黃敬南崔 云鄭軍狀陶方澤徐文麗方躍坤

·綜 述·

中藥單體及復(fù)方制劑防治內(nèi)分泌干擾物男性生殖毒性研究進(jìn)展

黃敬南1崔 云2鄭軍狀1陶方澤1徐文麗1方躍坤1

男性生殖毒性；內(nèi)分泌干擾物；中藥單體；中藥復(fù)方

隨著工業(yè)化發(fā)展，環(huán)境污染問(wèn)題日趨嚴(yán)重。20世紀(jì)末，環(huán)境內(nèi)分泌干擾物（environmental endocrine disruptors，EEDs）開(kāi)始引起全球廣泛關(guān)注。EEDs是指外源性的能干擾人類或動(dòng)物內(nèi)分泌系統(tǒng)諸環(huán)節(jié)并導(dǎo)致異常效應(yīng)，或使其后代內(nèi)分泌功能發(fā)生改變的化學(xué)物質(zhì)[1]。人類普遍暴露于EEDs中，其中雙酚A（bisphenol a，BPA）、鄰苯二甲酸酯（phthalates，PAEs）和持久性有機(jī)污染物（persistent organic pollutant，POPs）可以在美國(guó)各地幾乎所有年齡組人群的脂肪、血液和尿液里被檢測(cè)到[2]。由于西藥在EEDs生殖毒性治療上的局限性，對(duì)中醫(yī)藥的研究逐漸增多，并取得一定療效?，F(xiàn)將近年來(lái)關(guān)于EEDs的男性生殖毒性及中醫(yī)藥防治研究進(jìn)展作一綜述。

1 EEDs的男性生殖毒性

EEDs最明顯的生殖毒性主要體現(xiàn)在對(duì)男性精液質(zhì)量的影響，如精子濃度、形態(tài)、活力以及活率等參數(shù)[3]。精液質(zhì)量的下降將直接導(dǎo)致男性生殖功能障礙。徐廷云等[4]對(duì)蘇州地區(qū)84例不育男性和32例正常生育的男性精液中鄰苯二甲酸酯（PAEs)的水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，不育男性精液中PAEs總量顯著高于正常生育組，并且其總量與精子總數(shù)成顯著反比。Perry等[5]對(duì)中國(guó)東部農(nóng)村新婚男子精液質(zhì)量和尿液中鄰苯二甲酸二甲酯的含量進(jìn)行相關(guān)性檢測(cè)，結(jié)果顯示兩者呈負(fù)相關(guān)。2014年美國(guó)生殖醫(yī)學(xué)會(huì)，對(duì)149例不育男性的精液質(zhì)量和尿液中BPA濃度進(jìn)行相關(guān)性檢測(cè)，結(jié)果兩者也呈負(fù)相關(guān)[6]。另外，大量的流行病學(xué)調(diào)查和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明，EEDs污染可能是男性生殖系統(tǒng)畸形和腫瘤發(fā)生的最主要原因之一[7]。報(bào)道稱EEDs可引起動(dòng)物的性腺發(fā)育不良、睪丸萎縮、尿道下裂等癥狀[8]。2011年Koutros等[9]通過(guò)大量數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，暴露于3種以上混合除草劑的農(nóng)民，患前列腺癌的風(fēng)險(xiǎn)是非暴露者的3.7倍。實(shí)驗(yàn)研究[10]證明，環(huán)境低劑量BPA通過(guò)膜偶聯(lián)受體GPR30和核受體ER-α相互作用激活蛋白激酶G（PKG）和EFGR-ERK-c-Fos信號(hào)通路來(lái)誘導(dǎo)鼠精原細(xì)胞GC-1增殖，從而可能誘發(fā)男性生殖細(xì)胞癌。

2 中醫(yī)對(duì)EEDs男性生殖毒性的認(rèn)識(shí)

EEDs是現(xiàn)代工業(yè)革命帶來(lái)的有毒化學(xué)物質(zhì)，中醫(yī)學(xué)并無(wú)記載。但由EEDs帶來(lái)的男性生殖毒性，甚至生殖功能障礙等，都可歸于“不育”、“無(wú)子”范疇。王琦教授認(rèn)為，男科病機(jī)可系統(tǒng)概括為“腎虛夾濕熱瘀毒蟲”，各種有害化學(xué)物質(zhì)、輻射等方面因素均可歸屬于“毒”類[11]。毒理學(xué)認(rèn)為，“毒”是具有劇烈和（或）頑固特點(diǎn)的，能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生極大危害的致病因素。從病因?qū)W角度出發(fā)，王琦認(rèn)為EEDs可歸屬于“毒”類。對(duì)于EEDs所致的男性生殖毒性，提出首先須從“腎虛”立論。如《千金方·求子論》言：“凡人無(wú)子當(dāng)為夫妻懼有五勞七傷、虛贏百病所致，故有絕嗣之患?！崩羁萚12]認(rèn)為可將EEDs歸入中醫(yī)的“疫毒”范疇，其發(fā)病機(jī)制可概括為腎虛精虧，瘀毒阻滯。寧艷[13]將EEDs視為“外邪”，認(rèn)為機(jī)體正氣不足是疾病發(fā)生的內(nèi)在原因,其病機(jī)是腎氣受損，精血不和,臟腑功能紊亂，氣血陰陽(yáng)失調(diào),損及沖任，導(dǎo)致生殖功能障礙。

