曹勇，田曉燕，張苒，代玉川，趙家琦，安毅

高位胸段硬膜外阻滯對心房顫動自主神經(jīng)重構(gòu)的影響

曹勇*，田曉燕，張苒，代玉川，趙家琦，安毅

目的：觀察高位胸段硬膜外阻滯（HTEB）對長期右心耳快速起搏誘發(fā)心房顫動（房顫）犬心房自主神經(jīng)重構(gòu)的影響，并探討心房肌神經(jīng)生長因子（NGF）在心房自主神經(jīng)重構(gòu)中的作用。

心房顫動；自主神經(jīng)重構(gòu);注射，硬膜外；利多卡因

Methods: AF model was established by consistent rapid atrial pacing for 6 weeks. 18 experimental dogs were randomly divided into 3 groups: Sham group, the dogs had no pacing while received normal saline injection; Control group, the dogs had pacing and normal saline injection; HTEB group, the dogs had pacing and 0.5% lidocaine injection for HTEB. n=6 in each group. Atrial myocardium collagen volume fraction (CVF) was examined by Masson staining; sprouting of NGF related protein 43 (GAP43) and tyrosine hydroxylase (TH) were assessed by immunohistochemistry; protein expressions of NGF, GAP43 and TH were measured by Western blot analysis.

Results: Compared with Sham group, HTEB group showed decreased CVF and sprouting of GAP43, TH, P＜0.05; reduced protein expressions of NGF, GAP43 and TH, P＜0.05-0.01. Compared with Sham group, HTEB group presented increased CVF and sprouting of GAP43, TH, P＜0.05-0.01; elevated protein expressions of NGF, GAP43 and TH, P＜0.05.

Conclusion: Long-term rapid atrial pacing induced AF dog had inhomogeneous sprouting of atrial myocardial nerve which may cause autonomic nerve remodeling; NGF played the important role in such process. HTEB could effectively inhibit NGF up-regulation and suppress the autonomic nerve remodeling in experimental dogs.

Key wordsAtrial fbrillation; Autonomic nerve remodeling; Injection, epidural; Lidocaine

(Chinese Circulation Journal, 2016,31:1219.)

心房顫動（房顫）的發(fā)生機(jī)制至今仍未明確，目前認(rèn)為房顫是多種機(jī)制共同作用的結(jié)果。心房重構(gòu)作為房顫的發(fā)生機(jī)制之一已經(jīng)獲得公認(rèn)，房顫時心房重構(gòu)主要包括：電重構(gòu)、結(jié)構(gòu)重構(gòu)和收縮功能重構(gòu)。新近研究表明，除上述三種重構(gòu)外，房顫時心房還存在“自主神經(jīng)重構(gòu)”，主要表現(xiàn)為自主神經(jīng)纖維的顯著萌出及其不均一性分布[1]?！白灾魃窠?jīng)重構(gòu)”可通過多種機(jī)制觸發(fā)并維持房顫。因而，有人提出房顫發(fā)生的“自主神經(jīng)機(jī)制”。另外，研究發(fā)現(xiàn)[2]，高位胸段硬膜外阻滯（HTEB）可通過抑制交感神經(jīng)系統(tǒng)、血管緊張素系統(tǒng)過度激活，抑制凋亡和氧化應(yīng)激，可用于治療頑固性心絞痛和擴(kuò)張型心肌病,提示HTEB可能通過多種途徑影響房顫“自主神經(jīng)重構(gòu)”，抑制房顫的發(fā)生和維持。本研究旨在觀察HTEB對房顫犬心房“自主神經(jīng)重構(gòu)”的影響，并探討心房肌神經(jīng)生長因子（NGF）在心房自主神經(jīng)重構(gòu)中的作用。

1 材料與方法

實驗動物：2014-06至2015-06將18只成年健康雜種犬，雌雄不限，體重20～25 kg，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一臨床醫(yī)學(xué)院動物實驗室提供。犬隨機(jī)分入假手術(shù)組（n=6）、對照組（n=6）和HTEB組（n=6）。

實驗動物準(zhǔn)備[3]及取材：主要包括麻醉、開胸手術(shù)、硬膜外腔置管術(shù)，在術(shù)后恢復(fù)一周行心房快速起搏6周建立房顫犬模型。起搏6周后快速取出心臟、生理鹽水沖洗，切取左、右心房側(cè)壁心肌組織，固定包埋液氮速凍后-80℃存放。

