陳韻姿，李子鴻，李懷國(guó)，劉東文

（佛山市中醫(yī)院，廣東佛山528000）

四大品種菊花中不同成分含量比較

陳韻姿，李子鴻，李懷國(guó)，劉東文

（佛山市中醫(yī)院，廣東佛山528000）

【目的】比較亳菊、貢菊、滁菊、杭菊等四大品種菊花中主要活性成分的含量?！痉椒ā坎捎酶咝б合嗌V法對(duì)菊花中的綠原酸、3，5-O-雙咖啡酰基奎寧酸及木犀草苷進(jìn)行含量測(cè)定。測(cè)定前2項(xiàng)指標(biāo)的色譜條件：色譜柱為Diamonsil-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈為流動(dòng)相A，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4%的醋酸溶液為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.0 mL· min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為330 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量為10 μL；測(cè)定木犀草苷的色譜條件：色譜柱為苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑Agilent ZORBAX SB-phenyl（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈—20 g/L磷酸溶液為流動(dòng)相；流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為350 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量5 μL色譜?！窘Y(jié)果】綠原酸、3，5-O-雙咖啡酰基奎寧酸含量順序?yàn)椋嘿窬眨境眨竞季眨矩暰?，含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；木犀草苷含量順序?yàn)椋撼眨举窬眨矩暰眨竞季?，含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）?！窘Y(jié)論】四大品種菊花中綠原酸、3，5-O-雙咖啡?；鼘幩岷坑忻黠@差異，而木犀草苷含量差異不大。

菊花/生產(chǎn)與制備；綠原酸/分析；3，5-O-雙咖啡酰基奎寧酸/分析；木犀草苷/分析；色譜，高效液相

菊花為菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥頭狀花序，是常用的藥食同源中藥。菊花含揮發(fā)油、菊甙、腺嘌呤、膽堿、氨基酸、黃酮類、酚酸類及刺槐素等活性成分[1-2]，具有抗菌、抗病毒、抗炎、降血壓、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈血流量等作用[2-3]。2010年版《中國(guó)藥典》（一部）收載亳菊、滁菊、貢菊、杭菊，以綠原酸、3，5-O-雙咖啡?；鼘幩峒澳鞠蒈兆鳛槠浜恐笜?biāo)。本研究利用高效液相色譜法對(duì)以上4種菊花中上述3種活性成分含量進(jìn)行了比較研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1 試劑與儀器綠原酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110753-200413）；3，5-O-雙咖啡?；鼘幩釋?duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111782-200801）；木犀草苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111720-200607）。試劑均為分析純。AS2060B型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司），F(xiàn)A1004電子天平（上海天美天平儀器有限公司），LC-10ATVP高效液相色譜儀（日本島津公司）。

1.2 藥品與鑒定亳菊購(gòu)自安徽亳縣、滁菊購(gòu)自安徽滁縣、貢菊購(gòu)自安徽歙縣、杭菊購(gòu)自浙江桐鄉(xiāng)當(dāng)?shù)氐乃幉墓?，?jīng)中藥鑒定員駱萬翔鑒定為菊花。

2 方法與結(jié)果

2.1 綠原酸[4]與3，5-O-雙咖啡?；鼘幩醄5]的含量測(cè)定

2.1.1 供試品溶液的制備分別稱取菊花粗粉（過一號(hào)篩）約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率35 kHz）30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10 mL，揮干溶劑，殘?jiān)?0%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，即得。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取綠原酸對(duì)照品16.00 mg、3，5-O-雙咖啡?；鼘幩釋?duì)照品16.50 mg置25 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇分別制成每1 mL含綠原酸0.64 mg、3，5-O-雙咖啡?；鼘幩?.66 mg的對(duì)照品溶液，于冰箱10℃以下保存。

2.1.3 色譜條件色譜柱為Diamonsil-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈為流動(dòng)相A，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4%的醋酸溶液為流動(dòng)相B，按表1規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為330 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10 μL。色譜結(jié)果見圖1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution program of mobile phase A and B

