蔡紫玲，吳華俊，林 同

(華南農(nóng)業(yè)大學林學與風景園林學院，廣東 廣州 510642)

松墨天牛谷氨酰胺6-磷酸果糖酰胺轉移酶基因克隆與表達

蔡紫玲，吳華俊，林 同*

(華南農(nóng)業(yè)大學林學與風景園林學院，廣東 廣州 510642)

谷氨酰胺6-磷酸果糖酰胺轉移酶(glutamine-fructose-6-phosphate aminotransferase，GFAT)是己糖胺通路(HBP)的限速酶, 參與幾丁質的合成和蛋白質的糖基化。本研究利用RACE克隆了松墨天牛GFAT基因(MaGFAT)，GenBank登錄號為 KT362367，其長度為2624 bp，開放閱讀框為2061 bp，編碼686個氨基酸。序列對比分析顯示MaGFAT與赤擬谷盜相似性最高，為88 %，在系統(tǒng)發(fā)育樹上位于同一分支。采用RT-qPCR方法檢測MaGFAT在松墨天牛不同組織及不同發(fā)育時期的表達情況，結果表明：MaGFAT在各蟲態(tài)中，成蟲中的表達量最高；在成蟲部位中，翅的表達量最高；在幼蟲各組織中，體壁的表達量最高。本文為研究GFAT結構與功能的關糸奠定基礎，為闡明GFAT在松墨天牛幾丁質合成中的作用提供參考。

松墨天牛；谷氨酰胺6-磷酸果糖酰胺轉移酶；基因克??；RT-qPCR

谷氨酰胺6-磷酸果糖酰胺轉移酶(glutamine-fructose-6-phosphate aminotransferase，GFAT)是己糖胺通路(HBP)的限速酶[1]，參與幾丁質的合成和蛋白質的糖基化。葡萄糖進入細胞后先轉變?yōu)?-磷酸果糖，在GFAT催化下生成6-磷酸葡糖胺，經(jīng)過中間代謝環(huán)節(jié)，最終轉化為二磷酸尿嘧啶N-乙酰氨基葡萄糖(UDP-GlcNAc)[2]。其中，UDP-GlcNAc是蛋白質糖基化的重要底物，也是幾丁質(β-1，4-N-乙酰-D-葡萄胺(β-(1-4)-NAcGA))的活性前體。幾丁質是細菌和真菌的細胞壁重要組成成分[3]，也是節(jié)肢動物的表皮和中腸圍食膜(PM)的主要成分[4]。Hornung 等指出GFAT在幾丁質從頭合成中起重要作用[5-7]。

松墨天牛(MonochamusalternatusHope)，隸屬于鞘翅目(Coleoptera)，天?？?Cerambycidae)，主要危害馬尾松(Pinusmassoniana)，油松(P.tabulaeformis)，黑松(P.thunbergii)等生長衰弱或新伐倒的針葉樹，是松材線蟲[Bursaphelenchusxylophilus(Steiner & Buhrer)]病的主要傳播媒介昆蟲[8-9]。

目前，GFAT的研究并不廣泛，主要研究對象集中在人類、小鼠、酵母和節(jié)肢動物，未見有關松墨天牛GFAT的研究。本文從松墨天牛cDNA文庫中克隆了GFAT基因，研究了該基因在松墨天牛各蟲態(tài)、成蟲6個部位、幼蟲5個組織中的表達，旨在為研究GFAT結構與功能的關糸奠定基礎，為闡明GFAT在松墨天牛幾丁質合成中的作用提供參考。

1 材料與方法

1.1 松墨天牛

松墨天牛幼蟲由廣東省林科院惠贈，采用人工飼料飼養(yǎng)[10]。分別收集交配期成蟲的觸角、頭(去除觸角)、胸、足、翅、腹節(jié)等組織樣品和幼蟲的體壁、脂肪體、血淋巴、中腸、馬氏管等組織樣品；同時收集松墨天牛的3齡幼蟲以及10 d蛹及羽化3 d的成蟲。樣品置液氮中迅速冷卻后保存于-80 ℃冰箱備用。