實驗方法：（1）分組：假手術(shù)組：不起搏、硬膜外腔注射生理鹽水4 ml/次；對照組：起搏、硬膜外腔注射生理鹽水4 ml/次；HTEB組：起搏、硬膜外腔注射0.5%利多卡因4 ml/次。（2）各組犬心房肌纖維化程度測定：取各組犬心房肌石蠟組織切片、脫蠟后，固定于Bouin氏液，常規(guī)脫水包埋，行Masson膠原染色。用計算機(jī)圖像分析系統(tǒng)（Motic Images Advanced 3.0）進(jìn)行膠原半定量分析。（3）免疫組化方法檢測心房肌自主神經(jīng)萌出：選取各組石蠟包埋的左、右房心肌組織行5 μm連續(xù)切片脫蠟、水化，3%過氧化氫孵育10 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。滴加兔抗酪氨酸羥化酶（TH）多克隆抗體（1：600，英國Abcam公司）和兔抗神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43（GAP43）多克隆抗體（1：600，英國Abcam公司），磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4，0.01 mol/L）陰性對照，4℃孵育過夜，PBS沖洗后滴加羊抗兔-HRP二抗（北京中杉生物公司提供），37℃孵育20 min，二氨基聯(lián)苯胺顯色[4]。酪氨酸羥化酶（TH）標(biāo)志心臟交感神經(jīng)分布，神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43（GAP43）標(biāo)志再生神經(jīng)纖維。（4） 蛋白免疫印跡法測定犬心房肌神經(jīng)生長因子 （NGF）、酪氨酸羥化酶（TH）及GAP43蛋白表達(dá)：取液氮凍存心房肌組織500 mg，加入裂解液，冰浴勻漿，115g離心40 min。在生物分光光度計上比色分析對上清液進(jìn)行蛋白測定。取蛋白質(zhì)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳，濕轉(zhuǎn)膜，BSA封閉后磷酸鹽吐溫緩沖液（PBST，pH 7.4，PBS液中加入0.05% Tween20）漂洗。加入兔抗NGF多克隆抗體（1：200 美國Santa Cruz公司）、兔抗TH多克隆抗體（1：200，英國Abcam公司）、兔抗GAP43多克隆抗體（1：400，英國Abcam公司）、小鼠抗GAPDH多克隆抗體（1：10000，上?？党缮锕荆┮豢梗?℃過夜。TBST（pH 7.4，Tris緩沖液中加入0.05% Tween20）漂洗后，分別與堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗兔IgG及馬抗小鼠IgG（1：1000，北京中杉生物公司）二抗進(jìn)行雜交，37℃平搖1 h。將濾膜用TBST搖動洗滌3次。NBT/BICP（四唑氮藍(lán)/5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽）顯色，應(yīng)用凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行蛋白條帶光密度掃描分析。

統(tǒng)計學(xué)方法：數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，所有數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料組間比較采用方差分析。 P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1各組犬心房肌纖維化程度（表1，圖1）

HTEB組及假手術(shù)組犬左、右心房肌CVF值較對照組犬明顯降低（P＜0.05～0.01）。且假手術(shù)組低于HTEB組（P＜0.05），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。各組犬左、右心房肌CVF值無差異（P＞0.05），假手術(shù)組心肌間質(zhì)中可見極少量膠原纖維散在分布，排列整齊，細(xì)胞形態(tài)規(guī)整；對照組膠原纖維彌漫性增生分布，膠原明顯增粗，肌絲排列紊亂松散，間質(zhì)明顯纖維化；HTEB組膠原纖維少量增生，膠原有所增粗，肌絲排列不規(guī)整，間質(zhì)可見部分纖維化。

表1 Masson膠原染色三組犬左、右心房肌膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF值）比較（%，n=6，

表1 Masson膠原染色三組犬左、右心房肌膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF值）比較（%，n=6，

注：HTEB：高位胸段硬膜外阻滯。與對照組比較*P＜0.05**P＜0.01；與假手術(shù)組比較△P＜0.05

部位 對照組 HTEB組 假手術(shù)組右心房 6.016±0.273 5.580±0.265* 3.422±0.256**△左心房 5.818±0.303 5.328±0.399* 3.262±0.169**△

圖1 各組犬心房肌Masson膠原染色(×400)

