楊新鳴 胡 敏 彭 艷 叢 晶 吳效科

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040）

基于孕期高雄激素大鼠焦慮行為探討多囊卵巢綜合征與情志的關(guān)系*

楊新鳴 胡 敏 彭 艷 叢 晶 吳效科△

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040）

目的使孕中期雌鼠暴露于高雄激素狀態(tài)，觀察宮內(nèi)高雄激素環(huán)境是否影響子代的行為，并探討產(chǎn)生焦慮行為的可能機(jī)制及多囊卵巢綜合征與情志的關(guān)系。方法 Wistar雌性大鼠，分別在孕中期頸背部皮下注射T、T+Flu、T+Tam，連續(xù)3 d，所生子代雌鼠及雄鼠長(zhǎng)至成年作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，觀察基本生長(zhǎng)情況、行為表現(xiàn)，檢測(cè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)下丘腦、海馬和杏仁核中關(guān)鍵基因的表達(dá)情況。結(jié)果 1）T組杏仁核ARmRNA的表達(dá)低于對(duì)照組。2）與對(duì)照組相比，T組子代的海馬組織中ERα mRNA的表達(dá)下降。3）在T+Flu組中，下丘腦和海馬中GPER mRNA的表達(dá)比T組下降。與T組相比，GPER mRNA在T+Flu和T+Tam組杏仁核中的表達(dá)顯著增加。結(jié)論 通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PNA大鼠焦慮行為表現(xiàn)更為明顯，其異常的表現(xiàn)是通過(guò)雄激素途徑發(fā)揮作用。說(shuō)明子代鼠在宮內(nèi)對(duì)母鼠孕期持續(xù)的高雄激素刺激產(chǎn)生應(yīng)激，雄激素途徑對(duì)子代鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生作用，從而影響其出生后的焦慮行為。

高雄激素 多囊卵巢綜合征 焦慮 中樞神經(jīng)系統(tǒng)

多囊卵巢綜合征（PCOS）是育齡期女性最常見(jiàn)的內(nèi)分泌疾病，臨床表現(xiàn)為月經(jīng)稀發(fā)、閉經(jīng)、不孕、多毛和痤瘡、胰島素抵抗和高胰島素血癥、肥胖以及高血壓。歸屬于中醫(yī)的閉經(jīng)、癥瘕、崩漏、月經(jīng)后期、不孕等范疇。大量研究報(bào)道PCOS女性有發(fā)生抑郁和焦慮癥的危險(xiǎn)性，影響健康和生活質(zhì)量。60%以上的PCOS女性至少會(huì)出現(xiàn)一種精神疾病，特別是抑郁和焦慮癥。高雄激素血癥是PCOS一個(gè)主要臨床特征。臨床和生化高雄影響生殖功能、大腦的發(fā)育以及行為表現(xiàn)。PCOS女性孕期表現(xiàn)循環(huán)中雄激素水平升高。古代醫(yī)家多認(rèn)為情志可以影響女性經(jīng)、帶、胎、產(chǎn)等生理功能，其中以肝、脾、腎最為突出。本研究從雄激素影響情緒的機(jī)制入手，使孕中期雌鼠暴露于高雄激素狀態(tài)，觀察宮內(nèi)高雄激素環(huán)境是否影響子代的行為，并探討產(chǎn)生焦慮行為的可能機(jī)制，探討PCOS與情志的關(guān)系。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)雌性孕期Wistar大鼠購(gòu)自查爾斯河實(shí)驗(yàn)室。孕期Wistar大鼠（孕8 d），室溫21～22℃，濕度55%～65%，12 h光照12 h黑暗，獨(dú)籠飼養(yǎng)（no.2016；Harlan Winkelmann）。

1.2 試劑與儀器 芝麻油，丙酸睪丸酮，苯甲酸芐酯，氟他胺，它莫西芬，均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。高架十字迷宮，瑞典kungsbacka M?toch Reglerteknik；曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)備，瑞典kungsbacka M?toch Reglerteknik；分光光度計(jì)Nanodrop 1000，美國(guó)NanoDrop；實(shí)時(shí)PCR儀系統(tǒng)，美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司。

