李學(xué)勇姚哈斯苗 美烏 蘭△

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029；2.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065）

·研究報(bào)告·

蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺對卒中后抑郁模型大鼠行為及前額葉皮質(zhì)NE、DA、5-HT含量影響*

李學(xué)勇1，2姚哈斯2苗 美2烏 蘭2△

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029；2.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065）

目的觀察蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺對卒中后抑郁（PSD）模型大鼠行為及前額葉皮質(zhì)單胺遞質(zhì)的含量影響。方法 32只SD雄性大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、蒙醫(yī)針刺組、鹽酸氟西汀組，每組8只。用栓線法建立局灶性腦缺血再灌注大鼠模型，疊加慢性不可預(yù)見性刺激與孤養(yǎng)結(jié)合造成PSD動物模型。通過糖水偏愛實(shí)驗(yàn)和敞箱實(shí)驗(yàn)對大鼠行為學(xué)評價(jià)，采用酶聯(lián)免疫法檢測大鼠前額葉皮質(zhì)去甲腎上腺素 （NE）、多巴胺（DA）、5-羥色胺（5-HT）等單胺遞質(zhì)的含量。結(jié)果 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠糖水消耗量、敞箱實(shí)驗(yàn)中的水平活動次數(shù)和垂直運(yùn)動次數(shù)明顯下降（P＜0.05），前額葉皮質(zhì)NE、DA、5-HT含量明顯降低（P＜0.05）。與模型組比較，蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組大鼠糖水消耗量、敞箱實(shí)驗(yàn)中的水平活動次數(shù)和垂直運(yùn)動次數(shù)明顯增加（P＜0.05），前額葉皮質(zhì)NE、DA、5-HT含量明顯增加（P＜0.05）。蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組之間比較，無顯著差異（P＞0.05）。結(jié)論 蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺改善卒中后抑郁大鼠行為異常，明顯提高前額葉皮質(zhì)NE、DA、5-HT單胺遞質(zhì)的含量，具有抗抑郁作用。

蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺 腦卒中后抑郁癥 單胺遞質(zhì)

腦卒中后抑郁（PSD）是指在腦血管性疾病發(fā)生后出現(xiàn)以抑郁為特征或重性抑郁樣發(fā)作的心境障礙，其發(fā)病率多在30%～60%，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量和預(yù)后［1］。PSD會明顯影響腦卒中患者在神經(jīng)功能和認(rèn)知功能方面的康復(fù)效果，同時(shí)會增加腦卒中患者的死亡率［2-3］。早期發(fā)現(xiàn)PSD并給予積極的干預(yù)治療對患者軀體功能恢復(fù)、縮短病程、減少醫(yī)療資源的消耗具有重要意義［4］。一些研究人員提出的情緒障礙的單胺假說，5-羥色胺（5-HT）、去甲腎上腺（NE）同屬于單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，其對情緒、焦慮、睡眠等都有調(diào)節(jié)作用，對卒中后患者，大腦病變致使NE和5-HT含量下降而出現(xiàn)PSD［5］。在臨床工作中，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用蒙醫(yī)腦—白脈調(diào)控針刺可明顯改善抑郁狀態(tài)。為此，本實(shí)驗(yàn)研究PSD動物模型上，觀察蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺對PSD模型大鼠前額葉皮質(zhì)的多巴胺（DA）、NE、5-HT的含量影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 選取SPF級雄性SD大鼠32只，體質(zhì)量280～300 g，由北京市海淀區(qū)興隆實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖廠提供，許可證號：SCXK-（軍）2012-0004。

1.2 藥物及試劑 DA試劑盒、NE試劑盒、5-HT試劑盒（武漢華美生物工程有限公司）；鹽酸氟西汀分散片（禮來蘇州制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字J20120001）；針灸針為華佗牌0.40 mm×13 mm毫針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）。

1.3 儀器與設(shè)備 Multiskan MK3-型自動多功能酶標(biāo)儀（美國Thermo公司），ST16R型臺式高速冷凍離心機(jī)（美國Thermo公司）YLS-19A型大鼠電動斷頭器 （濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司），Thermo-991型超低溫冰箱 （美國Thermo公司），OFT-100型自主活動視頻分析系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）。

1.4 分組與造模 SD大鼠32只適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分4組分為假手術(shù)組、蒙醫(yī)針刺組、模型組、鹽酸氟西汀組，每組8只大鼠。大鼠術(shù)前禁食、不禁水12 h，改進(jìn)Longa法［6］制作局灶性腦缺血再灌注大鼠模型。假手術(shù)組手術(shù)操作步驟基本同模型組，但無栓線插入、不進(jìn)行應(yīng)激和孤養(yǎng)。大鼠蘇醒后根據(jù)Bederson［7］評分來給分，有神經(jīng)功能缺損的大鼠（評分≥1）入組。預(yù)防術(shù)后感染連續(xù)3 d腹腔注射4萬U青霉素。術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)1周，第8天開始除假手術(shù)組外其他組給予慢性不可預(yù)見溫和刺激結(jié)合孤養(yǎng)。慢性溫和刺激包括：晝夜顛倒12 h、鼠籠傾斜45°24 h、潮濕墊料24 h、禁食24 h、禁水24 h、夾尾3 min、振蕩40 min、束縛2 h。每天隨機(jī)給予一種刺激，持續(xù)2周。