2.2各組犬心房肌神經(jīng)纖維萌出情況

各組犬心房肌GAP43免疫組化染色 （圖2，圖3）：與對照組犬相比，HTEB組和假手術(shù)組犬左、右心房肌GAP43陽性纖維密度顯著降低（P＜0.01），且假手術(shù)組低于HTEB組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。假手術(shù)組左、右心房肌GAP43陽性纖維分布規(guī)整；對照組左、右心房肌GAP43陽性纖維顯著增生，排列明顯紊亂，呈高度不均一性分布，右心房較左心房GAP43陽性纖維增生更明顯（P＜0.05）； HTEB組左、右心房肌GAP43陽性纖維少量增生，呈不均一性分布，右心房GAP43陽性纖維增生更明顯（P＜0.05）。

圖2 免疫組化染色分析各組犬心房肌神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43（GAP43）陽性纖維密度

圖3 各組犬心房肌神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43（GAP43） 免疫組化染色

各組犬心房肌TH免疫組化染色（表2）： 與對照組犬相比，假手術(shù)組犬左、右心房肌TH陽性纖維密度顯著降低（P＜0.01），對照組犬左心房間TH陽性纖維密度顯著低于右心房（P＜0.05）；HTEB組犬左、右心房肌TH陽性纖維密度明顯低于對照組（P＜0.05），但仍顯著高于假手術(shù)組（P＜0.01）；差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。

表2 免疫組化染色分析各組犬心房肌酪氨酸羥化酶（TH）陽性纖維密度（μm2/mm2 ，n， ±s）

表2 免疫組化染色分析各組犬心房肌酪氨酸羥化酶（TH）陽性纖維密度（μm2/mm2 ，n， ±s）

注：HTEB：高位胸段硬膜外阻滯。與對照組比較*P＜0.05**P＜0.01；與假手術(shù)組比較△△P＜0.01；與同組右心房比較▲P＜0.05

部位 對照組 HTEB組 假手術(shù)組右心房 4514.2±293.7 4164.0±184.3*△△ 684.4±26.1**左心房 4166.8±339.3▲ 3928.1±143.4*△△ 651.0±38.2**

各組犬心房肌NGF,GAP43和TH蛋白表達(dá)情況（表3）：與對照組犬相比，假手術(shù)組犬左、右心房肌NGF 蛋白表達(dá)降低（P＜0.01）；對照組犬左心房心房肌NGF 蛋白表達(dá)較右心房降低（P＜0.05）；HTEB組犬左、右心房肌NGF蛋白表達(dá)較對照組降低（P＜0.05），但仍高于假手術(shù)組（P＜0.05）；差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。與對照組犬相比，假手術(shù)組犬左、右心房肌GAP43蛋白表達(dá)降低（P＜0.01）；對照組犬左心房心房肌GAP43 蛋白表達(dá)較右心房降低（P＜0.05）；HTEB組犬左、右心房肌GAP43 蛋白表達(dá)較對照組降低（P＜0.05），但仍高于假手術(shù)組（P＜0.05）；差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。與對照組犬相比，假手術(shù)組犬左、右心房肌TH蛋白表達(dá)降低（P＜0.01）；對照組犬左心房心房肌TH 蛋白表達(dá)較右心房降低（P＜0.05）；HTEB組犬左、右心房肌TH蛋白表達(dá)較對照組降低（P＜0.05），但仍高于假手術(shù)組（P＜0.01）；差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。

表3 半定量分析各組犬心房肌蛋白含量（NGF/GAPDH光密度比值）(n=6，）

表3 半定量分析各組犬心房肌蛋白含量（NGF/GAPDH光密度比值）(n=6，）

注：GAPDH：甘油醛-3-磷酸脫氫酶;NGF：神經(jīng)生長因子；GAP43：神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43；TH：酪氨酸羥化酶。與對照組比較*P＜0.05**P＜0.01；與假手術(shù)組比較△P＜0.05；與同組右心房比較▲P＜0.05

部位 對照組 HTEB組 假手術(shù)組NGF蛋白右心房 0.671±0.061 0.606±0.037*△ 0.537±0.027**左心房 0.618±0.029▲ 0.562±0.015*△ 0.497±0.045**GAP43蛋白右心房 0.686±0.034 0.626±0.034*△ 0.562±0.042**左心房 0.635±0.047▲ 0.585±0.020*△ 0.518±0.046**TH蛋白右心房 0.571±0.031 0.530±0.029**△ 0.124±0.007**左心房 0.536±0.031▲ 0.496±0.036**△ 0.111±0.010**

