袁瑞瑛 崔超英 徐福春

（西藏大學(xué)醫(yī)學(xué)院 西藏拉薩 850000）

藏藥砂生槐化學(xué)成分分析

袁瑞瑛 崔超英 徐福春

（西藏大學(xué)醫(yī)學(xué)院 西藏拉薩 850000）

為分析西藏豆科槐屬植物砂生槐(Sophoramoorcroftiana)的化學(xué)成分，采用硅膠柱層析、SephadexLH-20凝膠柱層析和制備薄層層析，通過理化性質(zhì)和波譜分析鑒定化合物結(jié)構(gòu)。從砂生槐中分離得到了13種化合物，分別鑒定為：①十八碳二烯酸，②7-甲氧基-3’，4’-二羥基黃酮，③芥子醛，④2-甲基庚基苯甲酯，⑤苦參堿，⑥L-高麗槐素，⑦十八碳二烯酸三甘油脂，⑧羽扇醇，⑨β-谷甾醇，⑩3-甲氧基-4-羥基苯乙酮，?槐果堿，?氧化槐果堿，?氧化苦參堿，其中前10種物質(zhì)為砂生槐種子中首次被鑒定到的化學(xué)成分。

砂生槐；化學(xué)成分；分離鑒定

砂生槐(Sophoramoozeroftiana)為豆科槐屬植物（用藥部位）[1]，藏藥名為“薊瓦”，主要分布于西藏拉薩、林芝、山南、日喀則等地，生長在海拔2800～4400m的山坡灌叢中、河漫灘砂質(zhì)地、石質(zhì)干山坡上。砂生槐為藏族民間常用藥，具有清熱利濕、驅(qū)風(fēng)殺蟲的作用，可用于治療腸炎、痢疾、濕熱黃疸、痛腫瘡毒與皮膚疥癬等癥。

目前，對(duì)砂生槐的研究主要集中在其藥用價(jià)值及其商業(yè)開發(fā)等方面，已有文獻(xiàn)報(bào)道砂生槐中主要成分為苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿[2-4]等。為了解其藥理功效的物質(zhì)基礎(chǔ)，本文主要分析了砂生槐種子的化學(xué)成分，從中分離得到13種化合物，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定了化合物的結(jié)構(gòu)。

1 儀器與材料

Bruker AVANCE II-600型核磁共振儀；Thermo Fisher型質(zhì)譜儀(Finnigan LCQDeca XPMAX)；薄層層析硅膠(煙臺(tái)芝罘黃務(wù)硅膠開發(fā)有限公司)；Sephadex LH-20（Pharmacia公司）；反向硅膠C18填料（日本進(jìn)口，北京綠百草科技發(fā)展有限公司）；硅膠薄層板（上海上邦實(shí)業(yè)有限公司)；WFH-203型三用紫外分析儀(上海禾汽化工科技有限公司)；所有試劑均為國產(chǎn)分析純；實(shí)驗(yàn)用砂生槐種子于2009年采自西藏日喀則、山南等地，并由西藏大學(xué)醫(yī)學(xué)院王聚樂教授鑒定為豆科槐屬植物砂生槐(Sophoramoozeroftiana)的種子，標(biāo)本保存于西藏大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系。