1.5 干預(yù)方法 慢性溫和刺激14 d后蒙醫(yī)針刺組采用蒙醫(yī)頂會穴，額葉組穴進(jìn)行針刺治療，使用華佗牌

0.40 mm×13 mm毫針，均為斜刺，深度約為0.2 mm，每次留針20 min，每日1次，連續(xù)干預(yù)2周。鹽酸氟西汀組經(jīng)胃灌注用蒸餾水配成氟西汀懸浮液，每日1次4.06 mg/kg，連續(xù)給藥2周。模型組經(jīng)胃灌注蒸餾水2周。假手術(shù)組不做任何干預(yù)。

1.6 觀察項(xiàng)目 1）糖水偏愛實(shí)驗(yàn)。造模前、造模后、治療后共3次，測每只大鼠糖水消耗量。將大鼠禁水24 h后給予1%蔗糖水溶液150 mL，1 h后計(jì)算每只大鼠1%蔗糖水的飲用量。該實(shí)驗(yàn)觀測大鼠的快感反應(yīng)。2）敞箱實(shí)驗(yàn)。干預(yù)結(jié)束后進(jìn)行敞箱實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)所用敞箱是立柱體，四壁黑色，地等面積劃分9塊，上方放置攝像機(jī)。將大鼠放置于底面中心方格，記錄5 min內(nèi)水平活動和垂直運(yùn)動次數(shù)。3）取樣品及檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將大鼠斷頭快速取腦，在冰盤上剝離腦組織，剪去前額葉皮質(zhì)后置于速凍管，用液氮快速冷凍并放入-80℃冰箱保存待測。用ELISA檢測技術(shù)，按試劑盒說明進(jìn)行檢測大鼠前額葉皮質(zhì)DA、NE、5-HT的含量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.00統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量資料以表示，組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠糖水消耗量的比較 見表1。各組大鼠造模前的糖水消耗量無顯著差異（P＞0.05）。造模后與假手術(shù)組比較，模型組、蒙醫(yī)針刺組、鹽酸氟西汀組3個(gè)組的糖水消耗量降低（P＜0.01）。治療后與假手術(shù)組比較，模型組大鼠糖水消耗量明顯降低（P＜0.01）。與模型組比較，蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組大鼠糖水消耗量明顯增加（P＜0.05）。蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組之間比較，無顯著差異（P＞0.05）。

表1 各組大鼠糖水消耗量比較（g，）

表1 各組大鼠糖水消耗量比較（g，）

與假手術(shù)組比較，**P ＜ 0.01；與模型組比較，△P ＜ 0.05。下同。

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2.2 各組大鼠水平活動次數(shù)和垂直運(yùn)動次數(shù)比較見表2。干預(yù)后做敞箱實(shí)驗(yàn)，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠水平活動次數(shù)和垂直運(yùn)動次數(shù)均明顯下降 （P＜0.01）。與模型組比較，蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組大鼠水平活動次數(shù)和垂直運(yùn)動次數(shù)均明顯增加 （P＜0.05）。蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組之間比較，無顯著性差異（P＞0.05）。

2.3 蒙醫(yī)針刺對各組大鼠前額葉皮質(zhì)的DA、NE、5-HT含量比較 見表3。與假手術(shù)組比較模型組大鼠前額葉皮質(zhì)DA、NE、5-HT含量降低（P＜0.01）；與模型組比較蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組大鼠前額葉皮質(zhì)DA、NE、5-HT含量顯著增加（P＜0.05）；蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組之間比較，無顯著性差異（P＞0.05）。

表2 各組大鼠水平活動次數(shù)和垂直運(yùn)動次數(shù)比較（）

表2 各組大鼠水平活動次數(shù)和垂直運(yùn)動次數(shù)比較（）

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表3 各組大鼠前額葉皮質(zhì)DA、NE、5-HT含量比較（g/L，）