1.2 主要試劑

E.Z.N.A.TMTotal RNA Kit II總RNA提取試劑盒購自OMEGA公司；3'-Full RACE Core Set with PrimeScriptTMRTase試劑盒、LATaqDNA聚合酶、pMD20-T Vector試劑盒、E.coliDH5 α Competent Cells、PrimeScript?RT reagent Kit With gDNA Eraser反轉錄試劑盒、SYBR?Premix ExTaqTM實時熒光定量試劑盒購自TaKaRa公司；通用型DNA純化回收試劑盒、質粒提取試劑盒為天根生物有限公司產(chǎn)品；IPTG，X-Gal等試劑購自上海生工生物工程有限公司。

1.3 RNA的提取和反轉錄

按照RNA抽提試劑盒(Omega公司)使用說明，提取松墨天牛各樣本的總RNA。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳和微量紫外分光光度儀(Nanodrop 2000)檢測后，按PrimeScript?RT reagent Kit With gDNA Eraser反轉錄說明書合成單鏈cDNA，稀釋10倍用作實時熒光定量PCR(RT-qPCR)的模板。

1.4 引物設計

根據(jù)本實驗室構建的松墨天牛cDNA文庫[11]，篩選出一段谷氨酰胺6-磷酸果糖酰胺轉移酶序列，以此序列為基礎，利用Primer premier 5.0軟件設計引物Outer:5′-ATCTCGCTCGTGATGTTCG-3′和Inner:5′-TATGAGGGACCCCGTTTA-3′，并利用試劑盒中的通用引物3′RACE Outer:5′-TACCGTCGTTCCACTAGTGATTT-3′和3′RACE Inner:5′-CGCGGATCCTCCACTAGTGATTTCACTATAGG-3′進行3′RACE。設計引物Forward(正向)(5′-TTGTGATGAGCGAAGACAGG-3′)和Reverse(反向)(5′-CGGCCAACACCTTAACTTTG-3′)，以及內參基因引物β-actin Forward(正向)(5′-CTCTGCTATGTAGCCCTTGACTT-3′)和β-actin Reverse(反向)(5′-GGAGTTGTAGGTGGTTTCGTG-3′)用于RT-qPCR。引物合成由上海生物工程有限公司完成。

隨著市場的發(fā)展和科學的進步，水利施工企業(yè)對人才的需求量急劇增加，人才培養(yǎng)已經(jīng)成為了實現(xiàn)“人才強企”戰(zhàn)略的主要手段。注重培養(yǎng)具有較強專業(yè)素質及發(fā)展?jié)摿Φ墓芾砣瞬?、技術人才、一崗多技和一崗多能的復合型人才，對企業(yè)的發(fā)展至關重要。由于水利施工行業(yè)的特殊性，絕大多數(shù)員工均在施工一線工作，工作地點遠離城鎮(zhèn)且條件艱苦，工程項目多而分散，無法集中進行學習培訓，這種人員的分散性決定了水利施工企業(yè)人才培養(yǎng)的難度。針對水利施工企業(yè)的上述特點，如何培養(yǎng)人才、留住人才，是擺在水利施工企業(yè)面前的難題。

1.5 基因克隆與序列分析

1.5.1 PCR與RACE 以合成的cDNA為模板，加入10×ExTaq聚合酶反應緩沖液2.5 μl(含Mg2+)，正向和反向引物各0.5 μl(10 μmol/L)，dNTP 2 μl(2.5 μmol/L)，ExTaqDNA聚合酶0.5 μl(5 U/μl)，加ddH2O至25 μl，混勻離心(3000 r/min 10s)后進行PCR擴增。

以特異性引物Outer及試劑盒中提供的通用引物3′RACE Outer進行第1輪PCR，特異性引物Inner及通用引物3′RACE Inner通過巢式PCR。PCR反應條件：94 ℃預變性3 min；94攝氏度30 s；55 ℃(第1輪)、58 ℃(巢式) 30 s、72 ℃ 1 min，35個循環(huán)；72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1 %瓊脂糖凝膠電泳分析?；厥漳康钠巍⑴cpMD20-T載體連接、轉化大腸桿菌，挑選陽性克隆測序。

1.5.2 序列測定 PCR及RACE產(chǎn)物經(jīng)回收純化后連接到pMD20-T克隆載體，進一步轉化到感受態(tài)大腸桿菌DH5α中，經(jīng)氨芐青霉素和藍白斑篩選，37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)重組質粒12 h，提取白斑質粒DNA檢測。測序由上海生物工程有限公司完成。

