孫大為 肖家榮 張 波 胡基平 陳 敏 騰 寅

(1.貴陽(yáng)市第一人民醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550002；2.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550002；3.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550002)

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血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與水通道蛋白1在肺挫傷后瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的協(xié)同作用探討*

孫大為1肖家榮2張 波3胡基平1陳 敏1騰 寅2

(1.貴陽(yáng)市第一人民醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550002；2.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550002；3.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550002)

目的 探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)與水通道蛋白1(AQP1)在肺挫傷后瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的協(xié)同作用。方法 將90只SD成年大鼠分為對(duì)照組及5個(gè)肺挫傷組(傷后6h、24h、48h、72h及7d)，采用胸部撞擊器撞擊右胸前壁制備成肺挫傷模型，肺挫傷組大鼠分別于挫傷后6h、24h、48h、72h及7d處死，對(duì)照組大鼠在6h后處死，收集大鼠上葉肺組織，檢測(cè)血清VEGF、AQP1表達(dá)水平，并按照肺挫傷后是否發(fā)生瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)將90只實(shí)驗(yàn)大鼠分為A組和B組，采集兩組大鼠肺組織血液再次進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)比兩組大鼠的血清VEGF、AQP1表達(dá)水平。結(jié)果 肺挫傷組大鼠的血清VEGF、AQP1表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組大鼠(P<0.05)，肺挫傷組5個(gè)亞組血清VEGF、AQP1表達(dá)水平由高至低的順序均為7d組、72h組、48h組、24h組和6h組，組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組大鼠的血清VEGF、AQP1表達(dá)水平明顯高于B組大鼠(P<0.05)。結(jié)論 肺挫傷后AQP1的高表達(dá)可導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)細(xì)胞的滲透性增強(qiáng)，增加血漿蛋白的外滲，VEGF的高表達(dá)可導(dǎo)致血管的通透性增加，為炎性因子的侵入創(chuàng)造了條件，兩者的協(xié)同作用在瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮著積極的促進(jìn)作用。

肺挫傷；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；水通道蛋白1；瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)

肺挫傷是我國(guó)臨床十分常見的一種肺實(shí)質(zhì)損傷類型，多發(fā)生于意外事故，系強(qiáng)烈高壓波作用所致[1]。由于肺挫傷嚴(yán)重程度和范圍的不同，患者在臨床表現(xiàn)上也存在明顯差異，輕者表現(xiàn)為胸悶、胸痛、氣促等，重者可出現(xiàn)明顯的呼吸困難、血壓下降等癥狀，甚至?xí)＜暗缴黐2]。臨床數(shù)據(jù)調(diào)查結(jié)果顯示，近30年來(lái)我國(guó)肺挫傷患者的死亡率無(wú)明顯下降，尤其是肺挫傷后發(fā)生瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的患者，治療效果更是不滿意[3]。因此，現(xiàn)階段我國(guó)臨床迫切需要能夠評(píng)估肺挫傷患者病情進(jìn)展?fàn)顩r、為肺挫傷靶向治療、甚至是基因治療提供依據(jù)的分子指標(biāo)。VEGF、AQP1近年來(lái)在惡性腫瘤疾病患者的臨床診斷及病情評(píng)估中發(fā)揮著重要應(yīng)用價(jià)值。本次研究對(duì)上述因子及蛋白在肺挫傷后瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的協(xié)同作用進(jìn)行了探討，現(xiàn)做出以下總結(jié)匯報(bào)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 90只SD大鼠，成年，雌雄不拘，體重300～400 g。

1.2 研究方法

1.2.1 建立肺挫傷大鼠模型 將90只SD成年大鼠分為對(duì)照組及5個(gè)肺挫傷組(傷后6 h、24 h、48 h、72 h及7 d)，采用胸部撞擊器撞擊實(shí)驗(yàn)大鼠右胸前壁制備肺挫傷模型。撞擊完成后，探查大鼠胸腔，注意觀察大鼠是否出現(xiàn)明顯的肋骨骨折、血?dú)庑匾约靶陌e液等情況，確保大鼠未出現(xiàn)上述情況后，分別于挫傷后6 h、24 h、48 h、72 h及7 d處死肺挫傷組大鼠，對(duì)照組大鼠在6 h后處死。