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)長期快速右心耳起搏建立的房顫犬模型，其心房肌NGF蛋白表達(dá)明顯增加，TH及GAP43蛋白表達(dá)明顯增加；心房肌存在顯著神經(jīng)纖維萌出，右心房神經(jīng)纖維萌出量顯著多于左心房，且萌出神經(jīng)纖維呈高度不均一性分布。HTEB可顯著降低房顫犬心房肌NGF蛋白表達(dá)上調(diào)，抑制TH及GAP43蛋白表達(dá)上調(diào)；顯著抑制心房肌神經(jīng)萌出及不均一性分布，阻止心房自主神經(jīng)重構(gòu)[5,6]。同時，房顫犬心房肌GAP43陽性纖維密度較TH 陽性纖維密度高[6]，而TH陽性纖維密度未有顯著差別，提示房顫犬心房肌萌出神經(jīng)并非都是交感神經(jīng)，可能也存在迷走神經(jīng)萌出。

房顫時心房肌自主神經(jīng)萌出與NGF、TH、GAP43蛋白表達(dá)相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，NGF在心室神經(jīng)重構(gòu)過程中發(fā)揮重要作用，能夠觸發(fā)神經(jīng)纖維再生[7,8]。NGF通過高親和力酪氨酸激酶受體（TrKs，主要為TrKA）和低親和力受體P75NTR對神經(jīng)元的生長、分化和損傷后修復(fù)進(jìn)行調(diào)節(jié)。TrKs轉(zhuǎn)導(dǎo)的一般是“正性”信號，如維持神經(jīng)元的存活、生長；而P75NTR多表現(xiàn)抑制神經(jīng)生長作用。在衰竭心肌中存在去交感神經(jīng)支配，這與心室肌神經(jīng)細(xì)胞中TrKA表達(dá)的減少密切相關(guān)[9]。另外，Zhou等[7]研究發(fā)現(xiàn)心肌梗死犬左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)NGF蛋白表達(dá)明顯增加，因此局部梗死的心室肌誘導(dǎo)NGF表達(dá)增加，通過軸漿運輸被逆轉(zhuǎn)運至左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)，觸發(fā)心臟神經(jīng)萌出。GAP43作用于神經(jīng)元觸發(fā)神經(jīng)末梢萌發(fā)[10]。在轉(zhuǎn)基因小鼠中GAP43過度表達(dá)將導(dǎo)致新的突觸形成及神經(jīng)萌處[11,12]。因此，可通過檢測心房肌NGF、TH、GAP43蛋白表達(dá)評估神經(jīng)纖維萌出情況。

房顫時心房發(fā)生電、結(jié)構(gòu)、功能重構(gòu)導(dǎo)致局部神經(jīng)損傷。Gould等[12]的研究表明，慢性持續(xù)房顫患者心房肌交感神經(jīng)存在不均一性增加。然而，Gould等[12]研究并未發(fā)現(xiàn)NGF mRNA水平增加，可能是mRNA水平并不能代表蛋白表達(dá)情況。此外，本研究發(fā)現(xiàn)房顫心房肌GAP43及TH蛋白表達(dá)明顯增加，且右心房蛋白表達(dá)較左心房高。GAP43蛋白表達(dá)同NGF蛋白表達(dá)存在高度相關(guān)性，NGF在GAP43表達(dá)減少時不能誘發(fā)神經(jīng)萌出[13]。因此我們推測NGF可能通過上調(diào)GAP43表達(dá)來誘發(fā)心臟神經(jīng)萌出。然而，房顫心房肌神經(jīng)萌出的作用機(jī)制仍不清楚，需進(jìn)一步研究來證實。