1.5.3 序列分析 測定序列拼接完成后，用ORF Finder程序(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/gorf/)搜索開放閱讀框(ORF)，Blast程序(http://blast.st-va.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)進行相似性比對分析，ProtParam tool(http://web.expasy.org/protparam/)計算蛋白質的等電點與分子量，ProtScale(http://web.expasy.org/protscale/)分析蛋白質的疏水性，SignalP 4.1 Server(http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/)預測蛋白質信號肽，EBI的InterProScan(http://www.ebi.ac.uk/InterProScan/)分析蛋白家族， NetPhos 2.0 Server(http://www.cbs.dtu.dk/services/NetPhos/)分析磷酸化位點，DictyOGlyc 1.1 Serve(http://www.cbs.dtu.dk/services/DictyOGlyc/)預測糖基化位點， Coils(http://www.ch.embnet.org/software/COILS_form.htm )預測卷曲結構。

1.5.4 系統(tǒng)發(fā)育樹 從NCBI (http: //www. Ncbi. nlm. Nih. gov /) GenBank數(shù)據(jù)庫中檢索GFAT的氨基酸序列，用DNAMAN軟件對松墨天牛GFAT及其他昆蟲GFAT進行相似性比對；用MEGA 4.0軟件構建GFAT系統(tǒng)發(fā)育樹(NJ 法)。

起始密碼子ATG用下劃線表示，終止密碼子TAA以* 表示，特異性引物Outer以雙下劃線表示，特異性引物Inner以下劃波浪線表示，20個絲氨酸磷酸化位點以圓形表示，8個蘇氨酸磷酸化位點以矩形表示；6個酪氨酸磷酸化位點以三角形表示，加尾信號“AATAAA”用矩形表示圖1 MaGFAT的核苷酸及推導的氨基酸序列Fig.1 Nucleotide and deduced amino acid sequences of MaGFAT

用特異性引物Forward和Reverse，以微管蛋白(β-actin)基因為內參基因進行實時熒光定量PCR反應。實時熒光定量PCR反應體系為20 μl:10.0 μl SYBR Premix ExTaq，10.0 μmol/L的上、下游引物各0.5 μl，cDNA模板1 μl，ddH2O 7.2 μl，放入LightCycler480熒光定量PCR儀擴增。PCR反應條件為：95 ℃預變性5 min；95 ℃變性10 s、60 ℃復性20 s、共40個循環(huán)；40 ℃冷卻30 s。設置ddH2O為陰性對照，每個樣本3次重復。反應結束后采集目標基因的Ct值和2個內參基因的Ct平均值，利用 2-ΔΔCT相對定量法計算表達量[12]。采用Excel和DPS軟件的Duncan’s單因素方差分析法對RT-qPCR數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

2.1 松墨天牛GFAT的克隆及序列分析

本實驗克隆了松墨天牛GFAT基因，GenBank登錄號為 KT362367，命名為MaGFAT，其全長2624 bp(圖1)，其中包括開放閱讀框(ORF)2061 bp和3’端非編碼區(qū)563 bp，ORF編碼686個氨基酸殘基，推測的分子式為C3432H5500N938O1007S38，分子量為77 233.3，等電點為6.72，穩(wěn)定系數(shù)為61.46，為穩(wěn)定蛋白。疏水性最大值為2.911，最小值為-2.933，為親水蛋白。GFAT有20個絲氨酸位點，8個蘇氨酸位點，6個酪氨酸位點，無糖基化位點，無信號肽，形成8段螺旋卷曲。

2.2 序列相似性比對和系統(tǒng)發(fā)育樹構建

將MaGFAT氨基酸序列與NCBI數(shù)據(jù)庫中的16種昆蟲GFAT氨基酸序列進行同源性比對(圖2)，其中，MaGFAT與赤擬谷盜(Triboliumcastaneum)相似性最高，為88 %，與畢氏粗角蟻(Cerapachysbiroi)的相似性為84 %，與其他昆蟲的相似性都大于80 %。

基于17種昆蟲的寡糖基轉移酶亞基氨基酸序列構建的系統(tǒng)進化樹顯示(圖3)：松墨天牛與赤擬谷盜遺傳距離最近，在同一分支；與菜蛾盤絨繭蜂(Microplitisdemolitor)等遺傳距離較遠。

