■陳 濤 楊 艷 盧 航 姚錦金

（南寧學院，廣西南寧 530200）

魚油中含有大量的高度不飽和脂肪酸，特別是含有豐富的人體必需脂肪酸EPA和DHA[1]，是配合飼料理想的脂肪源，但隨著魚油價格不斷攀升，加之世界魚油產(chǎn)量逐年降低，在配合飼料中全部添加魚油已是不太合理的選擇，所以水產(chǎn)行業(yè)急需魚油的替代品來降低飼料成本[2-3]。

關(guān)于在飼料中添加不同油脂對魚體生長及生理指標影響的研究已經(jīng)很多，如鯉魚[4]、異育銀鯽[5]、泥鰍[6]、吉富羅非魚[2-3]、奧尼羅非魚[7]等，但還未見飼料中添加不同油脂對紅羅非魚稚魚生長及肌肉脂肪酸組成影響的研究。本研究分別選用豬油、豆油和魚油作為脂肪酸，以紅羅非魚為研究對象，分析飼料中添加不同油脂對紅羅非魚稚魚生長及血清生化指標的影響，以確定紅羅非魚稚魚飼料中的適宜脂肪源組合，為其人工飼料配方的設(shè)計提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗魚及飼養(yǎng)

試驗用紅羅非魚稚魚購自廣西水產(chǎn)引育種中心，魚體健康、活動力強，平均體長(3.05±0.21)cm，平均體質(zhì)量(0.56±0.04)g。選擇體質(zhì)量基本一致的健康稚魚1 800尾，隨機分為4組，每組設(shè)3個重復。

本試驗共60 d。試驗魚到目的地后先暫養(yǎng)6 d，饑餓24 h，然后移到室外水泥池（1.2 m×2.7 m×0.8 m）中進行飼養(yǎng)，水泥池上方安裝鐵棚防雨防曬。每個池子為一個試驗組，用自制隔網(wǎng)將每個池子分成三部分，即每組的三個重復，每個重復放150尾魚。每天投喂飼料兩次，分別為8：00和18：00，試驗初期每天的投喂量為魚體重的4%左右，中段投喂量以投喂20 min內(nèi)吃完為宜。試驗期間平均水溫29～32℃，DO(6.05±0.35)mg/l，pH值（7.1±0.5），NH3-N(0.05±0.03)mg/l。

1.2 試驗飼料

試驗日糧分四組，以魚粉、菜粕、豆粕、α-淀粉、面粉為基礎(chǔ)料，添加一定量的膽堿、復合維生素、復合礦物質(zhì)、磷酸二氫鈣、食鹽和黏合劑等，最后加入不同油脂配制而成，四組飼料的油脂添加量分別為1組純豬油(4%)、2組純豆油(4%)、3組豆油(2%)+魚油(2%)、4組純魚油(4%)，不設(shè)對照組。飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。

飼料制作：混合好基礎(chǔ)料、添加劑和油脂后，加水攪成團狀，放入顆粒飼料機制成條狀飼料（直徑約1～2 mm），放入恒溫箱中60℃經(jīng)8 h烘干，然后制成長約2 mm左右的顆粒飼料，于0℃冰柜密封保存。

1.3 取樣與測定

1.3.1 生長指標及魚體營養(yǎng)成分的測定

試驗結(jié)束后，計算存活率、魚體增重率、飼料系數(shù)、肥滿度和肝體比。同時測定肌肉中的水分、粗蛋白（凱氏定氮儀）、粗脂肪（索氏抽提法）及粗灰分（馬弗爐高溫灼燒）含量。

存活率(%)=100×終末尾數(shù)/初始尾數(shù)；

增重率(%)＝100×(末均重-初均重)/初均重；

肥滿度(%)=100×體重/體長3；

飼料系數(shù)=攝食飼料總量/(末重-初重)；

肝體比(%)=100×肝重/體重。

表1 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(%)