HTEB可改善房顫時心房肌自主神經(jīng)重構(gòu)。HTEB通過將麻醉平面控制在胸1-5脊髓階段，抑制心臟交感神經(jīng)節(jié)前纖維，致心交感張力減弱，副交感張力相對增強(qiáng)，減少心臟節(jié)律障礙發(fā)生[14]。因此，HTEB能減少腎上腺素誘發(fā)心律失常的發(fā)生，這與HTEB能夠延長心肌細(xì)胞動作電位時程(APD)、延長有效不應(yīng)期（AERP）密切相關(guān)[15]。研究發(fā)現(xiàn)，局部血管緊張素II含量增加可促進(jìn)組織NGF表達(dá)，促進(jìn)神經(jīng)萌出。HTEA可抑制機(jī)體腎素-血管緊張素系統(tǒng)的激活[16]，間接抑制NGF表達(dá)上調(diào)。本研究證實，HTEB組TH 、GAP43免疫組化染色陽性纖維密度較對照組明顯減少，但仍較假手術(shù)組增加，提示HTEB可顯著抑制房顫心房肌神經(jīng)萌出。同時，HTEB組NGF蛋白表達(dá)較對照組明顯減少，但仍較假手術(shù)組增加；HTEB組GAP43及TH蛋白表達(dá)較對照組明顯減少，但仍較假手術(shù)組增加。我們認(rèn)為可能通過抑制房顫心肌NGF表達(dá)上調(diào)，抑制心臟神經(jīng)萌出及不均一分布。HTEB防治房顫發(fā)生的具體機(jī)制至今仍未明確，仍有待進(jìn)一步研究[17]。

本研究局限性：本研究只探討了房顫犬心房肌自主神經(jīng)重構(gòu)中交感神經(jīng)重構(gòu)的情況及其機(jī)制，未對房顫時心房肌迷走神經(jīng)重構(gòu)情況作研究分析。此外，心力衰竭可導(dǎo)致心房、心室自主神經(jīng)功能失調(diào)和自主神經(jīng)重構(gòu)[18]，因此，研究中需注意排除合并心力衰竭的動物模型，減少心力衰竭對自主神經(jīng)重構(gòu)的干擾。

[1] 易茜, 馬瑞彥. 心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)在心房顫動的發(fā)生及維護(hù)中的作用.中國循環(huán)雜志, 2015, 30： 813-816.

[2] Jakobsen CJ. High thoracic epidural in cardiac anesthesia： a review. Semin Cardiothorac Vasc Anesth, 2015, 19： 38-48.

[3] Goldberg A, Kusunose K, Qamruddin S, et al. Left atrial size and function in a canine model of chronic atrial fibrillation and heart failure. PLoS One, 2016, 11： e0147015.

[4] Chang CM, Wu TJ, Zhou S, et al. Nerve sprouting and sympathetic hyperinnervation in a canine model of atrial fibrillation produced by prolonged right atrial pacing. Circulation, 2001, 103： 22-25.

[5] Jayachandran JV, Sih HJ, Winkle W, et al. Atrial fibrillation produced by prolonged rapid atrial pacing is associated with heterogeneous changes in atrial sympathetic innervation. Circulation, 2000, 101：1185-1191.

[6] Hamabe A, Chang CM, Zhou S, et al. Induction of atrial fibrillation and nerve sprouting by prolonged left atrial pacing in dogs. Pacing Clin Electrophysiol, 2003, 26： 2247-2252.

[7] Zhou S, Chen LS, Miyauchi Y, et al. Mechanisms of cardiac nerve sprouting after myocardial infarction in dogs. Circ Res, 2004, 95： 76-83.

[8] 辛林偉, 王梨明, 唐際存, 等. 外源性神經(jīng)生長因子對雪旺細(xì)胞中NF- κ B mRNA表達(dá)的影響. 山東醫(yī)藥, 2014, 54： 24- 26.

[9] Kreusser MM, Buss SJ, Krebs J, et al. Differential expression of cardiac neurotrophic factors and sympathetic nerve ending abnormalities within the failing heart. J Mol Cell Cardiol, 2008, 44： 380-387.

[10] Chen MM, Yin ZQ, Zhang LY, et al. Quercetin promotes neurite growth through enhancing intracellular cAMP level and GAP-43 expression . Chin J Nat Med, 2015, 13： 667-672.

[11] Ceber M, Sener U, Mihmanli A, et al. The relationship between changes in the expression of growth associated protein-43 and functional recovery of the injured inferior alveolar nerve following transection without repair in adult rats. J Craniomaxillofac Surg, 2015, 43： 1906-1913.

[12] Gould PA, Yii M, McLean C, et al. Evidence for increased atrial sympathetic innervation in persistent human atrial fibrillation. Pacing Clin Electrophysiol, 2006, 29： 821-829.