2.3 MaGFAT的表達分析

用RT-qPCR分析了MaGFAT在不同蟲態(tài)、成蟲各部位和幼蟲組織中的表達模式。MaGFAT在成蟲的表達量最高，蛹和幼蟲的表達量分別是成蟲的0.59和0.29倍，基因表達在三者之間差異顯著(P<0.005)(圖4)。成蟲各部位的表達模式為：翅膀的表達量最高，為對照的25.70倍，觸角的表達量最低，為對照的1.23倍，頭、胸、腹、足分別為對照的2.14、20.10、18.74、15.68倍，成蟲各部位MaGFAT基因表達差異顯著(P<0.05)(圖5)。幼蟲各組織的表達模式為：體壁的表達量最高，為對照的0.93倍，血淋巴的表達量最低，為對照的0.023倍，脂肪體、馬氏管、中腸分別為對照的0.37、0.26、0.28倍，基因表達有顯著差異(P<0.05)(圖6)。圖4～6中數(shù)據(jù)為平均數(shù)±標準誤;柱上不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

Tribolium castaneum 赤擬谷盜(XP_008191288.1)；Cerapachys biroi畢氏粗角蟻(XP_011340931.1) ; Acromyrmex echinatior頂切葉蟻(XP_011059147.1); Linepithema humile阿根廷蟻 (XP_012222258.1)；Monomorium pharaonis法老蟻(XP_012523497.1)；Harpegnathos saltator印度跳蟻(XP_011142953.1)；Camponotus floridanus佛羅里達弓背蟻(XP_011262248.1)；Bombus terrestris阿里山潛蠅繭蜂(XP_012163447.1)；Apis florea歐洲熊蜂(XP_012345419.1)；Fopius arisanus云南小蜜蜂(XP_011301753.1)； Megachile rotundata苜蓿切葉蜂(XP_012142070.1)；Athalia rosae鋸蠅(XP_012264018.1)；Nasonia vitripennis麗蠅蛹集金小蜂(XP_008204365.1)；Microplitis demolitor菜蛾盤絨繭蜂(XP_008554199.1)；Musca domestica家蠅(XP_005184307.1)；Ceratitis capitata地中海實蠅(XP_012158557.1)圖2 松墨天牛與其他16種昆蟲GFAT氨基酸序列比對Fig.2 Amino acid sequence alignment of GFAT from M.alternatus and other insects

其昆蟲名稱和所用的GenBank序列號與表2相同圖3 基于昆蟲寡糖基轉移酶亞基GFAT氨基酸序列構建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.3 Phylogenetic relationships of insects based on GFAT amino acids

3 討 論

本論文克隆了松墨天牛的GFAT基因，分析了其表達模式，旨在為研究其在松墨天牛幾丁質合成過程中的作用提供參考。

GFAT是調控己糖胺的重要限制酶，有高度同源性，幾乎存在于每個有機體和組織中，可調節(jié)葡萄糖分解及攝取、糖原合成等，由cAMP依賴的蛋白激酶A調控。在哺乳動物中，當氨基己糖流量過多時，GFAT能致胰島素產(chǎn)生拮抗[13-14]。在昆蟲中，GFAT能調節(jié)幾丁質的合成。幾丁質合成過程中，除了GFAT外，還有7種酶參與，即海 藻 糖 酶 (trehalase)、己 糖 激 酶(hexokinase)、葡 萄 糖-6-磷 酸異 構 酶 (glucose-6-phosphate isomerase)、葡 糖 胺-6-磷 酸-N-乙 酰 轉 移 酶(glucosamine-6-phosphate N-acetyltransferase)、磷乙酰氨基葡萄糖變位酶(phosphoacetylglucosamine mutase) 、UDP-N-乙酰葡糖胺焦磷酸化酶 (UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase) 和幾丁質合成酶(chitin synthase)[15]。這其中，海藻糖酶和幾丁質合成酶研究最多，而有關節(jié)肢動物GFAT的研究報道很少，只有長角血蜱(Haemaphysalis longicornis)的HIGFAT[16]，黑腹果蠅(Drosophila.melanogaster)的Dmel/Gfat1，埃及伊蚊(Aedesaegypti)的AeGfat參與幾丁質的合成報道[17-19]。