1.2.2 血清VEGF、AQP1檢測(cè) 收集6組大鼠右肺上葉肺組織,10%中性甲醛固定，取材石蠟包埋后切片(6 μm厚)，作常規(guī)蘇木精—伊紅染色，在顯微鏡下觀察肺組織病理改變。所取肺組織標(biāo)本經(jīng)4%多聚甲醛固定48 h，病理切片，待用。Western-Blot檢測(cè)VEGF和AQP1的表達(dá)。采用雙抗體夾心ELISA法對(duì)肺挫傷組不同時(shí)期和對(duì)照組血清中VEGF和AQP1的表達(dá)。應(yīng)用常規(guī)HE染色、透射電鏡對(duì)挫傷肺組織周圍形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察。根據(jù)實(shí)驗(yàn)大鼠肺挫傷后是否發(fā)生瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)將實(shí)驗(yàn)大鼠分為A組和B組，A組為發(fā)生瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)大鼠，采集兩組大鼠右肺上葉肺組織血液，離心后再次進(jìn)行檢測(cè)。指標(biāo)具體檢測(cè)方法為：采用雙抗體夾心固相酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠血清VEGF表達(dá)水平，采用免疫組化法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠血清AQP1表達(dá)水平，我院本次研究過(guò)程中使用的試劑盒均購(gòu)自上海西唐生物科技有限公司。

1.3 對(duì)比指標(biāo) 對(duì)比肺挫傷組大鼠和對(duì)照組大鼠血清VEGF、AQP1表達(dá)水平、A組實(shí)驗(yàn)大鼠和B組實(shí)驗(yàn)大鼠的血清VEGF、AQP1表達(dá)水平以及肺挫傷組中5個(gè)亞組大鼠的血清VEGF、AQP1表達(dá)水平。

2 結(jié) 果

2.1 肺挫傷組大鼠和對(duì)照組大鼠以及肺挫傷組中5個(gè)亞組大鼠的血清VEGF、AQP1表達(dá)水平比較 肺挫傷組大鼠的血清VEGF、AQP1表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組大鼠(P<0.05)，肺挫傷組5個(gè)亞組血清VEGF、AQP1表達(dá)水平由高至低的順序均為7d組、72h組、48h組、24h組和6h組，組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。具體檢測(cè)結(jié)果見表1、2。

指標(biāo)肺挫傷組對(duì)照組t值P值VEGF(pg/ml)74.26±5.1329.81±8.4217.8430.000AQP1(mmol/L)36.31±8.0110.52±2.1419.4680.000

組別VEGF(pg/ml)AQP1(mmol/L)6h32.21±5.4615.19±3.3124h51.10±3.9829.21±3.9848h68.36±4.0238.36±4.2672h72.54±1.5651.19±4.087d86.91±1.5662.01±5.14

注：7d組與其他4組比較存在明顯差異，72h組與48h組、24h組、6h組比較存在明顯差異，48h組與24h組、6h組比較存在明顯差異，24h組與6h組比較存在明顯差異。

2.2A組實(shí)驗(yàn)大鼠和B組實(shí)驗(yàn)大鼠的血清VEGF、AQP1表達(dá)水平比較 經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)肺挫傷后發(fā)生瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的A組大鼠的血清VEGF表達(dá)水平和血清AQP1表達(dá)水平均較肺挫傷后未發(fā)生瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的B組大鼠低，組間上述指標(biāo)比較存在的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，詳細(xì)研究數(shù)據(jù)見表3。

組別(n=只數(shù))VEGF(pg/ml)AQP1(mmol/L)A組(n=37)67.91±10.2219.83±3.15B組(n=53)59.96±8.0815.26±3.21t值2.8004.662P值0.0080.000

