張蓓莉， 何 艮， 皮雄娥， 王 欣， 麥康森， 周慧慧

(1.中國(guó)海洋大學(xué)教育部海水養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266003； 2.浙江省農(nóng)科院植物保護(hù)與微生物所，浙江 杭州 310021)

豆粕發(fā)酵菌株篩選和鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化?

張蓓莉1， 何 艮1， 皮雄娥2??， 王 欣2， 麥康森1， 周慧慧1

(1.中國(guó)海洋大學(xué)教育部海水養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266003； 2.浙江省農(nóng)科院植物保護(hù)與微生物所，浙江 杭州 310021)

為篩選出能夠高效降解豆粕碳水化合物和蛋白的菌株，并優(yōu)化菌株發(fā)酵條件。以纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶活力為指標(biāo)，從真菌A-1、A-2、O-1、M-4 、Y-11和細(xì)菌KC 6株菌株中篩選出1株產(chǎn)酶豐富的菌株。利用18S rRNA基因序列法鑒定該菌株，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化菌株的發(fā)酵條件。研究表明：A-1和M-4纖維素酶活力顯著高于其它菌株(P<0.05)， A-2木聚糖酶活力顯著性高于其它菌株(P<0.05)，A-1和A-2果膠酶活力顯著高于其他菌株(P<0.05)，A-1蛋白酶活力顯著高于其它菌株(P<0.05)。綜合比較，選擇A-1作為發(fā)酵豆粕菌株。經(jīng)基因序列鑒定，A-1菌株為泡盛曲霉(Aspergillusawamori)。其最適的發(fā)酵條件為：料水比為1∶1.1，發(fā)酵溫度為31 ℃，發(fā)酵時(shí)間為37 h，添加的營(yíng)養(yǎng)因子為2‰K2HPO4、2‰NaCl、2‰(NH4)2SO4、1%葡萄糖、2‰尿素。在此發(fā)酵條件下，豆粕中蛋白質(zhì)含量從50.8%提高到61.7%，可溶性氮指數(shù)(TCA-NSI)從3.9%提高到19.8%，胰蛋白酶抑制因子含量從2 mg/g降到0.4 mg/g以下，水蘇糖含量從32.52 mg/g降到0.39 mg/g，棉籽糖含量從12.09 mg/g降到0.73 mg/g。大豆球蛋白含量從94 mg/g降到1.4 mg/g以下，β-伴球蛋白含量從109.2 mg/g降到2.8 mg/g以下。研究結(jié)果表明：泡盛曲霉能顯著提高豆粕蛋白質(zhì)含量，降低抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高豆粕的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。本研究為利用微生物發(fā)酵豆粕替代魚粉提供了理論基礎(chǔ)。

豆粕；發(fā)酵；纖維素酶；木聚糖酶；果膠酶；蛋白酶；發(fā)酵條件

水產(chǎn)品脂肪含量低、蛋白質(zhì)含量高、營(yíng)養(yǎng)平衡、味道鮮美。隨著國(guó)民生活水平的提高和健康飲食觀念的普及，水產(chǎn)品已成為必不可少的膳食構(gòu)成成分。1989年以來(lái)，我國(guó)水產(chǎn)品產(chǎn)量已連續(xù)22年居世界首位。為滿足國(guó)民對(duì)水產(chǎn)品日益增長(zhǎng)的需求，我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)模逐年擴(kuò)大，水產(chǎn)品年產(chǎn)量不斷提高。水產(chǎn)養(yǎng)殖離不開魚油和魚粉。水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展導(dǎo)致魚油和魚粉價(jià)格不斷上揚(yáng)。因此，用植物蛋白替代魚粉備受關(guān)注。研究表明[1-2]，植物蛋白部分替代魚粉是可行的。但是，過(guò)量植物蛋白會(huì)急劇降低水生動(dòng)物生長(zhǎng)[3]。因此，亟待尋找能媲美魚粉的蛋白源。