圖4 MaGFAT在松墨天牛各蟲態(tài)的表達Fig.4 Expression of MaGFAT in various instars of M. alternatus

圖5 MaGFAT在松墨天牛成蟲各部位的表達Fig.5 Expression of MaGFAT in various parts of M. alternatus adults

圖6 MaGFAT在松墨天牛幼蟲各組織中的表達Fig.6 Expression of MaGFAT in various tissues of M. alternatus

如本研究通過RT-qPCR檢測MaGFAT在松墨天牛的不同組織部位和不同發(fā)育時期的表達情況。成蟲身體各部位已發(fā)育成熟，檢測結果顯示MaGFAT在3種蟲態(tài)中成蟲的表達量最高，這說明相比于幼蟲和蛹，松墨天牛成蟲含有更多的幾丁質，由于幾丁質和蛋白質形成穩(wěn)固的結構，因而可推測松墨天牛成蟲比其他蟲態(tài)對外界環(huán)境具有更強的適應和防御能力。類似地，MaGFAT在成蟲部位中翅表達量最高，在幼蟲組織中體壁的表達量最高，也是與幾丁質在相應部位或組織中的功能有關。松墨天牛為鞘翅目昆蟲，其前翅堅硬、骨化，其中大量表達的MaGFAT為豐富的幾丁質的合成提供了可能，從而與前翅保護后翅和體背的功能相適應。

GFAT在昆蟲中具有較高的同源性。Kato(2002年)對埃及伊蚊AeGFAT基因進行克隆和特征分析，發(fā)現(xiàn)AeGFAT的cDNA加尾信號AATAAA位于距PolyA 27 bp位置，氨基酸序列197～199位有保守序列“SPL”。據(jù)其推測，此序列“SPL”應為cAMP依賴蛋白激酶(PKA)調節(jié)AeGFAT活性位點[20]。松墨天牛MaGFAT的cDNA加尾信號AATAAA位于距PolyA 25 bp處(圖1)，同源比對分析表明MaGFAT與16 種昆蟲的同源性大于80 %，同時在197～199位也發(fā)現(xiàn)有“SPL”(圖2)，據(jù)此筆者認為氨基酸序列197～199 位為GFAT的保守序列，但其功能有待研究。

[1]Marshall S, Bacote V, Traxinger R R. Discovery of a metabolic pathway mediating glucose-induced desensitization of the glucose transport system: role of hexosamine biosynthesis in the induction of insulin resistance[J]. The Journal of Biological Chemistry, 1991, 266:4706-4712.

[2]Mc Clain D A. Hexosamines as mediators of nutrient sensing and regulation in diabetes[J]. Journal of Diabetes and Its Complications, 2002,16(1):72-80.

[3]McMurrough I, Flores-Carreon A, Bartnicki-Garcia S. Pathway of chitin synthesis and cellular localization of chitin synthetase inMocorrouxii[J]. The Journal of Biological Chemistry, 1971, 246:3999-4007.

[4]Merzendorfer H, Zimoch L. Chitin metabolism in insects: structure, function and regulation of chitin synthases and chitinases[J]. Journal of Experimental Biology, 2003, 206:4393-4412.

[5]Hornung D E, Stevenson J R. Changes in the rate of chitin synthesis during the crayfish molting cycle[J]. Comparative Biochemistry and Physiology, 1971, 40:341-346.

[6]Stevenson J R, Tschantz J A.Acceleration by ecdysone of premolt substages in the crayfish[J]. Nature, 1973, 242:133-134.

[7]Surholt B. Formation of glucosamine-6-phosphate in chitin synthesis during ecdysis of the migratory locustLocustamigratoria[J]. Insect Biochemistry and Molecular Biology, 1975(5):585-593.

[8]Zhao B G, Futai K, Sutherland J R, et al.Pine Wilt Disease[M]. Tokyo: Springer, 2008.

[9]劉 平，稽保中，劉曙雯，等. 松墨天牛和光肩星天牛染色體核型[J]. 昆蟲知識, 2010, 47(2):299-307.

[10]許 雯, 羅淋淋, 吳華軍, 等. 松墨天牛表皮蛋白基因的克隆及表達分析[J]. 昆蟲學報, 2014, 57(5):515-521.