1.3 造模與分組 在孕15～19 d，將孕鼠隨機(jī)分為4組（每組5只），每天頸部皮下注射并記錄注射藥物期間的體質(zhì)量和食物攝取量。對(duì)照組：芝麻油和苯甲基芐酯按體積比2∶1混合注射480 μL；睪酮組（T）：丙酸睪丸酮［0.5 mg/（kg·d）］溶于480 μL的2∶1混合的芝麻油和苯甲基芐酯的溶劑中。睪酮+氟他胺組（T+Flu）：丙酸睪丸酮［0.5 mg/（kg·d）］和氟他胺［7.5 mg/（kg·d）］溶于480 μL的2∶1混合的芝麻油和苯甲基芐酯的溶劑中；睪酮+他莫昔芬組（T+Tam）：丙酸睪丸酮［0.5 mg/（kg·d）］和他莫昔芬］10 μg/（kg·d）］溶于480 μL的2∶1混合的芝麻油和苯甲基芐酯的溶劑中。雌性和雄性子代均暴露于母體雄激素過(guò)多條件下，在孕15～19 d分別阻斷雄激素和雌激素的產(chǎn)生，直至子代發(fā)育為成年大鼠。

1.4 觀察項(xiàng)目 1）子代發(fā)育情況。所有的子代在出生后4～21 d每周2次測(cè)量體質(zhì)量、肛門與外生殖器的間距以及食物攝取量。離乳后，持續(xù)測(cè)量雌鼠體質(zhì)量和食物攝取量至65 d齡。2）行為測(cè)試。包括高架十字迷宮和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)。雌性子代在動(dòng)情間期測(cè)試。所有大鼠每天進(jìn)行行為測(cè)試前適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境至少1 h以上。高架十字迷宮和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)在同一天進(jìn)行測(cè)試并在光照期白光下進(jìn)行研究。行為結(jié)果通過(guò)特殊的計(jì)算機(jī)系統(tǒng)記錄。（1）高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)（EPM）。高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)方法主要是利用雌雄子代面對(duì)新環(huán)境時(shí)的探究特性以及其對(duì)高懸敞開(kāi)臂的恐懼情緒，模擬形成矛盾沖突的行為用來(lái)觀察大鼠的焦慮情況及狀態(tài)［1］。高架十字迷宮與計(jì)算機(jī)軟件相連，自動(dòng)計(jì)算大鼠進(jìn)入開(kāi)放臂和閉合臂的次數(shù)以及時(shí)間。大鼠直接放在中央?yún)^(qū)，啟動(dòng)該系統(tǒng)觀察5 min。大鼠回到籠內(nèi)，用水清洗迷宮設(shè)施。進(jìn)入閉合臂的停留時(shí)間作為評(píng)估大鼠焦慮狀態(tài)的標(biāo)志。（2）曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)［2］。利用系統(tǒng)軟件記錄30 min內(nèi)大鼠在盒中的自發(fā)活動(dòng)、水平活動(dòng)、直立活動(dòng)、中央活動(dòng)和沿邊活動(dòng)的時(shí)間。當(dāng)1次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠回到籠中，盒子用水清洗，以免上次動(dòng)物余留的信息影響下次測(cè)試結(jié)果。大鼠若停留在沿邊區(qū)域或缺乏運(yùn)動(dòng)表明緊張度高。

1.5 標(biāo)本采集 雌性子代在出生后70～81 d動(dòng)情間期進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，雄性子代在出生后84～91 d進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)后大鼠被處死，解剖后收集腦組織中的下丘腦、海馬和杏仁核，立即放入液氮中-80℃保存，用于蛋白和mRNA檢測(cè)。

1.6 qRT-PCR檢測(cè) 利用研磨儀Qiazol裂解液抽提下丘腦、海馬和杏仁核組織中的RNA?？俁NA利用RNeasy Lipid Tissue Mini Kit抽提，分光光度法和微流體芯片技術(shù)評(píng)估RNA質(zhì)量。利用iScript cDNA合成試劑盒反轉(zhuǎn)錄500fg總RNA，cDNA產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)。熱循環(huán)條件為50℃2 min，95℃10 min，然后95℃15 s，60℃1 min進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。所有反應(yīng)重復(fù)進(jìn)行，如果兩次反應(yīng)的CT值差異大于5%則重新實(shí)驗(yàn)。GAPDH和β-Actin作為內(nèi)源對(duì)照管家基因，靶基因的相對(duì)表達(dá)量通過(guò)比較關(guān)鍵閾值（Ct）方法進(jìn)行測(cè)算，通過(guò)2-ΔCt公式計(jì)算出結(jié)果。將靶基因分別與β-Actin和GAPDH對(duì)比得出數(shù)據(jù)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS21.0軟件和GraphPad Prism 6.0軟件。數(shù)據(jù)以表示。采取單因素方差分析方法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 體質(zhì)量變化 見(jiàn)表1，表2。與對(duì)照組相比，孕期暴露于睪酮下子代的出生體質(zhì)量或體質(zhì)量后續(xù)并沒(méi)有發(fā)生改變。T+Flut組的雌性子代出生后4 d體質(zhì)量低于T組，越接近成年體質(zhì)量反而逐漸增加超過(guò)T組。與之相反，T+Tam組的子代出生后4～22 d體質(zhì)量一直明顯低于T組，直到成年后才接近T組體質(zhì)量。然而，T+Tam組的雄性子代出生4～65 d體質(zhì)量一直低于T組。