豆粕是主要植物蛋白源之一，來(lái)源廣，價(jià)格低，易儲(chǔ)存，營(yíng)養(yǎng)較均衡。用豆粕替代飼料魚粉已有許多研究報(bào)道[4-5]。豆粕含有大量碳水化合物、胰蛋白酶抑制因子、大豆寡糖、抗原蛋白、植酸、凝集素和大豆皂甙等抗?fàn)I養(yǎng)因子，其在水產(chǎn)飼料特別是天然“糖尿病”的肉食性魚飼料中的應(yīng)用受到限制。肉食性魚不能降解糖類也不耐受糖類，而豆粕含35%左右的碳水化合物。細(xì)胞壁纖維素將豆粕蛋白包裹起來(lái)，阻礙了魚類利用蛋白質(zhì)。美國(guó)國(guó)家研究委員會(huì)(NRC)指出植物蛋白含大量碳水化合物和粗纖維等，肉食性魚類難消化這些組分[6]。豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子阻礙魚類消化吸收其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。另外，大豆抗原蛋白具有致敏性，易引發(fā)炎癥反應(yīng)。在虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[7]和大西洋鮭(Salmosalar)[8]飼料中，高比例豆粕替代魚粉導(dǎo)致腸道炎癥，不同程度損傷黏膜。許多研究表明，微生物發(fā)酵能降低豆粕抗?fàn)I養(yǎng)因子含量、釋放游離氨基酸，改善豆粕營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[9]，提高水產(chǎn)動(dòng)物的飼料利用率[10]。以往的研究[11-12]發(fā)現(xiàn)豆粕的微生物發(fā)酵不能徹底分解碳水化合物，是豆粕不能高比例替代魚粉的原因之一。本研究篩選高效降解碳水化合物和蛋白質(zhì)的真菌菌株，并優(yōu)化發(fā)酵條件，以降低豆粕碳水化合物含量，提高豆粕蛋白利用率。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 微生物菌株 真菌O-1和M-4由本實(shí)驗(yàn)室保藏。真菌A-1和A-2，酵母Y-11和細(xì)菌枯草芽孢桿菌KC由浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)與微生物所保藏。原料豆粕(干物質(zhì)蛋白質(zhì)含量50.8%)由山東六和集團(tuán)有限公司提供。

1.1.2 察氏瓊脂培養(yǎng)基含硝酸鈉(NaNO3)3g，磷酸氫二鉀(K2HPO4)1g，硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.5g，氯化鉀(KCl)0.5g，硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)0.01g，蔗糖30g，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，pH值不做調(diào)整，121℃滅菌20min。PDA瓊脂培養(yǎng)基含馬鈴薯(去皮)200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000ml，pH值不做調(diào)整，121℃滅菌20min。LB瓊脂培養(yǎng)基含胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L，酵母提取物(Yeast extract) 5g/L，氯化鈉(NaCl) 10g/L，瓊脂20g，水1000mL，pH值不做調(diào)整，121℃滅菌20min。菌種擴(kuò)繁培養(yǎng)基含麩皮9g，豆粕1g，K2HPO40.1g，水10mL，pH不做調(diào)整，121 ℃滅菌20min。豆粕發(fā)酵培養(yǎng)基：豆粕40g，pH不做調(diào)整，121 ℃滅菌20min。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菌種的保藏及處理 將毛霉O-1、M-4接種至察氏瓊脂斜面培養(yǎng)基，曲霉A-1、A-2，酵母Y-11接種至 PDA瓊脂斜面培養(yǎng)基，枯草芽孢桿菌KC接種至LB瓊脂斜面培養(yǎng)基，并在對(duì)應(yīng)培養(yǎng)條件下活化、培養(yǎng)，活化后在4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 菌株的篩選 將各菌株接種至豆粕發(fā)酵培養(yǎng)基。真菌置于28℃，細(xì)菌置于37℃培養(yǎng)2d，55℃烘干粉碎，檢測(cè)纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶的酶活力。

1.2.3 菌株鑒定及保藏 菌株采用18S rRNA基因序列測(cè)定法進(jìn)行菌株鑒定，由上海美吉公司執(zhí)行。所述菌株已于2015年3月24日保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CTCC NO：M2015155。