1.3.2 脂肪酸組成的測定

試驗魚肌肉取樣1～2 g，剪碎，加5 ml Folch液于研缽中研磨組織樣。轉(zhuǎn)至圓底燒瓶，再加約15 ml Folch液，55℃水浴鍋中回流2～2.5 h。過濾殘渣，其余液體轉(zhuǎn)至25 ml容量瓶并定容，取10 ml試樣放入小圓瓶中，以氮氣吹干，肌肉中的脂質(zhì)會附著于瓶底，加入2 ml氫氧化鉀甲醇溶液（0.5 mol/l），充氮氣，于50℃水浴鍋中振搖約3 min，直至油珠消失，冷卻，加2 ml三氟化硼乙醚溶液（10%），輕輕混勻后充氮氣，于50℃水浴鍋中靜置3 min，冷卻后加2 ml的正庚烷，充分振蕩后靜置5 min，用20～25 ml飽和食鹽水淋洗上層清液。取上清液置于1 ml EP管中，同時加少量無水硫酸鈉。上層清液進行氣相色譜分析肌肉組織脂肪酸種類及相對含量。

采用氣相色譜法測定魚體脂肪酸組成。使用美國Sigma公司的脂肪酸甲酯標準品（純度98%以上）。色譜條件：澳大利亞SGE公司的BPX70石英毛細管柱(60 m×0.25 mm)，采用程序升溫，220～240 ℃；汽化室和FID溫度290℃；氣體流速：載氣為氮氣，流速60 ml/min，H260 ml/min，空氣 600 ml/min，尾吹氣50 ml/min；檢測器為氫離子火焰檢測器；進樣量l μl，分流比100∶1。標準品對照并結(jié)合ECLT值對照定性，峰面積歸一化法定量。飼料中脂肪酸組成的測定方法與肌肉中脂肪酸的測定方法相同。

1.4 數(shù)據(jù)處理

原始試驗數(shù)據(jù)錄入Excel表格初步整理，用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行單因子方差分析，試驗結(jié)果用“平均數(shù)±標準差”表示，采用Duncan's法多重比較分析平均數(shù)的差異顯著性(P＜0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同油脂飼料對紅羅非魚稚魚生長的影響（見表2）

表2 不同油脂飼料對紅羅非魚稚魚生長指標的影響

由表2可見，各試驗組間魚體初重和存活率無顯著性差異（P＞0.05）。紅羅非魚末均體重和增重率均以2組最高，3組次之，2、3組顯著高于1組(P＜0.05)。飼料系數(shù)以1組最高（1.46），并顯著高于其他三組（P＜0.05）。各組魚肥滿度以1組最低（1.42%），顯著低于其他各組（P＜0.05）。肝體比在各組間無顯著性差異（P＞0.05）。

2.2 不同油脂飼料對紅羅非魚稚魚魚體營養(yǎng)成分的影響（見表3）

表3 不同油脂飼料對紅羅非魚稚魚魚體營養(yǎng)成分的影響(%)

由表3可知，魚體肌肉各營養(yǎng)成分在各組間均無顯著性差異（P＞0.05）。其中2組水分最高，3組水分最低；肌肉脂肪含量以2組最高（3.87%），1組最低（3.19%）；肌肉蛋白則是4組最高，3組次之，1組最低；肌肉灰分含量2組最高，3組最低。

2.3 不同油脂飼料對紅羅非魚稚魚肌肉脂肪酸組成的影響（見表4與表5）

表4 各組飼料的脂肪酸組成

2.3.1 紅羅非魚稚魚飼料和組織中脂肪酸組成的相關(guān)性

由表4可知，在紅羅非魚稚魚肌肉組織中共檢測到了15種脂肪酸，各試驗組魚體的肌肉組織中，大類脂肪酸的相對含量均是∑SFA＞∑MUFA＞∑PUFA＞∑HUFA（僅4組肌肉中是∑MUFA＞∑SFA＞∑PUFA＞∑HUFA）。C16：0是相對含量最高的SFA，而C18∶1n9是含量最高的MUFA，C18∶2n6是主要的PUFA（4組的主要的PUFA是C18∶2n6和C22∶6n3），主要的HUFA是C22∶6n3。