圖1 綠原酸及3，5-0-雙咖啡?；鼘幩釋?duì)照品（a）與樣品（b）的HPLC圖譜Figure 1 HPLC results for chlorogenic acid and 3，5-O-dicaffeoyl quinic acid reference（a）and the sample（b）

2.1.4 線性關(guān)系分別精密量取對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、3 mL置于10 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，得到綠原酸0.032、0.064、0.096、0.16、0.192 mg/mL和3，5-O-雙咖啡?；鼘幩?.033、0.066、0.099、0.165、0.198 mg/mL的系列對(duì)照品溶液，按照2.1.3項(xiàng)色譜條件，以綠原酸、3，5-O-雙咖啡酰基奎寧酸濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。得到綠原酸的回歸方程為Y=15 824X+344.87（r=0.999 8，n=5），3，5-O-雙咖啡?；鼘幩岬幕貧w方程為Y=15 337X +347.66（r=0.999 7，n=5）。結(jié)果表明，綠原酸在0.032～0.192 mg/mL濃度范圍內(nèi)，3，5-O-雙咖啡酰基奎寧酸在0.033～0.198 mg/mL濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.1.5 精密度試驗(yàn)分別取綠原酸、3，5-O-雙咖啡酰基奎寧酸對(duì)照品溶液各2 μL，按照2.1.3項(xiàng)的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，綠原酸峰面積平均值為849.65[相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（sR）為0.25%]，3，5-O-雙咖啡?；鼘幩岱迕娣e平均值為853.57（sR為0.16%），表明該方法精密度高。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批菊花藥材，按照2.1.1項(xiàng)方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、12 h按照2.1.3項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定綠原酸和3，5-O-雙咖啡酰基奎寧酸的含量。結(jié)果顯示，綠原酸峰面積的sR為1.01%，3，5-O-雙咖啡?；鼘幩岱迕娣e的sR為0.93%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次的菊花藥材，分別按照2.1.1項(xiàng)的方法制成6份供試品溶液，按照2.1.3項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，6份樣品綠原酸含量的sR為1.22%，3，5-O-雙咖啡?；鼘幩岷康膕R為1.05%，表明該方法重復(fù)性良好。

表2 綠原酸的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 2Results of recovery test of chlorogenic acid

表3 3，5-O-雙咖啡?；鼘幩岬募訕踊厥章试囼?yàn)結(jié)果Table 3Results of recovery test of 3，5-O-dicaffeoyl quinic acid

2.1.8 加樣回收率試驗(yàn)精密稱取同一批次的菊花藥材6份，分別加入一定量的綠原酸和3，5-O-雙咖啡酰基奎寧酸對(duì)照品，按照2.1.1項(xiàng)方法制備供試品溶液，按照2.1.3項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，綠原酸的平均回收率是99.88%，sR為1.04%，3，5-O-雙咖啡?；鼘幩崞骄厥章适?9.75%，sR為1.24%（結(jié)果見表2～3）。

2.1.9 樣品含量測(cè)定分別精密稱取樣品4批各1 g，按照2.1.1項(xiàng)的方法制備供試品溶液，按照2.1.3項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，經(jīng)單因素方差分析，結(jié)果見表4。

表4 四種菊花綠原酸與3，5-O-雙咖啡?；鼘幩岷繙y(cè)定結(jié)果Table 4Determination of chlorogenic acid and 3，5-O-dicaffeoyl quinic acid in four kinds of Flos Chrysanthemi，n=3）

表4 四種菊花綠原酸與3，5-O-雙咖啡?；鼘幩岷繙y(cè)定結(jié)果Table 4Determination of chlorogenic acid and 3，5-O-dicaffeoyl quinic acid in four kinds of Flos Chrysanthemi，n=3）

樣品亳菊滁菊貢菊杭菊w綠原酸/（mg·g-1）2.48±0.19 2.41±0.23 2.22±0.35 2.31±0.30 w3，5-O-雙咖啡酰基奎寧酸/（mg·g-1）8.82±0.18 8.38±0.25 8.01±0.33 8.13±0.29