1.2.4 發(fā)酵條件優(yōu)化 用無(wú)菌生理鹽水將菌種擴(kuò)繁培養(yǎng)基上的孢子洗脫下來(lái)，調(diào)節(jié)孢子密度至1×108個(gè)/mL，接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量為1mL。設(shè)置4個(gè)因素，以不接種的豆粕發(fā)酵培養(yǎng)基為對(duì)照，3個(gè)重復(fù)，分別優(yōu)化料水比、發(fā)酵溫度、營(yíng)養(yǎng)因子和發(fā)酵時(shí)間。

料水比7個(gè)，分別為：1∶0.7、1∶0.8、1∶0.9、1∶1、1∶1.1、1∶1.2和1∶1.3，發(fā)酵條件pH不調(diào)節(jié)、28℃、40h。固定料水比 1∶1.1，設(shè)置發(fā)酵溫度5個(gè)，分別為25、28、31、34和37℃。 固定料水比1∶1.1和31℃發(fā)酵溫度，設(shè)置營(yíng)養(yǎng)因子5個(gè)：1%K2HPO4+1%NaCl、2%(NH4)2SO4、2%葡萄糖、2%尿素和2‰K2HPO4+2‰NaCl+2‰(NH4)2SO4+1%葡萄糖+2‰尿素。固定料水比1∶1.1，添加完整營(yíng)養(yǎng)因子(2‰K2HPO4、2‰NaCl、2‰(NH4)2SO4、1%葡萄糖、2‰尿素)，固定發(fā)酵溫度31 ℃，設(shè)置發(fā)酵時(shí)間6個(gè)：22、28、31、34、37和40 h。

發(fā)酵結(jié)束后， 55 ℃烘干，粉碎后密封備用。

1.2.5 檢測(cè)方法 纖維素酶活力測(cè)定參照王琳等[13]的檢測(cè)方法；木聚糖酶活力測(cè)定參照費(fèi)迪波[14]；果膠酶活力測(cè)定參照陳小湘[15]；蛋白酶酶力測(cè)定參考趙彩艷[16]；蛋白質(zhì)用凱氏定氮法，可溶性氮總含量的測(cè)定用TCA-NSI法[17]。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 用SPSS16.0 for windows 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析。若差異顯著，則用Duncan檢驗(yàn)法進(jìn)行多重比較，顯著水平為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株篩選

不同菌株產(chǎn)酶種類和所產(chǎn)酶的活力不同。比較纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶、蛋白酶酶活力篩選菌株。由圖1可知， A-1木聚糖酶活力低于A-2(P<0.05)，但其纖維素酶、果膠酶和蛋白酶活力顯著高于其他菌株(P<0.05)。因此，從整體角度考慮，我們選取A-1為豆粕發(fā)酵菌株。

2.2 菌株A-1的鑒定結(jié)果

菌株A-1在PDA平板上的菌落呈橄欖褐色，菌落反面為土黃色至黃褐色，絨毛狀，放射性分布，成熟后產(chǎn)生黃褐色孢子。對(duì)A-1的18S rRNA基因序列進(jìn)行測(cè)定后再在NCBI中使用Blast進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)菌株A-1的18S rRNA基因序列與Aspergillus awamori (KF922319.1, GenBank)和Aspergillus niger(KF758784.1, GenBank)的基因序列同源性為100%，結(jié)合菌株的形體學(xué)特征，確定菌株A-1為泡盛曲霉(Aspergillusawamori)。

2.3 發(fā)酵條件優(yōu)化

研究結(jié)果表明料水比顯著影響A-1發(fā)酵豆粕性能(P<0.05)。料水比從1∶0.7到1∶1.3， A-1先提高發(fā)酵豆粕蛋白質(zhì)含量后降低其含量。料水比1∶1.1時(shí)，發(fā)酵性能最好，發(fā)酵豆粕蛋白含量最高(見圖2)。因此，料水比1∶1.1最佳。最佳料水比時(shí)，溫度顯著性影響A-1豆粕發(fā)酵性能P<0.05)。從25～37℃， A-1先顯著提高豆粕蛋白質(zhì)含量，然后降低。28和31℃時(shí)，發(fā)酵性能最好，顯著提高豆粕蛋白含量(P<0.05)。31比28℃更顯著縮短發(fā)酵時(shí)間。因此， 31℃為最佳發(fā)酵時(shí)間。