3 中藥單體防治EEDs男性生殖毒性的研究

3.1 枸杞多糖（lycium barbarum polysaccharides，LBP）

LBP是中藥枸杞的主要有效成分。藥理研究[14]證明，LBP可以顯著提高少精癥大鼠血清中睪酮的含量，使睪丸指數(shù)增加，有效改善少精癥大鼠的生精功能。BPA是一種普遍存在的環(huán)境雌激素，工業(yè)上常被用來(lái)合成聚碳酸酯和環(huán)氧樹脂等材料。日常生活中主要通過(guò)消化道長(zhǎng)期低劑量攝入進(jìn)入人體，可直接誘導(dǎo)精子細(xì)胞凋亡，也可作用于激素及其受體，或影響DNA甲基化、改變表觀基因組等，影響男性生精過(guò)程和精液質(zhì)量，導(dǎo)致男性不育[15]。孫小娜[16]研究發(fā)現(xiàn)，LBP能夠改善BPA損傷小鼠睪丸和附睪的重量，提高機(jī)體抗氧化能力，提高睪酮（testosterone，T）和黃體生成素（luteinizing hormone，LH）的含量，從而緩解其對(duì)小鼠睪丸的損傷。李曉彩等[17]發(fā)現(xiàn)，對(duì)BPA暴露小鼠給予LBP后，可增加Bcl-2/Bax比值，抑制Caspase-3活化，阻斷生精細(xì)胞凋亡途徑。己烯雌酚（diethylstilbestrol，DES）屬于人工合成的非甾類雌激素，曾廣泛用于各類保健品及化妝品中，也曾作為添加劑加入動(dòng)物飼料中。孕期服用DES易導(dǎo)致雄性后代生殖道畸形、睪丸發(fā)育不全、精子總數(shù)減少和精子活力降低等一系列生殖系統(tǒng)問(wèn)題[18]。

研究[19-20]發(fā)現(xiàn)，LBP同樣可通過(guò)提高機(jī)體抗氧化能力，改善DES引起的小鼠損傷，增加Bcl-2/Bax比值，降低Caspase-9及p53的表達(dá)，阻斷生精細(xì)胞發(fā)生凋亡。

3.2 黃芪多糖（astragalus polysaccharide，APS） APS是中藥黃芪的主要活性成分之一，是黃芪中最重要的天然有效成分，可增強(qiáng)免疫系統(tǒng)功能、抗炎癥、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、延緩衰老和降血糖等。APS可以直接抑制病毒或者殺傷病毒，即APS通過(guò)與其他抗腫瘤藥物聯(lián)合應(yīng)用對(duì)腫瘤細(xì)胞具有直接殺傷作用[21]。研究[22]表明，黃芪注射液可能通過(guò)有效抑制COX-2的催化活性，減少前列腺素E2（PGE2）表達(dá)而抑制前列腺腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。其力根等[23]通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察到APS可升高血清中T、LH、促性腺激素解放激素（GnRH）含量，增加小鼠體內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）水平，提高清除超氧陰離子自由基的能力，明顯緩解DES誘導(dǎo)的小鼠睪丸氧化損傷。

3.3 葛根素（puerarin，PUE） PUE又名葛根黃酮，是從豆科植物野葛或甘葛藤的塊根中提取得到的一種黃酮苷，是葛根的最主要有效成分之一。PUE的化學(xué)結(jié)構(gòu)與天然雌激素類似，具有雌激素活性，其保護(hù)DNA氧化損傷的作用比雌二醇更強(qiáng)[24]。研究發(fā)現(xiàn)，PUE可以通過(guò)清除氧自由基、增加抗氧化酶活性發(fā)揮抗氧化保護(hù)作用[25]。其力根等[26]研究葛根素對(duì)DES染毒小鼠的生殖損傷保護(hù)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，葛根素也可提高睪丸組織的抗氧化活力，升高血清T、LH、GnRH含量，從而緩解DES誘導(dǎo)的睪丸損傷。但具體作用機(jī)制尚不明確。