2.2 木犀草苷的含量測(cè)定[6-7]

2.2.1 供試品溶液的制備取本品粉末（過四號(hào)篩）約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入石油醚（30～60℃）20 mL，超聲處理10 min；棄去石油醚，藥渣揮干，精密加入70%（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲醇25 mL，密塞；稱定質(zhì)量，超聲處理40 min，放冷；再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量；搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取木犀草苷對(duì)照品12.50 mg置于50 mL容量瓶中，加70%甲醇制成每1 mL含木犀草苷0.25 mg的對(duì)照品溶液。

2.2.3 色譜條件色譜柱為苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑Agilent ZORBAX SB-phenyl（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈—20 g/L磷酸溶液為流動(dòng)相；流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為350 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量5 μL色譜。結(jié)果見圖2。

2.2.4 線性關(guān)系分別精密量取對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、5.0、6.0 mL置10 mL容量瓶中，加70%甲醇至刻度，得到木犀草苷0.025、0.05、0.075、0.125、0.15 mg/mL系列對(duì)照品溶液，按照2.2.3項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以木犀草苷濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。得到木犀草苷的回歸方程為Y=19 798X+391.61（r=0.9999，n=5），結(jié)果表明，木犀草苷在0.025～0.15 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗(yàn)取木犀草苷對(duì)照品溶液，照2.2.3項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，木犀草苷峰面積平均值為880.93（sR為0.35%），表明該方法精密度高。

圖2 木犀草苷對(duì)照品（a）與樣品（b）的HPLC圖譜Figure 2HPLC results for galuteolin reference（a）and the sample（b）

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批次的菊花藥材，按照2.2.1項(xiàng)的方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、12 h按照2.2.3項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定木犀草苷的含量，木犀草苷峰面積的sR為1.42%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次的菊花藥材，分別按照2.2.1項(xiàng)的方法制成6份供試品溶液，按照2.2.3項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果顯示6份樣品木犀草苷含量sR為1.92%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn)精密稱取同一批次的菊花藥材6份，分別加入一定量的木犀草苷對(duì)照品，按照2.2.1項(xiàng)的方法制備供試品溶液，按照2.2.3項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，木犀草苷的平均回收率是99.95%，sR為1.02%，結(jié)果見表5。

表5 木犀草苷的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 5Results of recovery test of galuteolin

2.2.9 樣品含量測(cè)定分別精密稱取樣品2批，各1 g，按2.1.1項(xiàng)的方法制備供試品溶液，按2.2.3項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定并計(jì)算含量。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，經(jīng)單因素方差分析，結(jié)果見表6。

表6 四種菊花木犀草苷的測(cè)定結(jié)果Table 6Determination of galuteolin in four kindsof Flos Chrysanthemi，n=3）

表6 四種菊花木犀草苷的測(cè)定結(jié)果Table 6Determination of galuteolin in four kindsof Flos Chrysanthemi，n=3）

樣品亳菊滁菊貢菊杭菊w木犀草苷/（mg·g-1）0.84±0.24 0.86±0.21 0.83±0.20 0.82±0.22

3 討論

3.1 液相色譜條件的選擇在測(cè)定綠原酸與3，5-O-雙咖啡?；鼘幩岷繒r(shí)曾采用乙腈為流動(dòng)相A，以10 g/L磷酸溶液為流動(dòng)相B，但分離效果不理想，后將流動(dòng)相B改為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4%的醋酸溶液，達(dá)到了最佳的分離效果。