圖1 不同菌株的酶活力

不同營(yíng)養(yǎng)鹽也顯著性影響A-1發(fā)酵豆粕性能。2%尿素和全營(yíng)養(yǎng)成分時(shí)，A-1顯著增加豆粕蛋白質(zhì)含量，全營(yíng)養(yǎng)鹽時(shí)可溶性氮指數(shù)(TCA-NSI)最高(見圖3)。因此，最佳營(yíng)養(yǎng)因子為全營(yíng)養(yǎng)鹽。發(fā)酵時(shí)間顯著影響A-1發(fā)酵豆粕性能。從22～40h，豆粕蛋白質(zhì)含量呈現(xiàn)先升高后降低趨勢(shì)。34和37h時(shí)，發(fā)酵豆粕蛋白質(zhì)含量顯著高于時(shí)間。37～40h時(shí)，發(fā)酵豆粕可溶性氮指數(shù)顯著高于其他時(shí)間(P<0.05)。因此，最佳發(fā)酵時(shí)間為37h。

綜上，泡盛曲霉的最適發(fā)酵條件為：料水比為1∶1.1，發(fā)酵溫度為31℃，發(fā)酵時(shí)間為37h，添加的營(yíng)養(yǎng)因子為2‰K2HPO4、2‰NaCl、2‰(NH4)2SO4、1%葡萄糖、2‰尿素。

圖2 料水比和溫度對(duì)A-1發(fā)酵豆粕蛋白質(zhì)含量的影響

圖3 營(yíng)養(yǎng)因子(A)和時(shí)間(B)對(duì)A-1發(fā)酵豆粕蛋白質(zhì)含量和可溶性氮指數(shù)(TCA-NSI)的影響

2.4 發(fā)酵前后豆粕品質(zhì)變化

優(yōu)化發(fā)酵條件下，豆粕發(fā)酵前后蛋白質(zhì)含量從50.8%提高到61.7%，TCA-NSI從3.9%提高到19.8%。必需氨基酸含量也有不同程度的提高(見表1)。發(fā)酵前后，豆粕中胰蛋白酶抑制因子含量從2mg/g降到<0.4mg/g，水蘇糖含量從32.52mg/g降到0.39mg/g，棉籽糖含量從12.09mg/g降到0.73mg/g。大豆蛋白中，抗原蛋白分子量分布在35～60kD(見圖4)。豆粕經(jīng)發(fā)酵后這部分蛋白幾乎全部被分解。分子量在11～35 kD的蛋白也得到了有效的降解。發(fā)酵豆粕的蛋白質(zhì)分子量多在11kD以下。發(fā)酵后， 大豆球蛋白由94 mg/g降到<1.4mg/g，β-伴球蛋白由109.2mg/g降到<2.8mg/g。由此可見，豆粕經(jīng)A-1發(fā)酵后，品質(zhì)有了顯著提升。

表1 A-1發(fā)酵前后豆粕必需氨基酸含量變化

①Essential amino acid；②Soybean meal；③Fermented soybean meal

(Maker:蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品Protein standard；SBM:豆粕Soybean meal；FSBM:發(fā)酵豆粕Fermented soybean meal.)

圖4 豆粕的蛋白質(zhì)SDS-PAGE圖

Fig.4 The protein profiles of soybean meal by SDS-PAGE

3 討論

豆粕是大豆榨油副產(chǎn)品，是水產(chǎn)飼料重要植物性蛋白源之一。然而，其碳水化合物大約占35%，難消化，降低了肉食性魚類植物蛋白消化率[6]。目前，發(fā)酵豆粕研究熱點(diǎn)集中在抗?fàn)I養(yǎng)因子的鈍化或降解[18]，而對(duì)其難消化的碳水化合物研究較少，特別是在肉食性水產(chǎn)動(dòng)物飼料領(lǐng)域。本研究用泡盛曲霉A-1在37h內(nèi)有效降解豆粕碳水化合物和大分子蛋白質(zhì)，獲得與Song等[19]和嚴(yán)鶴松等[20]的研究相似的結(jié)果。