表3 各組大鼠前額葉皮質(zhì)DA、NE、5-HT含量比較（g/L，）

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3 討 論

國外流行病學(xué)調(diào)查顯示PSD在急性期的發(fā)病率為33%，在恢復(fù)期的發(fā)病率在34%［8］，國內(nèi)的總發(fā)生率34.2%［9］，可見PSD的發(fā)病率高。發(fā)病機(jī)制至今尚未明確，但多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，單胺能遞質(zhì)環(huán)路在抑郁發(fā)病中發(fā)揮重要作用，抑郁癥與低含量的單胺有關(guān)，特別是5-HT、NE和DA［10］。缺血性病變可能阻斷了來自中腦和腦干的投射，致使5-HT、NE和DA下降，導(dǎo)致PSD的發(fā)生［2，11］。蔡金亞等［12］認(rèn)為卒中后腦組織中單胺類遞質(zhì)如DA、5-HT、NE及其代謝產(chǎn)物濃度降低，加之腦部血液供應(yīng)不足，蛋白質(zhì)合成發(fā)生變化和葡萄糖代謝緩慢，使機(jī)體代謝所需能量減少，進(jìn)一步影響神經(jīng)遞質(zhì)的代謝與合成；去甲腎上腺素能和5-羥色胺能神經(jīng)元位于腦干向上的輻射通路通過丘腦下部、基底節(jié)，最終投射到大腦皮質(zhì)，病變累及上述部位可影響5-羥色胺能和去甲腎上腺素能神經(jīng)通路，導(dǎo)致NE和5-HT含量下降而引起抑郁。20世紀(jì)50年代發(fā)現(xiàn)抑郁癥與腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)（NT）有關(guān)，并且抑郁癥發(fā)病機(jī)制及其抗抑郁藥的研制中起主導(dǎo)作用［13］。臨床工作中，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺可明顯改善抑郁狀態(tài)，提高卒中后抑郁患者生活質(zhì)量。蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺是按大腦皮層功能分區(qū)進(jìn)行區(qū)域性頭皮針治療 （主要有運(yùn)動區(qū)、感覺區(qū)、平衡區(qū)、足運(yùn)感區(qū)、語言區(qū)等）和根據(jù)白脈走形及支配肌群選擇相應(yīng)的穴位進(jìn)行抗痙攣體針針刺治療。目前治療家庭社會的支持、心里治療外，藥物治療尤其重要［14］之外針刺作為一種安全、有效的治療方法，越來越多地被醫(yī)者與患者接受［15］。針刺療法作為較理想的治療方法，在改善抑郁程度的同時(shí)能促進(jìn)患者神經(jīng)功能的康復(fù)；眾多研究顯示，針刺可以通過升高5-HT、NE、及BDNF的水平發(fā)揮抗抑郁的功效［12］。

卒中后抑郁動物模型制備的關(guān)鍵是更接近于人類抑郁癥的病理過程，一定程度上反映了類似于人類抑郁癥的一些臨床表現(xiàn)。本研究中我們利用卒中后抑郁動物模型，糖水消耗量、敞箱實(shí)驗(yàn)的水平次數(shù)和垂直運(yùn)動次數(shù)以及前額葉皮質(zhì)單胺遞質(zhì)的含量為觀察指標(biāo)初步探究蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺的抗抑郁作用。結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠糖水消耗量、敞箱實(shí)驗(yàn)中的水平活動次數(shù)和垂直運(yùn)動次數(shù)明顯下降，前額葉皮質(zhì)NE和DA、5-HT的含量降低，與模型組比較，蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組大鼠糖水消耗量、敞箱實(shí)驗(yàn)中的水平活動次數(shù)和垂直運(yùn)動次數(shù)以及前額葉皮質(zhì)NE、DA、5-HT的含量均顯著增加。因此，我們認(rèn)為這可能增加大鼠前額葉皮質(zhì)NE、DA、5-HT含量是蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺對卒中后抑郁大鼠發(fā)揮抗抑郁作用機(jī)制之一。

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Effect of Mongolian Medicine Brain-White Pulse Regulating Acupuncture on Post-stroke Depression Model Rats Behavioral and Prefrontal Cortex NE，DA，5-HT Contenton

LI Xueyong，YAO Hasi，MIAO Mei，et al.

Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China.

Objective：To observe the effect of Mongolian medicine brain-white pulse regulating acupuncture on post-stroke depression（PSD）model rats behavioral and cortical monoamine neurotransmitters content.Methods：32 male SD rats were randomly divided into sham operation group，sample group，Mongolian medicine acupuncture group，fluoxetine hydrochloride group（drug group）.There were 8 rats in each group.PSD animal models were built by the establishment of focal cerebral ischemia rats with the bolt line method，under the conditions of chronic unpredictable stress and separation.By sugar water preference test and open box experiment for the evaluation of rats′behaviour，the content of prefrontal cortex norepinephrine（NE），and dopamine（DA），5-hydroxytryptamine（5-HT）monoamine neurotransmitters were tested by enzyme-linked immunoassay.Results：Compared with the sham group，model group rats sugar water consumption，the number of horizontal movement and vertical movement in the open box experiment decreased obviously（P＜0.05），the contents of prefrontal cortex NE，DA，5-HT of rats in model group decreased significantly（P＜0.05）.Compared with the model group，sugar water consumption，the number of horizontal movement and vertical movement in the open box experiment and the contents of prefrontal cortex NE，DA，5-HT of rats in acupuncture group and drug group increased significantly（P＜0.05）.There was no significant difference（P＞0.05）between the acupuncture group and the drug group.Conclusion：Antidepressant effect of Mongolian medicine brain-white pulse regulating acupuncture is related to the improvement of behavior in the rat model of depression after stroke and the contents of NE，DA，5-HT monoamine neurotransmitters in the brain tissue，which has antidepressant effect.

Mongolian medicine brain-white pulse regulating acupuncture；Post-stroke depression（PSD）；Monoamine neurotransmitters

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國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81360577）

△（電子郵箱：wulan631226@163.com）

R245.3

A

1004-745X（2016）11-2029-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.11.003

（2016-08-10）