楚紅英，李玉靜，龐宏建

（黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南開封475004）

分光光度法對(duì)大蒜中磷、鉻含量的測定

楚紅英，李玉靜，龐宏建

（黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南開封475004）

對(duì)大蒜進(jìn)行濕法、干法消解處理后，采用磷鉬藍(lán)分光光度法，選擇700 nm為檢測波長，測定大蒜中磷的含量；采用二苯碳酰二肼做顯色劑，選擇540 nm為檢測波長，測定大蒜中鉻的含量。結(jié)果表明，采用濕法消解的蒜中，磷、鉻的含量分別為2.471mg／kg，0.401mg／kg，采用干法消解的蒜中，磷、鉻的含量分別為2.558mg／kg，0.418mg／kg。

分光光度法；大蒜；磷；鉻；含量測定

0　引言

大蒜（Allium sativum L）又名葫、葫蒜，是百合科蔥屬多年生草本植物［1］。其味辛辣、性溫和，可作為調(diào)味類蔬菜?！秳e錄》《古今注》《普濟(jì)方》《本草綱目》等均有記載，大蒜具有“通五臟、達(dá)諸竅、去寒濕、避邪惡、消臃腫、化積食”等功能［2－3］。大蒜具有廣譜類抑菌作用。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，大蒜對(duì)葡萄球菌、化膿性鏈球菌、肺炎雙球菌、痢疾桿菌、大腸桿菌等均有殺滅作用，具有降血壓、降膽固醇、降血脂、抗衰老、抗血栓形成、防治糖尿病等功能，此外還有抗氧化、抗癌、抗突變、抗氣喘、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)活性。大蒜可以減少各種組織和器官，如皮膚、乳房、結(jié)腸、食道、前列腺、膀胱、肺、肝及胃等患惡性腫瘤或癌癥的風(fēng)險(xiǎn)［4］。大蒜中的一些有機(jī)硒、有機(jī)鍺化合物、類固醇皂苷類物質(zhì)和酚類物質(zhì)的抗癌活性也較強(qiáng)［5］。大蒜的獨(dú)特藥用和保健功能源于其化學(xué)成分。大蒜的揮發(fā)性化合物，也具有生物活性，包括脂溶性有機(jī)硫化物和硫代亞磺酸酯類等含硫化合物［6］。

磷為人體內(nèi)宏觀元素［7］，它是所有細(xì)胞中的核糖核酸、膠氧核糖酸構(gòu)成元素之一，對(duì)生物體的遺傳代謝、生長發(fā)育、能量供應(yīng)等方面都是不可缺少的。三價(jià)鉻是人體必需的微量元素，能夠參與糖類及脂類的代謝，能使胰島素增效。人體三價(jià)鉻缺乏時(shí)，會(huì)導(dǎo)致粥樣硬化癥、糖尿病、膽結(jié)石、胰島素失常等疾?。?］。

本研究以大蒜作為研究對(duì)象，以濕法、干法消解樣品，測定大蒜中磷、鉻的含量。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1試劑與儀器

實(shí)驗(yàn)所用大蒜為河南杞縣大蒜。

實(shí)驗(yàn)所用試劑包括：磷酸二氫鉀、硫酸、抗壞血酸、鉬酸銨、氫氧化鈉、二苯碳酰二肼、重鉻酸鉀、濃硫酸、濃硝酸，均為分析純；實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)所用儀器包括：PB1502－L型分析天平（瑞士梅特勒－托利多公司生產(chǎn)）、ZRD－8210電熱風(fēng)干燥箱（上海智誠分析儀器制造有限公司生產(chǎn)）、電子萬用爐（北京市永光明醫(yī)療儀器廠生產(chǎn)）、可見分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司生產(chǎn)）、搗碎機(jī)（江蘇金壇市億通電子有限公司生產(chǎn)）。

1.2溶液的制備

1.2.1磷標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取經(jīng)過干燥的磷酸二氫鉀0.2170 g溶于適量的水，移入1 000mL的容量瓶中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的硫酸5mL，再用水稀釋至標(biāo)線。該溶液1mL含50μg磷。

1.2.2鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取經(jīng)過干燥的重鉻酸鉀0.2829 g溶于適量的水，溶解后，轉(zhuǎn)移至1 000mL容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線。用吸量管吸取上述重鉻酸鉀溶液5.00mL置于500mL容量瓶中，定容，所得濃度為1μg／mL的六價(jià)鉻。

1.3實(shí)驗(yàn)原理

（1）根據(jù)朗伯—比爾定律A＝εbc，當(dāng)入射光波長λ及光程b一定時(shí)，在一定濃度范圍內(nèi)，有色物質(zhì)的吸光度A與該物質(zhì)的濃度c成正比［9］。

（2）將鉻用硝酸氧化為六價(jià)鉻。在微酸性條件下，六價(jià)鉻與二苯碳酰二肼作用生成紫紅色的配合物，其顏色的深淺與六價(jià)鉻的濃度成正比［10］。

（3）將樣品中的磷全部氧化為正磷酸鹽。在酸性條件下，正磷酸鹽與鉬酸鹽、酒石酸銻氧鉀反應(yīng)，生成磷鉬雜多酸，被抗壞血酸還原，生成藍(lán)色配合物，其顏色的深淺與正磷酸鹽的濃度成正比［8］。