與液體發(fā)酵不同，固態(tài)發(fā)酵物料的含水量非常重要，料水比不僅影響微生物從培養(yǎng)基中獲取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力，還影響培養(yǎng)系統(tǒng)氣體流動(dòng)及微生物獲取氧氣進(jìn)行自身生長(zhǎng)代謝的能力[21]。本研究中，泡盛曲霉A-1在料水比為1∶1.1～1∶1.2，即含水110%～120%時(shí)，對(duì)豆粕中的碳水化合物有最佳降解。其原因可能是發(fā)酵基質(zhì)含水量低時(shí)，基質(zhì)表面形成水膜小，不能溶解足夠泡盛曲霉生長(zhǎng)所需要的無(wú)機(jī)鹽及代謝產(chǎn)物，影響了泡盛曲霉的生長(zhǎng)。而當(dāng)含水量過(guò)高時(shí)，發(fā)酵基質(zhì)的多孔性降低，影響了基質(zhì)內(nèi)氣體的體積和氣體交換，難以控溫控濕，不利于耗氧的泡盛曲霉的生長(zhǎng)。本研究結(jié)果也表明在料水比為1∶0.7時(shí)，對(duì)豆粕碳水化合物降解效果最差。這與劉建峰等[22]在用響應(yīng)面分析法優(yōu)化豆粕固態(tài)發(fā)酵的料水比1∶1類似。然而，楊玉芬[23]在用乳酸菌、酵母菌及枯草芽孢桿菌發(fā)酵豆粕時(shí)發(fā)現(xiàn)水分對(duì)豆粕蛋白質(zhì)含量的影響不大。這可能是與菌種有關(guān)。乳酸菌和酵母菌對(duì)氧氣的需求量不大，發(fā)酵所需要的水分也低。王曉東等[24]的研究發(fā)現(xiàn)初始水分含量為200%時(shí)，黑曲霉對(duì)雙低菜粕中的植酸和單寧有更好的降解效果。這可能是由于不同的物料發(fā)酵水分消耗不同。菜粕較其他物料吸水性更強(qiáng)，菌種生長(zhǎng)所需要的水分就更多。同時(shí)，發(fā)酵后期菌株的快速生長(zhǎng)產(chǎn)生大量的熱，會(huì)蒸發(fā)掉菜粕中的水分，影響發(fā)酵。

不同菌株適應(yīng)溫度不同，對(duì)原料的利用和分解速度也不同。因此，在發(fā)酵過(guò)程中溫度是必須優(yōu)化的條件之一。本研究發(fā)現(xiàn)，泡盛曲霉A-1在28和31 ℃時(shí)發(fā)酵豆粕蛋白質(zhì)含量最高(P<0.05)。莫重文等[25]用米曲霉(A3.042)和啤酒酵母在28 ℃時(shí)混合發(fā)酵豆粕，發(fā)酵豆粕蛋白含量顯著增高，增加了12.1%。也有研究發(fā)現(xiàn)混合菌株在35 ℃時(shí)，發(fā)酵豆粕的蛋白質(zhì)含量最高[26]。這可能與菌株的耐熱性有關(guān)。菌株生長(zhǎng)時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量的熱，若菌株的耐熱性差，就會(huì)導(dǎo)致發(fā)酵失敗。

4 結(jié)論

泡盛曲霉是一株產(chǎn)纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶等酶類，能有效降解豆粕多糖、低聚糖及細(xì)胞壁等碳水化合物成分，進(jìn)而提高豆粕蛋白質(zhì)含量的菌株。用該菌株發(fā)酵豆粕，豆粕蛋白質(zhì)含量由50.8%提高至61.7%。該菌株也能有效降解大分子蛋白質(zhì)，使豆粕中的可溶性氮指數(shù)由3.9%提高至19.8%。發(fā)酵降低了大豆寡糖(水蘇糖和棉籽糖等)抗?fàn)I養(yǎng)因子含量。降解大分子蛋白質(zhì)的同時(shí)也降低了致敏性抗原蛋白(大豆球蛋白和β-伴球蛋白)和其他抗?fàn)I養(yǎng)因子(胰蛋白酶抑制因子)的含量，提高了必需氨基酸的含量和豆粕營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，為發(fā)酵豆粕替代魚粉，拓展肉食性水產(chǎn)動(dòng)物的飼料蛋白源提供了認(rèn)知依據(jù)。