表1 雌性子代出生4～65 d體質(zhì)量增長(zhǎng)情況（g，）

表1 雌性子代出生4～65 d體質(zhì)量增長(zhǎng)情況（g，）

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表2 雄性子代出生4～65 d體質(zhì)量增長(zhǎng)情況（g，）

表2 雄性子代出生4～65 d體質(zhì)量增長(zhǎng)情況（g，）

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2.2 食物攝取量 與對(duì)照組相比，出生后33～65 d PNA雌雄子代的食物攝取量沒(méi)有發(fā)生明顯變化。T+ Flu組和T+Tam組較T組也沒(méi)有發(fā)生明顯變化。

2.3 肛門與外生殖器的間距 與對(duì)照組相比，PNA雌雄子代肛門與外生殖器的距離沒(méi)有差異。出生后4 d，T+Flu組雌性子代肛門與外生殖器的距離小于T組，雄性更為明顯。出生后22 d，各組間雌性子代肛門與外生殖器的距離均無(wú)顯著差異，而T+Flu和T+Tam組雄性子代與T組比較差異十分顯著，肛門與外生殖器的距離明顯小于T組。

2.4 行為反應(yīng)與焦慮的關(guān)系 1）在EPM實(shí)驗(yàn)中，PNA雌性大鼠與對(duì)照組相比，在閉合臂中活動(dòng)的時(shí)間較長(zhǎng)（P＜0.05），在開(kāi)放臂中活動(dòng)的時(shí)間較少（P＜0.05）（表3）。2）在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，睪酮組雌性子代的直立活動(dòng)少于對(duì)照組 （P＜0.05），沿邊活動(dòng)則呈增加趨勢(shì)（0.076）。在EPM實(shí)驗(yàn)中，T+Flu組的雌性子代逆轉(zhuǎn)這個(gè)結(jié)果。與T組相比，前者在閉合臂中活動(dòng)時(shí)間較短（P＜0.05），在開(kāi)放臂中活動(dòng)時(shí)間較長(zhǎng)（P＜0.05）。但是他莫昔芬并不能逆轉(zhuǎn)這種行為的改變。在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，PNA雌鼠的直立活動(dòng)頻率減少，氟他胺和他莫昔芬均能逆轉(zhuǎn)這種行為，但不能影響它們?cè)谥醒牖蜓剡厖^(qū)域的活動(dòng)時(shí)間（表4）。在任何實(shí)驗(yàn)組中，活動(dòng)速度和水平活動(dòng)均未存在差異。雄性子代的行為方式與雌性子代相似，但并不顯著。

表3 4組EPM實(shí)驗(yàn)（%，）

表3 4組EPM實(shí)驗(yàn)（%，）

與T組比較，△P＜0.05。下同。

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表4 雌雄子代的曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)（）

表4 雌雄子代的曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)（）

Ha：水平活動(dòng)；L：自發(fā)活動(dòng)；Ra：直立活動(dòng)；Pa：外圍活動(dòng)；Pr：外圍直立活動(dòng)。

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2.5 基因表達(dá)分析 本研究發(fā)現(xiàn)，T組杏仁核雄激素受體（AR）mRNA的表達(dá)顯著低于對(duì)照組1.9倍（P= 0.01），而下丘腦和海馬的AR mRNA表達(dá)沒(méi)有差異。T+Flut和T+Tam組AR mRNA與T組相比沒(méi)有改變。與對(duì)照組相比，T組海馬組織中雌激素受體α（ERα）mRNA的表達(dá)下降1.88倍。T+Flut組的雌性子代下丘腦和海馬中的ERα mRNA表達(dá)與T組相比有下降趨勢(shì)，但差異不顯著。T組和對(duì)照組相比，下丘腦ERβ mRNA的表達(dá)有下降趨勢(shì)，但差異不顯著。GPER mRNA在對(duì)照組和T組的下丘腦、海馬和杏仁核中的表達(dá)都沒(méi)有差異。在T+Flut組中，下丘腦和海馬中GPER mRNA的表達(dá)比T組下降。然而，在杏仁核中GPER mRNA在T+Flut和T+Tam組的表達(dá)顯著高于T組。