3.2 四大品種菊花主要成分的含量比較2010年版《中國(guó)藥典》（一部）規(guī)定菊花中含綠原酸不得少于0.20%，含木犀草苷不得少于0.08%，含3，5-O-雙咖啡?；鼘幩岵坏蒙儆?.70%。本研究結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)的樣品含量全部符合藥典規(guī)定，其中亳菊中綠原酸、3，5-O-雙咖啡酰基奎寧酸含量最高，滁菊其次，貢菊最低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；滁菊中木犀草苷含量最高，亳菊其次，杭菊最低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。亳菊以疏風(fēng)散熱，解暑明目見長(zhǎng)；滁菊偏于祛風(fēng)潤(rùn)燥，二者活性成分含量較高，提示藥用配方可主要選擇這2種菊類。貢菊清香可口，解暑除煩，清肝明目，多用于飲料；杭菊在歷史上作為茶點(diǎn)飲料用，有“茶菊”之名。本研究結(jié)果表明貢菊和杭菊的活性成分均較亳菊與滁菊低，驗(yàn)證了二者更適合食用。

［1］程宏英，馮啟余，曹玉華，等.菊花中活性成分的高效液相色譜測(cè)定與指紋圖譜研究［J］.分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2007，23（3）：257.

［2］雷載權(quán).中藥學(xué)［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2002：44.

［3］黃泰康.常用中藥成分與藥理手冊(cè)［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1999，1566.

［4］孫英英，崔永霞，劉偉.HPLC對(duì)不同品種菊花中綠原酸含量的測(cè)定［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（24）：83.

［5］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：70.

［6］姜文青，張亞中，金斌.HPLC同時(shí)測(cè)定黃山貢菊和七月菊中的4種化學(xué)成分［J］.中成藥，2015，37（10）：2211.

［7］朱麗，盧化.HPLC法測(cè)定藥用菊花中木犀草素的含量［J］.湖北中醫(yī)雜志，2010，32（2）：74.

【責(zé)任編輯：黃玲，侯麗穎】

Comparison of Component Contents in Four Kinds of Flos Chrysanthemi

CHEN Yunzi，LI Zihong，LI Huaiguo，LIU Dongwen
（Foshan Hospital ofTraditional Chinese Medicine，F(xiàn)oshan 528000 Guangdong，China）

ObjectiveTo compare the contents of main active components in four kinds of Flos Chrysanthemi，including Boju，Gongju，Chuju，and Hangju.MethodsHigh performance liquid chromatography was applied for the determination of the contents of chlorogenic acid，3，5-O-dicaffeoyl quinic acid and galuteolin in Flos Chrysanthemi.And the chromatography for the former indexes determination was performed on a Diamonsil-C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）with an isocratic gradient elution using acetonitrile as the mobile phase A and a mass fraction of 0.4%of aqueous acetic acid solution as the mobile phase B.The flow rate was 1.0 mL·min-1，the detection wavelength was set at 330 nm，the column temperature was 30℃，and the injection volume was 10 μL；the chromatography for galuteolin determination was performed on an Aglient ZORBAX SB-phenyl column（4.6 mm×250 mm，5 μm）using acetonitrile 20 g·L-1phosphoric acid solution as the mobile phase. the flow rate was 1.0 mL·min-1，the detection warelength was set at 350 nm，the column temperature was 30℃，and the injection volumn was 5 μL.ResultsThe contents of chlorogenic acid and 3，5-O-dicaffeoyl quinic acid were in the decreasing sequence from Boju，Chuju，Hangju to Gongju，the differences being significan（P＜0.05）. Galuteolin content was in the decreasing sequence from Chuju，Boju，Gongju to Hangju，the differences being not significant（P＞0.05）.ConclusionThe contents of chlorogenic acid and 3，5-O-dicaffeoyl quinic acid varygreatly in 4 kinds of Flos Chrysanthemi，but the content of galuteolin is similar in the 4 kinds ofFlos Chrysanthemi.

Flos Chrysanthemi/production&preparation；chlorogenic acid/analysis；3，5-O-dicaffeoyl quinic acid/analysis；galuteolin/analysis；chromatography，high performance liquid

R284.1

A

1007-3213（2016）06-0871-04

10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2016.06.026

2016-07-13

陳韻姿（1982-），女，主管藥師，醫(yī)學(xué)學(xué)士；E-mail：wincechen@163.com