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責(zé)任編輯 朱寶象

Isolation and Identification of a Strain Fermenting Soybean Meal and Optimization of Fermentation Process

ZHANG Bei-Li, HE Gen, PI Xiong-E, WANG Xin, MAI Kang-Sen, ZHOU Hui-Hui

(1.The Key Laboratory of Mariculture, Ministry of Education, Ocean University of China, Qingdao 266003, China; 2. Institute of Plant Protection and Microbiology, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310021, China)

This study aimed to screen strains which can efficiently degrade carbohydrates and proteins of soybean meal and to optimize fermentation conditions. By taking the activities of cellulase, xylanase, pectinase and protease activities as indexes, a strain A-1 which can produce rich enzymes was obtained by screening 6 strains including the fungi A-1, A-2, O-1, M-4, Y-11 and the bacterium KC. Then, the 18S rRNA gene of these fungal strains was sequences and analyzed. Meanwhile, single factor experiments were conducted to optimize the fermentation conditions for soybean meal in which the strain A-1 was used to improve the protein content. The study showed that A-1 and M-4 had significantly high ability of producing cellulase (P< 0.05), while A-2 showed the highest xylanase production (P< 0.05). Meanwhile the pectinase was highly produced by A-1and A-2. Moreover, the A-1 had the highest yield of protease compared with other strains. In conclusion, A-1 was selected as fermentation strain and it was identified to beAspergillusawamori. The optimal fermentation condition was to ferment the soybean meal with 2‰ K2HPO4, 2‰ NaCl, 2‰ (NH4)2SO4, 1‰ glucose, 2‰ urea and the soybean meal-water ratio of 1∶1.1 at 31℃ for 37 h. Under such fermentation condition, the protein content of soybean meal raised from 50.8% to 61.7% and the trichloroacetic acid-nitrogen solubility index (TCA-NSI) grew from 3.9% to 19.8%. While, the contents of stachyose, trypsin inhibitor, and raffinose dropped from 32.52 mg/g, 2 mg/g, and 12.09 mg/g to 0.39 mg/g, less than 0.4mg/g, and 0.73 mg/g, respectively. Furthermore, the soy glycinin content declined from 94 mg/g to less than 1.4 mg/g, accompanying with the reduction of the β-conglycinin content from 109.2 mg/g to lower than 2.8 mg/g. The results proved thatA.awamoriwas able to significantly improve the protein content of soybean meal and reduce anti-nutritional factors thus improve the nutrition value of soybean meal. This research results provided a basis for replacing fish meal with soybean meal effectively fermented byA.awamori..

soybean meal; fermentation; cellulase; xylanase; pectinase; protease; fermentation condition

農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(201303053)；浙江省公益項(xiàng)目(2014R17A52D02)資助 Supported by Special Fund for Agro-Scientific Research in the Public Interest (201303053); Public Welfare Projects of Zhejiang Province (2014R17A52D02)

2015-11-19；

2016-05-12

張蓓莉(1987-)，女，博士生。E-mail:zbleducation@163.com

?? 通訊作者: E-mail:pixionge@163.com

S963.5

A

1672-5174(2017)01-061-07

10.16441/j.cnki.hdxb.20150395

張蓓莉， 何艮， 皮雄娥， 等. 豆粕發(fā)酵菌株篩選和鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2017, 47(1)： 61-67.

ZHANG Bei-Li, HE Gen, PI Xiong-E, et al. Isolation and identification of a strain fermenting soybean meal and optimization of fermentation process [J]. Periodical of Ocean University of China, 2017, 47(1)： 61-67.