2 提取與分離

取砂生槐干燥種子粗粉25kg，用6倍量的95%乙醇溶液加熱提取，反復(fù)提取三次，合并濾液，減壓蒸餾除去乙醇得到20L提取濃縮液。乙醇提取濃縮液先用15L的石油醚萃取三次，每次5L，分出石油醚層，減壓濃縮得到石油醚部位3L，再用30L乙酸乙酯萃取三次，每次10L，分出乙酸乙酯層，減壓濃縮至0.5L，為乙酸乙酯部位。剩余液用正丁醇15L，萃取三次，減壓濃縮得到正丁醇部位。正丁醇部位濃縮液過大孔吸附樹脂，用蒸餾水和95%乙醇依次洗脫，分別合并濃縮洗脫液，得到乙醇部位2L和水洗部位0.5L。石油醚部位進(jìn)行硅膠(200-300目，8×120cm)柱層析，用50：1的石油醚和丙酮，洗脫得到化合物1；流分分別進(jìn)行硅膠(200-300目)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(50：1-40：1-30：1-20：1-5：1-2：1-1：1)與二氯甲烷-甲醇混合溶劑(20：1-10：1-5：1-2：1-1：1)梯度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析，氯仿-甲醇(1：1)和純甲醇洗脫，制備薄層層析跟蹤，從中分離得到化合物④⑦⑧⑨；TLC顯示乙酸乙酯部位和乙醇部位點(diǎn)成分基本相似，合并。合并后進(jìn)行硅膠(200-300目，8×120cm)柱層析，用20：1的二氯甲烷-甲醇，洗脫得到化合物②③⑥⑩。用與石油醚部位一樣的處理方法對(duì)其余部分進(jìn)行處理，從中分離得到化合物⑤???。其中化合物⑤⑥???分別為已知的苦參堿、L-高麗槐素（L-山槐素）、槐果堿、氧化槐果堿、氧化苦參等堿化合物。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

根據(jù)砂生槐種子的提取分離結(jié)果，得到13種化合物，其中已知的有苦參堿⑤、L-高麗槐素（L-山槐素⑥、槐果堿?、氧化槐果堿?、氧化苦參堿?，其它鑒定出的8種化合物如下（分子式和結(jié)構(gòu)式見表1）。

化合物1：淡黃色油狀，經(jīng)核磁共振確定其分子量為280。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ5.35（4H，m，H-9，H-10，H-12，H-13），2.76(2H，t，J=7Hz，H-11)，2.34(2H，br.s，H-2)，2.07（4H，m，H-8，H-13），0.89（3H，t，J= 6Hz，H-18）；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ180.0(C-1)，34.0(C-2)，24.75(C-3)，29.33(C-4)，29.58(C-5)，31.90 (C-6)，29.68(C-7)，27.18(C-8)，127.87(C-9)，130.21(C-10)，25.6(C-11)，130.01(C-12)，128.03(C-13)，27.18(C-14)，29.58(C-15)，31.92(C-16)，22.57(C-17)，14.07(C-18)，對(duì)照文獻(xiàn)波譜數(shù)據(jù)[5]，確定化合物1為十八碳二烯酸（linolic acid），也稱亞油酸。

化合物2：淺黃色粉末，經(jīng)核磁共振確定其分子量為284。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ6.66（1H，s，H-3），7.96(1H，d，J=8Hz，H-5),6.94(1H，dd，J=2，8Hz，H-6)，6.96（1H，d，J=2Hz，H-8），7.41（1H，dd，J=2Hz，H-2’），7.07（1H，d，J=8Hz，H-5’），7.50（1H，dd，J=2，8Hz，H-6’），3.94（3H，s，OCH3）；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 165.57(C-2)，106.20(C-3)，180.74(C-4)，128.26(C-5)，114.38(C-6)，166.16(C-7)，103.98(C-8)，160.18(C-9)，117.68(C-10)，125.80(C-1’)，113.15(C-2’)，148.72(C-3’)，152.98(C-4’)，116.89(C-5’)，120.42(C-6’)，56.96

（OCH3），對(duì)照文獻(xiàn)波譜數(shù)據(jù)[6]，確定化合物2為7-甲氧基-3’，4’-二羥基黃酮。

表1 化合物的分子式和結(jié)構(gòu)式(①②③④⑦⑧⑨⑩)

化合物3：黃色針晶（何種溶劑中形成黃色針晶），經(jīng)核磁共振確定其分子量為208。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ7.00（2H，s，H-2，H-6），7.59(1H，d，J=16Hz，H-7)，6.70(1H，dd，J=8，16Hz，H-8)，9.58（1H，d，J= 8Hz，H-9），3.96（6H，s，OCH3）；13C-NMR(CDCl3,100MHz)δ127.0(C-1)，108.03(C-2)，147.0(C-3)，138.0(C-4)，147.0(C-5)，108.03(C-6)，157(C-7)，125(C-8)，193(C-9)，57.35（OCH3），對(duì)照文獻(xiàn)波譜數(shù)據(jù)[7]，確定化合物3為芥子醛（sinapaldehyde）。