由表4和表5可知，各組魚體脂肪酸組成和飼料脂肪酸組成有很大的相關(guān)性。1組飼料中的SFA和MUFA相對含量均明顯高于其它各組，PUFA和HUFA相對含量均明顯低于其它各組，而1組紅羅非魚肌肉組織中的SFA和MUFA相對含量亦顯著高于其它各組（P＜0.05），PUFA和HUFA相對含量亦顯著低于其它各組（P＜0.05）。魚油組飼料中的HUFA相對含量最高，而魚油組紅羅非魚肌肉中的HUFA相對含量亦顯著高于其他各組（P＜0.05）。魚油組飼料中的EPA與DHA含量最高，魚油組紅羅非魚肌肉中的EPA與DHA含量亦達最高，即隨著飼料中EPA和DHA的升高，紅羅非魚肌肉組織中的EPA和DHA也升高。除魚油組飼料外，各組飼料的n-3/n-6均小于1，而魚油組紅羅非魚魚體的n-3/n-6大于1，顯著高于其他各組（其他各組均小于1）。

2.3.2 紅羅非魚飼料和組織中脂肪酸組成的差異性

魚體肌肉組織中的脂肪酸大類與飼料中的相比，肌肉組織中的SFA、MUFA相對含量高于相應飼料中SFA、MUFA的相對含量，各組紅羅非魚肌肉中的C16∶0、C18∶1n9相對含量均比飼料中的高，C20∶0含量則均低于相應的飼料組。

表5 不同油脂各飼料組紅羅非魚稚魚肌肉脂肪酸組成

各組魚體肌肉組織中的PUFA相對含量低于相應飼料中PUFA的相對含量，其中肌肉組織中C18∶2n6的相對含量均比飼料中的低。

值得注意的是，各組魚體肌肉中C22∶6n3(DHA)相對含量均比相應飼料中C22∶6n3的相對含量高，而3、4兩組的C20∶5n3（EPA）的相對含量均比相應飼料中的低，可能是因為C20∶5n3在向C22∶6n3轉(zhuǎn)化。2.3.3 紅羅非魚飼料和肌肉組織中各種脂肪酸相對含量的比較

比較各組紅羅非魚肌肉的脂肪酸相對含量，發(fā)現(xiàn)3組的C14∶0含量最高（3.05%），并顯著高于其他三組（P＜0.05）；C16∶0含量在各組中差異不顯著，1組最高（29.01%）；C16∶1n7則是4組最高（4.88%），顯著高于其他三組（P＜0.05），2組最低（1.03%），顯著低于其他三組（P＜0.05），1、3組間差異不顯著（P＞0.05）；C18∶0含量則是1組最高（13.19%），顯著高于其他三組（P＜0.05），4組最低，顯著低于其他三組（P＜0.05），2、3組之間差異不顯著（P＞0.05）；C18∶1n9則是1組最高（40.36%），顯著高于其他三組（P＜0.05）；C18∶2n6為2組最高（21.75%），顯著高于其他三組（P＜0.05），3組顯著高于1、4組（P＜0.05），1、4組之間差異不顯著（P＞0.05）；C18∶3n3為2、3組顯著高于1組（P＜0.05），4組未檢測到；C20∶4n6為1組（0.52%）顯著低于其他三組（P＜0.05），其他三組之間差異不顯著（P＞0.05）；C20∶5n3在1組中未檢測到，4組顯著高于2、3組（P＜0.05），3組顯著高于2組（P＜0.05）；C22∶6n3在四個組之間差異顯著（P＜0.05），4組最高（13.28%）、3組次之（6.85%）、2組第三（1.77%）、1組最低（0.36%）。