表5 雌性子代杏仁核中AR、ERα、ERβ和GPER mRNA的表達(dá)

表5 雌性子代杏仁核中AR、ERα、ERβ和GPER mRNA的表達(dá)

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3 討 論

有關(guān)于情志致病的記載最早可以追溯到《內(nèi)經(jīng)》時(shí)期，“七情”即喜、怒、憂、思、悲、恐、驚，《素問(wèn)·舉痛論》記載“百病生于氣也，怒則氣上，喜則氣緩，悲則氣消，恐則氣下，寒則氣收，炅則氣泄，驚則氣亂，勞則氣耗，思則氣結(jié)”。古代醫(yī)家多認(rèn)為情志可以影響女性經(jīng)、帶、胎、產(chǎn)等生理功能。且情志與臟腑功能失常、氣血失調(diào)是有一定關(guān)系的，其中以肝、脾、腎最為突出。肝為氣機(jī)升降之樞紐，肝主疏泄，肝氣舒暢能夠調(diào)節(jié)全身氣機(jī)疏通暢達(dá)，不郁不滯。脾在志為思，思則氣結(jié)。思慮過(guò)度導(dǎo)致心脾受損，使得心脾氣機(jī)結(jié)滯，運(yùn)化失常。腎居下焦而藏精，由腎精所化生的腎氣要依賴中上二焦才能布散到全身，恐使精氣卻而下行，導(dǎo)致腎氣無(wú)法正常地布散全身。因此驚恐過(guò)度會(huì)損傷全身臟腑的精氣，導(dǎo)致臟腑氣機(jī)逆亂。肝、脾、腎臟功能是否正常會(huì)直接影響女性月經(jīng)的變化。若情志失調(diào)，必傷及臟腑而累及氣血。情志不遂，肝失條達(dá)、疏泄功能失常，每易發(fā)生婦科疾病。

西醫(yī)學(xué)中也認(rèn)為長(zhǎng)期處于情緒應(yīng)激狀態(tài)下會(huì)對(duì)女性機(jī)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)及生殖軸產(chǎn)生影響，甚至導(dǎo)致不孕。人類生活中的許多應(yīng)激都會(huì)引起臨床上疾病的發(fā)生，其中大部分都能引發(fā)生殖內(nèi)分泌疾病。如：女性的月經(jīng)失調(diào)（月經(jīng)先期或遲后、無(wú)排卵月經(jīng)）、高雄激素血癥（多毛、多囊卵巢）、閉經(jīng)、不孕、性功能障礙等。

前期研究表明PNA大鼠表現(xiàn)為生殖障礙和代謝異常［3］，可作為PCOS模型，在本研究的EPM實(shí)驗(yàn)中，PNA雌性大鼠在閉合臂中活動(dòng)的時(shí)間明顯增加，在開(kāi)放臂中活動(dòng)的時(shí)間較少。同樣，在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，T組雌性子代的直立活動(dòng)少于對(duì)照組，而沿邊活動(dòng)則呈增加趨勢(shì)，這表明PNA雌性大鼠更為焦慮，證明PCOS發(fā)病與情志有關(guān)。

女性身體及器官對(duì)情緒的變化感應(yīng)極其敏感，所以情緒對(duì)女性身體健康更容易產(chǎn)生影響，因此情緒波動(dòng)在女性中較易導(dǎo)致疾病發(fā)生?！度f(wàn)氏女科》曰“憂愁思慮，惱怒怨恨、氣郁血滯而經(jīng)不行”，指出月經(jīng)與情緒有關(guān)。《醫(yī)宗金鑒·婦科心法要訣》曰“婦人從人不專主，病多憂忿郁傷情，血之行止與順逆，皆由一氣率而行”。由此可見(jiàn)，情志因素與婦科疾病關(guān)系密切。正如《濟(jì)生方》所云“子應(yīng)養(yǎng)血抑氣，以減喜怒，陰陽(yáng)平和，則婦人樂(lè)而有子”。李光榮［4］在對(duì)PCOS發(fā)病誘因的認(rèn)識(shí)上，強(qiáng)調(diào)了情志不遂、肝氣不舒的致病作用，認(rèn)為“腎虛是多囊卵巢綜合征的情志不遂致病基礎(chǔ)，情志不遂是其重要的發(fā)病誘因之一”。