化合物4：淡黃色油狀，經(jīng)核磁共振確定其分子量為234。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ4.16（2H，t，J=6Hz H-1），0.85、0.87(each3H，7-CH3，8-CH3),7.70、7.50(5H，H-苯環(huán))；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ67.55(C-1)，38.40(C-2)，30.03(C-3)，23.41(C-4)，28.72(C-5)，22.36(C-6)，10.58(C-7)，13.68(C-8)，132.14(C-1’)，130.48 (C-2’)，128.40(C-3’)，130.48(C-4’)，128.40(C-5’)，130.48(C-6’)，167.19（C-7’），對(duì)照文獻(xiàn)波譜數(shù)據(jù)[8]，確定化合物4為2-甲基庚基苯甲酯。

化合物7：淡黃色油狀，確定其分子量為879。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ5.35（4H，m，H-9，H-10，H-12，H-13），2.76(2H，t，J=7Hz，H-11),2.34(2H，br.s，H-2)，2.07（4H，m，H-8，H-13），0.89（3H，t，J=6Hz，H-18）；13C-NMR(CDCl3,100MHz)δ180.0(C-1)，34.0(C-2)，24.75(C-3)，29.33(C-4)，29.58(C-5)，31.90(C-6)，29.68(C-7)，27.18(C-8)，127.87(C-9)，130.21(C-10)，25.6(C-11)，130.01(C-12)，128.03(C-13)，27.18(C-14)，29.58(C-15)，31.92(C-16)，22.57(C-17)，14.07(C-18)，對(duì)照文獻(xiàn)波譜數(shù)據(jù)[9]，確定化合物7為十八碳二烯酸甘油脂（trilinoleine），也稱三亞麻酯。

化合物8：白色粉末，10%硫酸-乙醇顯紫紅色,10%磷鉬酸顯藍(lán)色，確定其分子量為426。1H-NMR (CDCl3，400MHz)δ4.56，4.70（2H，H-29），3.20（1H，H-3），0.76、0.78、0.83、0.95、1.00、1.04、1.69（each3H，7× CH3）；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ38.66(C-1)，27.19(C-2)，78.99(C-3)，38.84(C-4)，55.25(C-5)，18.3(C-6)，34.23(C-7)，40.8(C-8)，50.39(C-9)，37.12(C-10)，20.89(C-11)，25.09(C-12)，38.0(C-13)，42.79(C-14)，27.41 (C-15)，35.55(C-16)，42.98(C-17)，48.22(C-18)，47.96(C-19)，150.99(C-20)，29.7(C-21)，39.97C-22)，27.96 (C-23)，15.36(C-24)，16.11(C-25)，15.94(C-26)，14.52(C-27)，17.98(C-28)，109.31(C-29)，19.28(C-30)，對(duì)照文獻(xiàn)波譜數(shù)據(jù)[10]，確定化合物8為羽扇豆醇（Lupeol）。

化合物9：無色針晶（結(jié)晶溶劑），10%硫酸-乙醇顯紫紅色，10%磷鉬酸顯藍(lán)色,初步推斷為甾體或萜類的化合物。7：1的石油醚和丙酮=薄層展開的Rf值為0.66。與B-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行薄層對(duì)照分析，用3個(gè)不同的展開系統(tǒng)檢驗(yàn)，混合點(diǎn)不分離，與標(biāo)準(zhǔn)品混合測熔點(diǎn)，熔點(diǎn)不下降，確定化合物9為β-谷甾醇（βsitosterol）。

化合物10：白色結(jié)晶粉末，確定其分子量為166。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ6.06（1H，br.s，H-2），7.55 (1H，m，H-6),6.96(1H，d，J=8Hz，H-5)，3.96（3H，s，OCH3），2.56（3H，s，H-8）；13C-NMR(CDCl3,100MHz)δ 130.0(C-1)，109.63(C-2)，143(C-3)，145(C-4)，113.71(C-5)，124.02(C-6)，197(C-7)，26.23(C-8)，56.02(OCH3)，對(duì)照文獻(xiàn)波譜數(shù)據(jù)[11]，確定化合物10為3-甲氧基-4-羥基苯乙酮（Acetovanillone），又稱香草酮。