比較大類脂肪酸，∑SFA、∑MUFA以1組最高，顯著高于其他三組（P＜0.05）；∑PUFA以1組最低，顯著低于其他三組（P＜0.05）；∑HUFA及∑n-3 PUFA在四組間差異顯著（P＜0.05），其中4組最高，3組次之，2組第三，1組最低；∑n-6 PUFA則以2組最高（22.98%），顯著高于其他三組（P＜0.05），3組次之，顯著高于1、4組（P＜0.05）；n-3/n-6在各組間差異顯著（P＜0.05），4組最高，1組最低。

3 討論

3.1 不同油脂對紅羅非魚稚魚生長性能的影響

研究表明，不同油脂對魚類生長產(chǎn)生的各種影響主要源于這些油脂的脂肪酸組成不同，而不同魚類對同一種油脂的消化吸收能力也不同[7]。雍文岳[8]報道，亞油酸是羅非魚的必需脂肪酸之一，添加富含亞油酸的植物油更有利于羅非魚生長。李新等[9]對于吉富羅非魚的油脂營養(yǎng)研究亦表明，以植物油特別是菜籽油或豆油為脂肪源飼喂羅非魚，能提高羅非魚的生長指標，同時不影響其機體健康。宋益貞等[3]的研究表明，飼料中添加雞油能提高吉富羅非魚的生長性能及飼料利用率，降低飼料成本。本試驗中，各組紅羅非魚肝體比差異不顯著，其中1組最高，可能是豬油增加了肝臟負擔，導致肝臟變化；2組及3混合組紅羅非魚的增重率顯著高于1組(P＜0.05)；飼料系數(shù)則是1組顯著高于其他三組(P＜0.05)，魚體肥滿度則是1組顯著低于其他三組(P＜0.05)，而2組最高，表明2組紅羅非魚的生長性能顯著高于1組和4組(P＜0.05)，魚體健康狀況也較好，說明以豆油替代魚油有利于紅羅非魚的生長。這可能跟大豆油中富含淡水魚類所必需的C18∶2n6和C18∶3n3，能夠滿足魚類對必需脂肪酸的需要有關(guān)。本試驗中3組紅羅非魚也表現(xiàn)出比較好的生長狀況，這可能是因為3組魚體各種脂肪酸比例相對均衡,更有利于紅羅非魚的生長。

對于其他品種魚類的研究結(jié)果也說明了豆油對魚類生長的促進作用[10-12]。國內(nèi)學者中，劉瑋等[13]在草魚稚魚飼料中分別添加相同含量的魚肝油、豆油、菜油、豬油、混合油等進行飼喂試驗，結(jié)果表明魚肝油和混合油組草魚生長性能最好，豆油和豬油組其次，菜油組最差。成永旭等[14]采用不同油脂飼喂草魚，認為在增重率方面豆油脂源好于豬油脂源，可能是豆油基本上能滿足草魚對必需脂肪酸的需求。王吉橋等[15]報道以豆油作為脂肪源飼喂七彩神仙魚時獲得最高的魚體特定生長率。

3.2 不同油脂對紅羅非魚稚魚肌肉營養(yǎng)成分的影響

本試驗表明，不同油脂對紅羅非魚稚魚肌肉營養(yǎng)成分均沒有影響。紅羅非魚稚魚肌肉粗脂肪含量以2組最高，4組其次，1組最低，這與成永旭等[14]的研究結(jié)果剛好相反，成永旭研究得出豬油組草魚肌肉脂肪含量最高，可能是魚的不同種類所致；與馮健等[16]的試驗結(jié)果一致，馮健等以豆油為脂肪源飼養(yǎng)的太平洋鮭肌肉脂肪含量稍高于以魚油為脂肪源的肌脂含量，但無顯著差異。王驥騰等[17]用大豆油、魚油、菜籽油和亞麻油配制的飼料飼喂軍曹魚幼魚，經(jīng)分析得出，魚油組軍曹魚的腹肌蛋白含量均顯著高于3個植物油組。本試驗中，紅羅非魚稚魚肌肉粗蛋白含量則是1組稍低于其他三組，4組最高，3組次之，可能是魚油中豐富的必需脂肪酸提高了飼料營養(yǎng)價值，促進了蛋白質(zhì)積累，有利于魚體生長。肌肉灰分含量以3組最低，2組最高。