PCOS的家族聚集性說(shuō)明該疾病具有遺傳傾向［5］，說(shuō)明PCOS的生殖和代謝異常是遺傳的，并且與性別無(wú)關(guān)。孕期PCOS女性睪酮水平升高［6］，會(huì)增加妊娠并發(fā)癥的危險(xiǎn)性，導(dǎo)致出生前雄激素化。非靈長(zhǎng)類、羊和大鼠的PNA模型的雌性子代表現(xiàn)出與PCOS女性相似的生殖和代謝異常。雄性子代在胎兒期也表現(xiàn)出生殖功能的改變，胰島素抵抗、血糖增加等代謝異常表現(xiàn)。PCOS交感神經(jīng)興奮性提高與睪酮水平升高有關(guān)［7］。除了遺傳因素會(huì)改變卵巢類固醇激素合成之外，交感神經(jīng)興奮性升高也可能是主要因素。研究發(fā)現(xiàn)，PNA雌性和雄性子代發(fā)生高血壓說(shuō)明了交感神經(jīng)興奮性對(duì)PCOS的病理生理的作用［8］。我們的前期研究證實(shí)孕期高雄（妊娠16～19 d 0.5 mg睪酮處理）的雌性子代甘油三酯和非酒精性脂肪肝升高，體質(zhì)和胰島素敏感性沒(méi)有改變［9］。但之前的研究并沒(méi)有確定胎兒期睪酮的這種劑量是否影響交感神經(jīng)和行為的改變，以及這種改變是否是通過(guò)雄激素途徑還是通過(guò)雌激素途徑來(lái)調(diào)控。

在本研究的EPM實(shí)驗(yàn)中，PNA雌性大鼠在閉合臂中活動(dòng)的時(shí)間明顯增加，在開(kāi)放臂中活動(dòng)的時(shí)間較少。同樣，在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，T組雌性子代的直立活動(dòng)少于對(duì)照組，而沿邊活動(dòng)則呈增加趨勢(shì)，這表明PNA雌性大鼠更為焦慮。T+Flu組的雌性子代的行為表現(xiàn)有所改善。與T組相比，前者在閉合臂中活動(dòng)時(shí)間較短，在開(kāi)放臂中活動(dòng)時(shí)間較長(zhǎng)。但是它莫西芬并不能逆轉(zhuǎn)這種行為的改變。在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，PNA雌鼠的直立活動(dòng)頻率減少，氟他胺和它莫西芬均能逆轉(zhuǎn)這種行為，但不能影響它們?cè)谥醒牖蜓剡厖^(qū)域的活動(dòng)時(shí)間。它莫西芬為雌激素拮抗劑，氟他胺為抗雄激素藥物。這些結(jié)果表明PNA大鼠行為的改變受雄激素途徑調(diào)控，但與雌激素途徑無(wú)關(guān)。

Marsh等［10］發(fā)現(xiàn)PCOS患者對(duì)于消極圖片的反應(yīng)是前額皮質(zhì)和腹側(cè)前扣帶回的興奮性異常提高，可以逆轉(zhuǎn)杏仁核低興奮性反應(yīng)。我們的前期研究表明雄激素能直接調(diào)節(jié)下丘腦中雄激素受體的表達(dá)，誘發(fā)雌鼠發(fā)生焦慮相關(guān)的行為表現(xiàn)［11］。暴露于DHT 1周的大鼠其自發(fā)活動(dòng)以及在EPM開(kāi)放臂活動(dòng)的時(shí)間減少，表明存在焦慮樣的行為表現(xiàn)，這與我們的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果一致。同時(shí)，下丘腦中AR的表達(dá)下降，這提示DHT誘導(dǎo)的PCOS大鼠發(fā)生雄激素誘導(dǎo)的焦慮相關(guān)行為。然而，雄激素和焦慮癥之間的關(guān)系在PCOS患者和動(dòng)物模型中仍然存在爭(zhēng)議。