3.4 槲皮素（quercetin，Que） Que是許多中草藥的主要有效成分，如桑寄生、三七、銀杏等。其廣泛存在植物的花、葉、果實(shí)中，具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗血小板聚集、免疫抑制等多種藥理作用，是植物界分布最廣的黃酮類化合物。研究[27]發(fā)現(xiàn)，Que能通過(guò)提高抗氧化酶活力與抑制凋亡基因表達(dá)來(lái)保護(hù)苯并芘所致的胎盤絨毛組織細(xì)胞損傷，提高生育能力。李桂玲等[28]通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證明，Que可有效對(duì)抗自由基，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，減弱DES導(dǎo)致的生精細(xì)胞損傷。布同良[29]研究同樣發(fā)現(xiàn)Que因具有抗氧化活性，可緩解鎘及硝基酚引起的睪丸氧化損傷，并改善凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2家族蛋白的表達(dá)，降低caspase-3活性，抑制精子細(xì)胞凋亡。

3.5 人參總苷（ginsenosides，GS） GS是從中藥人參中提取的有效成分。胡建剛[30]研究發(fā)現(xiàn)GS可提高細(xì)胞的抗氧化能力，升高bcl-2/bax比值，有效緩解BPA的細(xì)胞毒性作用，其機(jī)制可能是通過(guò)降低磷酸化的ERK1/2水平，增強(qiáng)細(xì)胞抗氧化能力，穩(wěn)定特異蛋白Clusterin的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

4 中藥復(fù)方防治EEDs男性生殖毒性的研究

中藥復(fù)方制劑是由具有多種功效的若干種中藥組成，作用靶點(diǎn)復(fù)雜，是中醫(yī)藥發(fā)展的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)，也最能體現(xiàn)出中醫(yī)學(xué)整體觀念和辨證論治的精髓。

4.1 益腎生精膠囊 益腎生精膠囊是河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院院內(nèi)制劑，組成不詳。李俊濤等[12]觀察到益腎生精膠囊可提高鄰苯二甲酸二丁酯染毒大鼠的精子活力、濃度，降低畸形率，改善睪丸及附睪結(jié)構(gòu)，提高血清T、LH水平，并且還能明顯上調(diào)Dzipl、Catsperl的表達(dá)，下調(diào)Fas、c-jun的表達(dá)。推測(cè)益腎生精膠囊可能是通過(guò)保護(hù)血睪屏障，改善支持細(xì)胞功能狀態(tài)，維持下丘腦—垂體—睪丸軸相對(duì)穩(wěn)定的性激素內(nèi)環(huán)境，從而保證生精上皮中各級(jí)生精細(xì)胞的正常功能，促進(jìn)精子發(fā)生。

4.2 腎氣丸 中醫(yī)補(bǔ)腎名方腎氣丸由熟地黃、山藥、山萸肉、茯苓、澤瀉、牡丹皮、附子、桂枝組成。藥理研究證實(shí),該方具有抗衰老、改善微循環(huán)、類性激素樣作用。寧艷等[13]觀察腎氣丸對(duì)甲氰菊酯染毒大鼠的保護(hù)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腎氣丸可保護(hù)受損的生殖臟器,升高睪酮，增加精子數(shù)量,降低畸形率,提高大鼠生精能力，且中藥的生殖保護(hù)作用與其劑量呈正相關(guān)。推測(cè)其可能是通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)分泌而發(fā)揮保護(hù)作用。

5 結(jié)語(yǔ)

目前，環(huán)境污染問(wèn)題已受到全球各方面的重視，特別是EEDs的污染有進(jìn)一步擴(kuò)大的趨勢(shì)，成為人類健康潛在的威脅因素，關(guān)系著人類的生存繁衍。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，單味中藥及中藥復(fù)方在緩解EEDs男性生殖毒性方面具有顯著的效果，因此運(yùn)用中醫(yī)藥治療是今后的一個(gè)重要研究方向。但目前仍然存在很多問(wèn)題：（1）各類中醫(yī)藥治療EEDs男性生殖毒性的具體機(jī)制尚不明確，且實(shí)驗(yàn)僅限于動(dòng)物模型和體外實(shí)驗(yàn)，缺乏臨床研究；（2）EEDs種類繁多，在環(huán)境中交相存在，并且對(duì)人體的生殖毒性多為協(xié)同作用，目前實(shí)驗(yàn)多以單一毒物為主；（3）對(duì)于EEDs所致的男性生殖毒性缺少大型的流行病學(xué)調(diào)查。所以今后，需深入研究中醫(yī)藥治療EEDs男性生殖毒性的具體機(jī)制，并且以多藥物共染毒為優(yōu)先；將實(shí)驗(yàn)研究的成果轉(zhuǎn)化用于臨床研究；加強(qiáng)多樣本、大數(shù)據(jù)的流行病學(xué)調(diào)查，為臨床治療提供有力依據(jù)。

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（收稿：2016-04-01 修回：2016-08-05）

1浙江中醫(yī)藥大學(xué)（杭州 310053）；2浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬寧波中醫(yī)院外科（寧波 315010）

崔云，Tel：0574-87089003；E-mail:nbszyy@sina.com