3.3 不同油脂對紅羅非魚肌肉脂肪酸組成的影響

3.3.1 紅羅非魚稚魚肌肉脂肪酸組成和飼料脂肪酸組成之間的相關(guān)性

魚體獲取必需脂肪酸的重要途徑是從飼料脂肪中攝取，所以飼料中脂肪酸的組成一定會對魚體脂肪酸組成產(chǎn)生影響，即魚體脂肪酸組成能反映出飼料脂肪酸組成[18-20]。本試驗的結(jié)果也說明了這一點，如隨著飼料中大類脂肪酸MUFA、HUFA及各類脂肪酸EPA、DHA、C16∶0、C18∶1n9、C18∶2n6和C18∶3n3等相對含量的升高，紅羅非魚肌肉組織中相同種類的脂肪酸其含量也相應地升高。魚體中C18：0及SFA的相對含量雖然不是完全隨著飼料的變化而變化，但變化的大體趨勢相同。

3.3.2 紅羅非魚稚魚肌肉脂肪酸組成和飼料脂肪酸組成之間的差異性

本試驗中，魚體肌肉中的大類脂肪酸與飼料相比，其SFA、MUFA相對含量高于相應飼料，這與劉飛[21]的結(jié)果略有不同，劉飛使用不同油脂飼料飼喂黃顙魚，結(jié)果表明，魚體肌肉中的SFA相對含量低于飼料，而MUFA含量則高于飼料，認為黃顙魚有將SFA去飽和并轉(zhuǎn)化成MUFA的能力，而紅羅非魚可能不具備這種轉(zhuǎn)化飽和脂肪酸的能力。

王利華等[22]研究，C18∶2n6和C18∶3n3分別是n6和n3系列脂肪酸的前體，在體內(nèi)經(jīng)碳鏈延長及去飽和過程，能轉(zhuǎn)化成其它PUFA。本試驗中紅羅非魚肌肉中C18∶2n6及C18∶3n3的相對含量均比飼料中的低，而肌肉DHA的含量比飼料高，可能也發(fā)生了類似的轉(zhuǎn)化；至于各組魚體肌肉DHA相對含量高于相應飼料，而EPA的相對含量低于相應飼料，可能是因為紅羅非魚肌肉中的EPA在向DHA轉(zhuǎn)化。

3.3.3 各組紅羅非魚稚魚肌肉中脂肪酸組成的比較

綜合各項生長指標，發(fā)現(xiàn)2組紅羅非魚稚魚生長性能最好，3組其次，這可能跟2、3組飼料中富含C18：2n6和C18∶3n3有關(guān)，相應的2、3組魚體肌肉中亦富含C18∶2n6和C18∶3n3，尤其是肌肉的C18∶2n6相對含量高達14.49%～21.75%，顯著高于1、4組。有研究表明，n-6 PUFA其實是羅非魚正常生長、繁殖所必需的脂肪酸[23-25]，而當飼料中同時也添加C18∶3n-3時,則羅非魚對C18∶2n-6的需求量下降[26]。3、4組紅羅非魚稚魚肌肉中富含EPA及DHA，其生長性能比1組強，但沒有2組好，說明富含HUFA的飼料可能對魚體生長有一定的促進作用，而富含PUFA的飼料更能促進魚體的生長。實質(zhì)上羅非魚對n-6 PUFA脂肪酸的需求量遠大于n-3 PUFA[24]。關(guān)勇[27]用n-3/n-6為0.30、0.40、0.50、0.60的飼料飼喂吉富羅非魚，認為吉富羅非魚飼料中最適n-3/n-6水平為0.50。本試驗中各組紅羅非魚稚魚其n-3/n-6范圍為0.06～1.60，其中1組最低，達0.06，4組最高，為1.60，都不是羅非魚對n-3/n-6的最適宜要求，只有生長性能較好的2、3組魚的n-3/n-6分別為0.19和0.74，比較接近0.5的水平。