(IHA)抗體檢測試劑盒，購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.3 主要儀器 臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭公司生產(chǎn))，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱、96孔U型有機(jī)玻璃反應(yīng)板、96孔V型(110°)有機(jī)玻璃反應(yīng)板、移液槍一套(德國Eppendorf公司)；漩渦混勻器、掌上離心機(jī)、超凈工作臺(tái)。

1.4 方法

1.4.1 弓形蟲改良凝集試驗(yàn)(MAT) 分別設(shè)置陰性和陽性對(duì)照，陽性抗體滴度大于1∶200說明本試驗(yàn)有效，被檢血清抗體效價(jià)達(dá)到或大于1∶20者判為陽性，無藍(lán)色沉淀為陽性，有藍(lán)色沉淀為陰性。

1.4.2 衣原體正向間接血凝試驗(yàn)(IHA) 在96孔V型(110°)有機(jī)玻璃反應(yīng)板上進(jìn)行血清中的衣原體抗體的檢測。操作步驟和結(jié)果判定嚴(yán)格按照衣原體IHA抗體檢測試劑盒說明書進(jìn)行。在陰、陽性及空白對(duì)照、對(duì)照各孔均成立的條件下，對(duì)待檢血清進(jìn)行判定：待檢血清1∶4孔出現(xiàn)“+”以下者為陰性；1∶4孔“++”至1∶16孔“+”以下者為可疑；1∶16孔出現(xiàn)“++”以上者為陽性。

1.4.3 數(shù)據(jù)分析 弓形蟲抗體和衣原體抗體滴度分布采用Excel 2010分析。

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)獼猴弓形蟲與衣原體抗體陽性率分別為4.88%(6/123)和3.25%(4/123)。弓形蟲與衣原體抗體總陽性率差異不顯著(P>0.05)。

弓形蟲抗體滴度在1∶20～1∶40之間，衣原體抗體滴度均在1∶16。弓形蟲與衣原體抗體的平均滴度(幾何平均數(shù))分別為23.47和17.00，方差值分別為5.16和1.00，弓形蟲與衣原體抗體滴度的方差值均小于平均值，其滴度分布為均勻分布。

3 討論

本試驗(yàn)采用MAT方法調(diào)査了福建省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所獼猴弓形蟲抗體陽性率為4.88%，抗體滴度在1∶20～1∶40之間，該結(jié)果高于廣西和廣東非人靈長類實(shí)驗(yàn)中心獼猴陽性率0%(0/120)和2.1%(5/240)[1]。野生動(dòng)物弓形蟲陽性率不僅與動(dòng)物種屬有關(guān)，主要還在于飼養(yǎng)管理，獼猴主要通過食入含有弓形蟲包囊的肉類而感染弓形蟲病[2]。

衣原體是一種可在人和多種動(dòng)物間廣泛傳播的病原體，并引起人的健康危害及對(duì)多數(shù)瀕臨滅絕的野生動(dòng)物造成巨大的威脅。正向間接血凝實(shí)驗(yàn)(IHA)是常用的衣原體檢測方法之一。國內(nèi)對(duì)野生動(dòng)物感染衣原體的報(bào)道較少，本研究運(yùn)用IHA方法對(duì)獼猴感染衣原體進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，獼猴衣原體陽性率達(dá)3.25%，衣原體抗體滴度均在1∶16。

弓形蟲與衣原體抗體滴度的方差值均小于平均值，其滴度分布為均勻分布，說明實(shí)驗(yàn)獼猴體內(nèi)感染弓形蟲與衣原體相對(duì)穩(wěn)定。定期對(duì)獼猴弓形蟲與衣原體的調(diào)查及凈化工作，將有利于獼猴物種的保存及今后科學(xué)實(shí)驗(yàn)工作。總之，本次血清學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，福建省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所實(shí)驗(yàn)獼猴存在一定程度的弓形蟲和衣原體感染，需采取措施進(jìn)行預(yù)防或治療；該結(jié)果也豐富了國內(nèi)實(shí)驗(yàn)獼猴弓形蟲病和衣原體病的流行病學(xué)數(shù)據(jù)。

[1] Li H, Yan C, Li J,etal. Seroprevalence ofToxoplasmagondiiin Bred Cynomolgus Monkeys (Macaca fascicularis) in China[J]. Journal of parasitology, 2010, 96(4): 807-808.

[2] Zarnke R L, Dubey J P, Kwok O C,etal. Serologic survey forToxoplasmagondiiin selected wildlife species from Alaska[J]. Journal of wildlife diseases, 2000, 36(2): 219-224.