1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

1.4.1磷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在8支50 mL的比色管中分別加入濃度為50μg／mL的磷標(biāo)準(zhǔn)溶液0 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.30m L、0.40m L、0.50mL、0.60mL、0.70m L，補(bǔ)水至25mL，再向各比色管中加入1.00mL濃度為10%的抗壞血酸，混勻，放置0.5min，繼續(xù)加入2.00mL鉬酸銨溶液，以水定容至刻度，搖勻，放置15min，于700 nm波長處，以水為參比，測定吸光度值。以吸光度值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)樣品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制磷的標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示。求得線性回歸方程為A＝0.442c－0.0008，濃度在0～0.7mg／L之間呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r＝0.9999（n＝8）。

圖1　磷標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Phosphorus standard curve

1.4.2鉻標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在6支50 mL的比色管中分別加入濃度為1 μg／mL的鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液0mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL，補(bǔ)水至25mL，向各比色管中加入硫酸（1＋1）0.50mL，磷酸（1＋1）0.50mL，再加入濃度為1%的二苯碳酰二肼2.00mL，并以水定容至刻度，搖勻，放置5～10min，在540 nm波長處測定，以水為參比，測定吸光度值。以吸光度值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)樣品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖2所示。求得線性回歸方程為A＝0.0015c＋0.0025，濃度在0～200μg／L之間呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r＝0.9990（n＝6）。

圖2　鉻標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Chrom ium standard curve

1.5樣品的處理

將大蒜洗滌、去皮后，瀝干，用搗碎機(jī)搗碎，備用。采用濕法消化和干法灰化對(duì)樣品進(jìn)行處理。

（1）樣品濕法消化。稱取大蒜樣品5.0000 g于潔凈的250mL三角瓶中，放入沸石，加入10mL濃硝酸和4mL濃硫酸，用小燒杯蓋口，靜置過夜。然后，將錐形瓶放在電爐上煮沸至棕色，冷卻，逐滴加一定量濃硝酸，再煮沸，再冷卻，反復(fù)多次，直到溶液保持淡黃色或無色［11～12］。若有沉淀，進(jìn)行過濾，用水清洗，定容至50mL容量瓶中，作為儲(chǔ)備液，備用，同時(shí)做空白對(duì)照。

（2）樣品干法灰化。精確稱取大蒜樣品5.0000g，置于潔凈瓷坩堝中，于電爐上小火炭化至無煙后，轉(zhuǎn)移入至馬弗爐中，（550±25）℃繼續(xù)灰化，直至無碳粒為止［11~12］。然后，用10mL硝酸的（1＋4）溶解灰分，無損失轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，作為儲(chǔ)備液，備用。同時(shí)，做空白對(duì)照。

2　結(jié)果與討論

2.1大蒜中磷的測定

從樣品儲(chǔ)備液中吸取5.00 m L到50 m L比色管中（每個(gè)樣品平均做3次），補(bǔ)水至25 mL，向比色管中加入1.00 mL濃度為10%的抗壞血酸，混勻，放置0.5min，繼續(xù)加入2.00mL鉬酸銨溶液，以水定容至刻度，搖勻，放置15min，于700 nm波長處測定吸光度值。將吸光度值代入線性回歸方程，計(jì)算出大蒜中磷的含量。平行測定5個(gè)樣品，結(jié)果如表1所示。

表1　大蒜中磷的含量Fig.1 Phosphorus con tent in garlic

2.2大蒜中鉻的測定

從樣品儲(chǔ)備液中吸取5.00mL到50mL比色管中（每個(gè)樣品平均做3次），補(bǔ)水至25mL，向比色管中加入硫酸（1＋1）0.50m L，磷酸（1＋1）0.50mL，再加入1%的二苯碳酰二肼2.00mL，以水定容至刻度，搖勻，放置5～10min，在540 nm波長處測定其吸光度值。將吸光度值代入線性回歸方程，計(jì)算出大蒜中鉻的含量。平行測定5個(gè)樣品，結(jié)果見表2。

表2　大蒜中鉻的含量Fig.2 Chrom ium content in gar lic

由表1和表2可以看出，濕法消解所測定的結(jié)果偏低。這是由于干法消解是通過高溫灰化徹底破壞樣品中的有機(jī)物，而濕法消解是通過加入混合酸去破壞、消除大蒜中的有機(jī)物，消解不徹底。

2.3回收率試驗(yàn)

在已知含量大蒜的樣品試液中加入一定量的磷、鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液，各自加入顯色劑，定容至刻度，測定其吸光度。根據(jù)測定值、實(shí)際加入量，計(jì)算出磷、鉻加標(biāo)回收率。每種元素測試5次，取其平均值，測定結(jié)果如表3所示。

表3　測定磷、鉻含量回收率試驗(yàn)結(jié)果Fig.3 Recovery rate test results of phosphorus and chrom ium content

從表3可以看出，磷的加標(biāo)回收率為102.0%，鉻的加標(biāo)回收率為98.7%。所以，測試表明數(shù)據(jù)可靠。

3　結(jié)語

本實(shí)驗(yàn)分別采用濕法消解和干法消解大蒜樣品，采用分光光度測定被消解大蒜中的磷、鉻，結(jié)果表明：濕法消解的大蒜中，磷、鉻的含量分別為2.471 mg／kg，0.401mg／kg；干法消解的大蒜中，磷、鉻的含量分別為2.558mg／kg，0.418mg／kg。

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[責(zé)任編輯楊明慶]

O432.2

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1008-486X（2016）02-0048-03

2015-12-27

黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院校內(nèi)科研基金資助計(jì)劃項(xiàng)目：大蒜有效成分提取工藝研究（2015KXJS005）。

楚紅英（1973-），女，河南開封人，講師，碩士，主要從事有機(jī)化工教學(xué)與研究工作。