3 討 論

肺挫傷后發(fā)生瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)是導(dǎo)致患者死亡的主要原因之一，因此在患者發(fā)生肺挫傷后早期評(píng)估患者是否具有發(fā)生瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，給予患者積極有效的對(duì)癥治療，是降低肺挫傷患者病死率的關(guān)鍵?，F(xiàn)階段，影像學(xué)技術(shù)在診斷肺挫傷和評(píng)估肺挫傷患者的病情進(jìn)展?fàn)顩r中已獲得了令人滿意的應(yīng)用效果，但在評(píng)估肺挫傷患者是否會(huì)發(fā)生瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)方面卻存在明顯的局限性，而在這一方面，我院認(rèn)為分子物質(zhì)的表達(dá)狀況更具有研究?jī)r(jià)值[4]。血清VEGF是存在于機(jī)體血管內(nèi)皮細(xì)胞中的一種具有特異性的肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子，能夠在機(jī)體內(nèi)誘導(dǎo)心血管的生成。AQP1是一種位于細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)，能夠在細(xì)胞膜上組成“孔道”，可對(duì)水在細(xì)胞中的進(jìn)出進(jìn)行控制[5]?；颊甙l(fā)生肺挫傷后，肺組織內(nèi)細(xì)胞及血管受到損害，血管上皮細(xì)胞中的VEGF以及細(xì)胞膜上的AQP1向血清中釋放，故表達(dá)水平明顯升高，隨著患者病情的進(jìn)一步惡化，肺組織中的細(xì)胞會(huì)因?yàn)檠仔苑磻?yīng)進(jìn)一步遭到破壞，導(dǎo)致上述因子及蛋白的表達(dá)水平呈現(xiàn)出增高趨勢(shì)。為明確上述思考是否具有客觀性，我院應(yīng)用實(shí)驗(yàn)大鼠開展了臨床研究，結(jié)果顯示肺挫傷組中5個(gè)亞組大鼠血清VEGF、AQP1表達(dá)水平由高至低的順序均為7d組、72h組、48h組、24h組和6h組，組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。發(fā)生瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的血清VEGF、AQP1表達(dá)水平均較B組大鼠高。

此外，有臨床研究給予肺挫傷后發(fā)生瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的大鼠體內(nèi)注射VEGF，采集大鼠血液檢測(cè)AQP1的表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，AQP1的表達(dá)水平明顯提高。我院本次研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)AQP1作為一種細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)，在肺挫傷后發(fā)生瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的大鼠體內(nèi)，能夠?yàn)閂EGF的生存提供后續(xù)能量，導(dǎo)致大鼠血清中VEGF的表達(dá)水平進(jìn)一步升高。而大鼠VEGF表達(dá)水平的進(jìn)一步升高可誘導(dǎo)心血管生成，心血管上皮細(xì)胞的生成和增殖會(huì)繼續(xù)向機(jī)體血液中釋放AQP1。VEGF、AQP1的上述動(dòng)態(tài)循環(huán)過(guò)程在肺挫傷后瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)中發(fā)揮著協(xié)同作用，可導(dǎo)致瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)嚴(yán)重程度增加，但兩者的協(xié)同作用不具有同時(shí)性，而是相互影響、相互促進(jìn)。此外，本次研究還發(fā)現(xiàn)，由AQP1介導(dǎo)的細(xì)胞高滲透性以及VEGF誘導(dǎo)的血管高通透性能夠?yàn)檠仔砸蜃拥娜肭謩?chuàng)造條件，繼而導(dǎo)致炎性反應(yīng)加重，逐漸發(fā)展為瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)。

綜上所述，肺挫傷后血清VEGF、AQP1表達(dá)水平的升高在瀑布式炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生中發(fā)揮著積極的促進(jìn)作用，可作為臨床評(píng)估肺挫傷患者病情進(jìn)展的輔助參考指標(biāo)，值得臨床進(jìn)行深入研究。

[1] 張珺,于世英,殷鐵軍，等.AQP1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與HIF-1α、VEGF表達(dá)的關(guān)系[J].華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2010,39(1):25-28.

[2] 姚楊,蘇杰,徐銳，等.水通道蛋白1與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在乙肝相關(guān)性肝癌中的表達(dá)及其意義[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2015,10(19):3189-3192.

[3] 聶振禹,陳爭(zhēng)躍,余雄偉，等.羅格列酮對(duì)尿毒癥腹膜透析大鼠水通道蛋白1、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A和環(huán)氧化酶2的影響[J].中華腎臟病雜志,2015,31(2):126-132.

[4] 呂嘉,向川,衛(wèi)小春，等.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及水通道蛋白1與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜血管生成的相關(guān)性分析[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2012,16(3):200-202.

[5] 李春燕,戈偉,鄭永法，等.血管內(nèi)皮抑素聯(lián)合放療對(duì)肺癌小鼠中乏氧誘導(dǎo)因子-1α、水通道蛋白-1及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[J].生物醫(yī)學(xué)工程與臨床,2011,15(4):370-373.

孫大為(1981—)，男，貴州貴陽(yáng)，主治醫(yī)師，本科，主要從事胸外科工作。

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1004-7115(2016)12-1395-02

10.3969/j.issn.1004-7115.2016.12.028

2016-10-15)