[13] Huang R, Zhao J, Ju L, et al. The influence of GAP-43 on orientation of cell division through G proteins. Int J Dev Neurosci, 2015, 47： 333-339.

[14] Pedroviejo Sáez V. Nonanalgesic effects of thoracic epidural anesthesia. Rev Esp Anestesiol Reanim, 2011, 58： 499-507.

[15] Meissner A, Eckardt L, Kirchhof P, et al. Effects of thoracic epidural anesthesia with and without autonomic nervous system blockade on cardiac monophasic action potentials and effective refractoriness in awake dogs. Anesthesiology, 2001, 95： 132-138.

[16] Nader A, Kendall MC, Chrisman H, et al. Greater cephalad extent of thoracic epidural sensory anesthesia after lidocaine and epinephrine test dose correlates with analgesic consumption and pain burden after uterine fibroid artery embolization. Reg Anesth Pain Med, 2016, 41：56-64.

[17] 黃欣淼, 曲秀芬. 心房顫動與自主神經(jīng)的相關(guān)性研究進(jìn)展. 中國循環(huán)雜志, 2015, 30： 1027-1029.

[18] Sun J, Lu Y, Huang Y, el al. Vnilateral vagus nerve stimulation improves ventricular autonomic nerve distribution and functional imbalance in a canine heart failure model. Int J Clin Exp Med, 2015, 8：9334-9340.

Impact of High Thoracic Epidural Blockade on Autonomic Nerve Remodeling in Experimental Dogs With Atrial Fibrillation

CAO Yong**, TIAN Xiao-yan, ZHANG Ran, DAI Yu-chuan, ZHAO Jia-qi, AN Yi.
Qingdao University Medical College, Qingdao (266000), Shandong, China Corresponding Author: AN Yi, Email: anyiqingdao@126.com

Objective: To observe the impact of high thoracic epidural blockade (HTEB) on atrial autonomic nerve remodeling in dogs with atrial fbrillation (AF) induced by long-term rapid right atrial appendage pacing and to explore the efect of nerve growth factor (NGF) on atrial autonomic nerve remodeling.

2016-03-08)

(編輯：汪碧蓉)

266000 山東省青島市，青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院 心內(nèi)科 （曹勇，安毅）；濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 健康管理與社區(qū)服務(wù)中心（田曉燕），心內(nèi)科（張苒、代玉川、趙家琦）

曹勇 主治醫(yī)師 博士 主要從事心房顫動等心血管相關(guān)疾病診治*現(xiàn)在山東省濟(jì)寧市，濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 心內(nèi)科工作**Now Working in Department of Cardiology, Affiliated Hospital of Jining Medical College, Email：caoyong0419@163.com 通訊作者：安毅 Email：anyiqingdao@126.com

R541

A

1000-3614（2016）12-1219-05

10.3969/j.issn.1000-3614.2016.12.016

方法：18只犬隨機(jī)分為假手術(shù)組、對照組和HTEB組。對照組和HTEB組犬給予持續(xù)快速心房起搏建立房顫模型，HTEB組給予硬膜外腔注射0.5%利多卡因行高位胸段硬膜外阻滯。通過Masson染色檢測犬心房肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)改變，免疫組化法測定犬心房肌神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43（GAP43）及酪氨酸羥化酶（TH）表達(dá)，蛋白免疫印跡法檢測犬心房肌NGF、GAP43及TH蛋白表達(dá)情況。

結(jié)果：與對照組相比，右心耳快速起搏6周后，HTEB組犬心房肌CVF值顯著降低； GAP43及TH神經(jīng)萌出量顯著減少（P＜0.05）; NGF、GAP43及TH蛋白表達(dá)量顯著減少（P＜0.05～0.01）。與假手術(shù)組比較，HTEB組犬心房肌CVF值顯著增加；GAP43及TH神經(jīng)萌出量顯著增加（P＜0.05～0.01）; NGF、GAP43及TH蛋白表達(dá)量顯著增加（P＜0.05）。

結(jié)論：長期右心耳快速起搏誘發(fā)犬房顫致心房肌神經(jīng)不均一萌出，誘發(fā)自主神經(jīng)重構(gòu)，而NGF在其中發(fā)揮重要作用。HTEB可有效阻止房顫犬心房肌NGF表達(dá)上調(diào)，減輕自主神經(jīng)重構(gòu)。