[11]韋春梅, 羅淋淋, 吳華俊, 等. 松墨天牛幼蟲cDNA文庫的構建及EST分析[J]. 基因組學與應用生物學，2014, 33(1):113-120.

[12]Livak K J,Schmittgen T D.Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCTmethod[J].Methods, 2001, 25(4):402-408.

[13]田金英, 李 江, 叢維娜, 等. 胰.島素抵抗及高血糖對GFAT活性的影響[J]. 哈爾濱商業(yè)大學學報, 2007, 23(2):134-137.

[14]侯為開. 氨基己糖與胰島素拮抗[J]. 國外醫(yī)學.內分泌學分冊, 1997(4):21-23.

[15]張文慶. 昆蟲幾丁質合成及其調控研究前沿[J]. 應用昆蟲學報, 2011, 48(3):475-479.

[16]Xiaohong Huang, Naotoshi Tsuji, Takeharu Miyoushi, et al. Characterization of glutamine: fructose-6-phosphate aminotransferase from the ixodid tick, Haemaphysalis longicornis and its critical role in host blood feeding [J]. International Journal for Parasitology, 2007,37:383-392.

[17]Graack H R, Cinque U, Kress H. Functional regulation of glutamine:fructose-6-phosphate aminotransferase 1 (GFAT1) of Drosophila melanogaster in a UDP-N-acetylglucosamine and cAMP dependent manner[J]. Biochemical Journal, 2001, 360:401-412.

[18]Kato N, Dasgupta R, Smartt C T, et al. Glucosamine: fructose-6-phosphate aminotransferase: gene characterization, chitin biosynthesis and peritrophic matrix formation inAedesaegypti[J]. Insect Molecular Biology, 2002,11:207-216.

[19]Kato N, Mueller C R, Fuchs J F, et al. Regulatory mechanisms of chitin biosynthesis and roles of chitin in peritrophic matrix formation in the midgut of adultAedesaegypti[J]. Insect Biochemistry and Molecular Biology, 2006, 36:1-9.

[20]N.Kato, R.Dasgupta, C.T.Smartt, et al. Glucosamine:fructose-6-phosphate aminotransferase: gene characterization, chitin biosynthesis and peritrophic matrix formation inAedesaegypti[J]. Insect Molecular Biology, 2002, 11(3):207-216.

(責任編輯 李山云)

Isolation and Expression of Glutamine-Fructose-6-Phosphate Aminotransferase Gene fromMonochamusalternatus

CAI Zi-ling, WU Hua-jun, LIN Tong*

(College of Forestry and Landscape Architecture, South China Agricultural University, Guangdong Guangzhou 510642, China)

Glutamine-fructose-6-phosphate aminotransferase (GFAT) was a rate-limiting enzyme of hexosamine biosynthetic pathway, which had a regulatory role in chitin synthase and protein glycosylation. The GFAT gene ofMonochamusalternatus(MaGFAT, GenBanK accession number is KT362367) by RACE was cloned and sequenced, and its length was 2624 bp, including 2061 bp open reading frame encoding 686 amino acids. The sequence analysis showed thatMaGFAThad a high similarity withTriboliumcastaneumat 88 % amino acid level, and both of the GFAT ofM.alternatusandT.castaneumwere in the same branch of the phylogenetic tree. TheMaGFATexpression in different tissues and development period by RT-qPCR were detected. The results showed thatMaGFAThad the highest expression in adults among developmental periods, in wings among body parts of adults and in body wall among all larvae tissues. This result would provide references for investigating the relation between structure and function of GFAT and clarifying the potential role of GFAT which played in biosynthesis of chitin inM.alternatus.

Monochamusalternatus; Glutamine-fructose-6-phoshhate aminotransferase(GFAT); Gene cloning; RT-qPCR

1001-4829(2016)09-2131-07

10.16213/j.cnki.scjas.2016.09.021

2015-09-15

國家自然科學基金(31470653); 廣東省自然科學基金(1414050001666)

蔡紫玲(1992-)，女，廣東茂名人 ，碩士研究生，主要從事昆蟲分子生物學研究，E-mail:1274800271@qq.com，*為通訊作者, E-mail: lintong@scau.edu.cn。

Q966

A