出生前雄激素水平升高會(huì)影響腦形態(tài)和功能［12］，影響神經(jīng)發(fā)育導(dǎo)致后期行為異常［13］。出生后大腦繼續(xù)發(fā)育，可能通過(guò)環(huán)境而改變出生前雄激素暴露過(guò)多的子代行為表現(xiàn)。但目前，孕期雄激素過(guò)多導(dǎo)致子代成年后行為異常的機(jī)制仍未明確。

根據(jù)行為實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)宮內(nèi)環(huán)境激素水平異常使雌性子代反應(yīng)更敏感。因此，我們繼續(xù)研究雌性子代的基因表達(dá)情況。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的生理和病理功能與孕期高雄的子代的行為異常有關(guān)［14］。本研究結(jié)果顯示，T組杏仁AR mRNA的表達(dá)顯著低于對(duì)照組，而下丘腦和海馬的AR mRNA表達(dá)沒(méi)有差異。T+Flu和T+ Tam組AR mRNA與T組相比沒(méi)有改變。與對(duì)照組相比，T組海馬組織中ERα mRNA的表達(dá)下降。T+Flu組的雌性子代下丘腦和海馬中的ERα mRNA表達(dá)與T組相比有下降趨勢(shì)，但差異不顯著。T組和對(duì)照組相比，下丘腦ERβ mRNA的表達(dá)有下降趨勢(shì)，但差異不顯著。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PNA大鼠的焦慮狀態(tài)與杏仁核的AR有關(guān)，GPER對(duì)于調(diào)節(jié)焦慮有重要的作用。杏仁核可能是導(dǎo)致焦慮的主要因素。

情志因素是應(yīng)激源的一種，患者對(duì)情緒變化產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，激活下丘腦-垂體-腎上腺軸，刺激機(jī)體腎上腺源性雄激素水平升高對(duì)下丘腦-垂體-性腺軸產(chǎn)生作用，導(dǎo)致疾病PCOS。Livada［15］在一項(xiàng)130人的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)焦慮程度與胰島素抵抗程度呈正相關(guān)，并且排除了這種相關(guān)性與受調(diào)查者的體質(zhì)量指數(shù)的聯(lián)系，充分表明了情志因素與激素代謝的關(guān)系。而胰島素水平異常升高時(shí)刺激卵巢分泌雄激素過(guò)多，導(dǎo)致了高雄激素血癥，該情況可抑制卵泡刺激素－顆粒細(xì)胞軸的功能，從而阻礙卵泡生長(zhǎng)和成熟，最終形成多囊卵巢綜合征［16］。肖雯暉等［17］對(duì)首次確診PCOS的患者 （在告知診斷前）和正常女性進(jìn)行“七情背景和七情生活事件量表”的測(cè)評(píng)。通過(guò)整理量表及統(tǒng)計(jì)研究證實(shí)PCOS的發(fā)病與不良情志活動(dòng)可能有關(guān)系。

［1］ 宗紹波，魏盛，蘇云祥，等.焦慮大鼠模型高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)的復(fù)測(cè)信度檢驗(yàn)及參數(shù)相關(guān)性分析［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，8（30）：5-7.

［2］ 林曉春，李云鵬，卞艷芳，等.大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)及參考值的探討［J］.毒理學(xué)雜志，2010，24（3）：224-225.

［3］ Yang X，Zhang Y，Wu X，et al.Cryptotanshinone reverses reproductive and metabolic disturbances in prenatally androgenized rats via reguLation of ovarian signaling mechanisms and androgen synthesis［J］.Am J Physiol：ReguLatory，Integrative and Comparative Physiology，2011，300（4）：R869-875.

［4］ 王燕，劉瑩.情志不遂是多囊卵巢綜合征發(fā)病的重要誘因之一—李光榮教授診治多囊卵巢綜合征臨床經(jīng)驗(yàn)［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2010，25（11）：1812-1813.

［5］ Urbanek M.The genetics of the polycystic ovary syndrome［J］. Nat Clin Pract Endocrinol Metab，2007，3（2）：103-111.

［6］ Sir-Petermann T，Maliqueo M，Angel B，et al.Maternal serum androgens in pregnant women with polycystic ovarian syndrome：possible implications in prenatal androgenization［J］. Hum Reprod，2002，17（10）：2573-2579.