4 結(jié)論

對(duì)砂生槐種子的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)分離和分析，一共分離得到化合物13種，其中未見報(bào)道的有8種，分別是①十八碳二烯酸、②7-甲氧基-3’，4’-二羥基黃酮、③芥子醛、④2-甲基庚基苯甲酯、⑦十八碳二烯酸三甘油脂、⑧羽扇醇、⑨β-谷甾醇、⑩3-甲氧基-4-羥基苯乙酮。在實(shí)驗(yàn)過程中有一些樣品因?yàn)榧兌炔桓呋蛄坎蛔阄茨艿玫借b定，在后續(xù)的研究中還需要提高分離能力。

砂生槐不僅是一種生態(tài)植物，還具有多種營養(yǎng)和藥用化學(xué)成分。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，砂生槐的有效成分為生物堿，已發(fā)現(xiàn)的生物堿有苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、氧化槐果堿、槐定堿和金雀花堿等6種[12]。從本次試驗(yàn)分離得到的結(jié)果來看，砂生槐中除了含有生物堿外，還有黃酮類化合物、酯類化合物、甾體類化合物、脂肪酸和脂肪酸酯等。因此，下一步的工作主要有兩方面：一是繼續(xù)對(duì)砂生槐成分進(jìn)行系統(tǒng)分離與鑒定以獲取更加充足的樣品，全面地闡明砂生槐的成分；二是對(duì)砂生槐成分中其他類型的化合物進(jìn)行藥理活性測試，以此來發(fā)現(xiàn)具有良好活性的先導(dǎo)化合物。

[1]中國科學(xué)院青藏高原綜合科學(xué)考察隊(duì).西藏植物志[M].北京：科學(xué)出版社,1985：717.

[2]許毓英.西藏砂生槐種子營養(yǎng)成分的初步研究[J].自然資源學(xué)報(bào),1992,7(4)：379-382.

[3]崔建芳,章觀德.苦參等四種槐屬植物藥中生物堿的分析[J].中藥通報(bào),1986,2(11)：38-39.

[4]張璐,李紅玉,魏玉輝.HPLC、TLC檢測砂生槐種子中的生物堿[J].藥物分析雜志,2008,28(7)：1071-1074.

[5][6][7][8][9][10][11]中科院長春應(yīng)用化學(xué)研究所.應(yīng)用化學(xué)數(shù)據(jù)庫http：//202.98.16.44/c13index.htm.

[12]張勝,趙墾田,向瑞.西藏砂生槐研究綜述[J].內(nèi)蒙古林業(yè)科技,2009,35(1)：57-59.

Study on chemical constituentsof Sophoramoorcroftiana

Yuan Rui-ying CuiChao-ying Xu Fu-chun
（Medical collegeof TibetUniversity,Lhasa 850000,Tibet）

The chemical constituents of Sophoramoorcroftiana was analyzed by using Silica gel column chromatography and the structure of chemical constituentswere identified by the physicaland chemical properties,and spectralanalysis.13 compoundswere isolated and identified such as①linoleic acid,②3',4'-dihydroxy-7-methoxyflavone,③sinapaldehyde,④2-methylbenzenemethyl,⑤Matrine,⑥L-maackiain,⑦trilinoleine,⑧Lupeol,⑨β-sitosterol,⑩Acetovanillone,?Sophocarpine,?Oxysophocarpine and?Oxymatrine.The first10 compoundswere first time identified chemical constituents in the seedsof Sophoramoorcroftiana.

Sophoramoorcroftiana;chemical constituent;isolation andidentification

10.16249/j.cnki.54-1034/c.2016.02.011

R284.1

A

1005-5738（2016）02-073-005

[責(zé)任編輯：索郎桑姆]

2016-07-15

袁瑞瑛，女，漢族，四川綿陽人，西藏大學(xué)醫(yī)學(xué)院講師，主要研究方向?yàn)樘烊凰幬锘瘜W(xué)。