［7］ Sverrisdottir YB，Mogren T，Kataoka J，et al.Is polycystic ovary syndrome associated with high sympathetic nerve activity and size at birth［J］.American journal of physiology Endocrinology and metabolism，2008，294（3）：E576-581.

［8］ Chinnathambi V，Balakrishnan M，Ramadoss J，et al.Testosterone alters maternal vascuLar adaptations：role of the endothelialNO system［J］.Hypertension，2013，61（3）：647-654.

［9］ Sun M，Maliqueo M，Benrick A，et al.Maternal androgen excess reduces placental and fetal weights，increases placental steroidogenesis，and leads to long-term health effects in their female offspring［J］.American journal of physiology Endocrinology and metabolism，2012，303（11）：E1373-1385.

［10］Marsh CA，Berent-Spillson A，Love T，et al.Functional neuroimaging of emotional processing in women with polycystic ovary syndrome：a case-control pilot study［J］.Fertility and sterility，2013，100（1）：200-207.

［11］Feng Y，Shao R，Weijdegard B，et al.Effects of androgen and leptin on behavioral and celluLar responses in female rats［J］. Hormones and behavior，2011，60（4）：427-438.

［12］Auyeung B，Lombardo MV，Baron-Cohen S.Prenatal and postnatal hormone effects on the human brain and cognition. Pflugers Archiv［J］.European journal of physiology，2013，465（5）：557-571.

［13］Lombardo MV，Ashwin E，Auyeung B，et al.Fetal programming effects of testosterone on the reward system and behavioral approach tendencies in humans［J］.Biological psychiatry，2012，72（10）：839-847.

［14］Fauser BC，Tarlatzis BC，Rebar RW，et al.Consensus on women′s health aspects of polycystic ovary syndrome（PCOS）：the Amsterdam ESHRE/ASRM-Sponsored 3rd PCOS Consensus Workshop Group［J］.Fertility and sterility，2012，97（1）：28-38.

［15］Sarantislivadas，Sofia Chaskou，Anna A，et al.Anxiety is associated with hormonal and etabolic profilein women with polycystic ovarian syndrome［J］.Clinical En-docrinology，2011（75）：698-703.

［16］夏翠翠，侯麗輝.多囊卵巢綜合征的重要致病因素—情志不遂［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2015，11（4）：51-52.

［17］肖雯暉，裘秀月，張婷，等.多囊卵巢綜合征患者情志狀況及其影響因素觀察［J］.浙江中醫(yī)雜志，2011，46（11）：795-796.

Investigation of the Relationship between Polycystic Ovary Syndrome and Emotion Based on the Anxiety Behavior in Prenatally Androgenized Rats

YANG Xinming，HU Min，PENG Yan，et al.

The First Affiliated Hospital of Heilongjiang University of Chinese Medicine，Heilongjiang，Harbin 150040，China.

Objective：To observe whether the androgen excess in utero environment affected the behavior of the offspring，and to explore the possible mechanism of anxiety and the relationship between polycystic ovary syndrome and emotion after the female mice were exposed to the androgen excess in the second trimester of pregnancy.Methods：T，T+Flu and T+Tam were used in the second trimester of pregnancy on Wistar rats for three days. The basic conditions，behaviours and the expression of key genes in the hypothalamus，hippocampus and amygdala of the central nervous system of the mice offspring were observed.Results：1）The expression of ARmRNA in T group was lower than that in the control group.2）Compared with the control group，the expression of ERαmRNA in the mice offspring in T group decreased.3）In T+Flu group，the expression of GPER mRNA in hypothalamus and hippocampus decreased compared with that in T group.Compared with T group，the expression of GPER mRNA in T+Flu and T+Tam groups increased significantly.Conclusion：The anxiety behavior of PNA rats is more obvious，and the abnormal expression of the rats is achieved by the androgen pathway.It shows that the mice offspring is involved in stress responses to excessive androgen environment during the pregnancy of the female rats. It affects the central nervous system of the mice offspring by the androgen pathway thus producing the anxiety behaviours.

Androgen excess；Polycystic ovary syndrome；Anxiety；Central nervous system

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（81373674）；黑龍江省高校新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃（1254-NCET-021）；教育部春暉計(jì)劃（Z20100035）；黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)“優(yōu)秀創(chuàng)新人才支持計(jì)劃”

△（電子郵箱：xiaokewu2002@vip.sina.com）

R285.5

A

1004-745X（2016）11-2021-05

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.11.001

（2016-05-05）