孟澤，余佳，楊愛珍，師光祿，張鐵強，王有年

（1北京農學院植物科學技術學院，北京102206；2北京農學院生物科學與工程學院，北京102206；3農業(yè)部都市農業(yè)（北方）重點開放實驗室，北京102206）

不同品種棗內果皮發(fā)育過程中木質素沉積的觀察比較

孟澤1，余佳1，楊愛珍2，師光祿2，張鐵強3，王有年3

（1北京農學院植物科學技術學院，北京102206；2北京農學院生物科學與工程學院，北京102206；3農業(yè)部都市農業(yè)（北方）重點開放實驗室，北京102206）

為了解木質素含量在不同品種不同時期的變化過程，以‘金絲小棗’和‘金絲無核小棗’為試驗材料，利用Klason法測定棗果實內木質素含量和木質素的顯色反應，研究棗果實內木質素沉積的動態(tài)變化。結果顯示：棗果實中內果皮的木質素沉積過程是從基部開始，完成內果皮最內側的木質化，再由內至外，逐漸完成；在花后15～25天期間，‘金絲小棗’與‘金絲無核小棗’果實內果皮木質素含量基本相同，從花后40天開始，‘金絲小棗’內木質素含量開始上升并超過‘金絲無核小棗’?！鸾z無核小棗’果實內木質素含量在全果實發(fā)育時期內變化總體趨勢平緩，而在‘金絲小棗’內木質素含量的在15～75天期間變化增加明顯，在75天后出現(xiàn)跳躍式增長現(xiàn)象，增加更為明顯。試驗選用的2個品種棗在內果皮木質化過程中存在著明顯的差異，可以用來進行棗果實內果皮木質化的相關研究。

棗果實；內果皮；木質素沉積

0 引言

棗(Ziziphus jujuba Mill.)是起源于中國并被栽培過3000多年的鼠李科棗屬果樹，由于棗在發(fā)育過程中會有柱基分生組織和花盤分生組織參與到果實的發(fā)育過程中，這使棗果實的發(fā)育過程有別于其他的核果類果實，所以棗屬于擬核果[1]。棗果實的果皮分為內、中、外3層，其中果核，即內果皮是由子房室內壁發(fā)育而來[2-3]。棗果實內果皮的發(fā)育與木質素的沉積有著極其密切的聯(lián)系，棗果實內果皮的發(fā)育過程就是其木質素沉積的過程。棗果實中內果皮木質化程度高且不易去除，導致后期加工處理復雜。因此研究棗果實內果皮發(fā)育過程中木質素的沉積變化可以為棗果實內果皮木質化機理的闡明奠定理論基礎，為提高果實品質及改良品種提供有價值的信息。

‘金絲小棗’是國內目前栽培最為廣泛的優(yōu)良棗樹品種之一[4]，口感優(yōu)良[5-7]，‘金絲無核小棗’是其在長期的栽培過程中產生的許多品種類型之一[8-12]。這2個品種間除果實核層硬化程度的差異外，其他植物學特征基本相同[13]。近年來對無核棗的研究相對較少，僅譚洪花[14]、彭建營[15]、韓斌[16]、賈彥麗[17]等對無核棗的分子標記及解剖學有過初步研究。筆者測定了‘金絲無核小棗’和‘金絲小棗’2個品種的生長曲線，并采用Klason法和間苯三酚染色法分別對2個棗品種不同發(fā)育時期的木質素含量及木質素沉積情況進行觀察檢測。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

材料均取自北京市豐臺區(qū)中華名棗博覽園，每個品種隨機選取長勢良好的棗樹3棵，分別在盛花期后15、25、40、55、75、100天采集樣品。采樣完成后馬上運回實驗室測定生理指標，之后將每個品種所有同期果實放在一起，隨機均分為5個重復，置于4℃冰箱中準備試驗。

1.2 試驗方法

1.2.1 生長曲線的測定用十分度游標卡尺測量各時期果實樣品的橫縱徑，然后再用1/100的電子天平稱量果實的濕重；將3個果實單獨放入逐一編號的培養(yǎng)皿中，放入烘箱中烘干，每隔2 h將樣品取出，逐一在1/100的電子天平上稱量其質量，直至恒重。

1.2.2 木質素含量測定測定木質素含量所采用的Klason法是利用重量分析測定木質素含量的經典方法，其原理是用72%硫酸除去纖維素，難溶的木質素經過濾、洗滌、干燥稱重、計算等步驟可得到其含量[18]。選取適量內果皮進行研磨，使其完全粉碎后稱取1.0 g的內果皮置于試管中，加入70%的濃硫酸6 mL；在35℃的條件下恒溫保存7 h后，使用100 mL雙蒸水將其沖洗到三角瓶中并進行密封，然后在高壓滅菌鍋里進行滅菌，之后將滅菌好的溶液倒入到G4砂芯漏斗抽濾，再用熱的雙蒸水進行沖洗；將沖洗后的渣子置于烘箱中，60℃烘干至恒重，用式(1)計算木質素含量[19]。

1.2.3 木質素沉積染色觀察使用間苯三酚-鹽酸（1%的間苯三酚溶于95%的乙醇中）染色法檢測棗果實木質素沉積動態(tài)[20]，間苯三酚與木質素的反應是具有特異性的，在酸性條件下，木質素中的肉桂醛基團能夠與間苯三酚發(fā)生顯色反應，生成的化合物呈粉紅色[21-22]。分別對不同發(fā)育時期的果實樣品進行橫切和縱切，向切面滴加間苯三酚溶液至完全覆蓋切面，靜置3 min左右再滴加38%濃鹽酸至完全覆蓋切面，其中的木質素組織即刻呈現(xiàn)出粉紅色，完全顯色后，放置在體視顯微鏡下進行拍照記錄[23]。

2 結果與分析

2.1 棗果實生長曲線

‘金絲無核小棗’果實縱徑在花后15～40天期間增長速率較快，40～100天期間增長變緩；果實橫徑在果實發(fā)育全時期增長速率平穩(wěn)；果實濕重在花后15～25天期間增長不明顯，25～55天期間增長速率加快，55～100天增長速率再次加快；果實干重在花后15～25天增長平穩(wěn)，增長速率基本與濕重保持一致，25～55天期間加快，但是略低于果實濕重增長速率，55～75天期間增長速率再次加快，仍低于濕重增長（圖1）?！鸾z小棗’果實縱徑在花后15～55天期間增長速率較快，55～100天期間增長變緩；果實橫徑在果實發(fā)育全時期增長速率平穩(wěn)；果實濕重在花后15～25天期間增長不明顯，25～75天期間增長速率加快，75～100天增長速率再次加快；果實干重在花后15～75天增長較為平穩(wěn)，75～100天期間增長速率明顯加快（見圖1）。兩者比較而言，發(fā)育過程生長趨勢基本相同。

2.2 棗果實木質素含量的變化

在花后15～25天期間，‘金絲無核小棗’果實內木質素含量與‘金絲小棗’基本相同，從花后40天開始，‘金絲小棗’內木質素含量開始上升并超過‘金絲無核小棗’?！鸾z無核小棗’果實內木質素含量在全果實發(fā)育時期內變化總體趨勢平緩，而在‘金絲小棗’內木質素含量的在15～75天期間增加明顯，在75天后出現(xiàn)跳躍式增長現(xiàn)象，增加更為明顯（圖2）。

圖1 ‘金絲無核小棗’和‘金絲小棗’生長曲線

圖2 內木質素含量變化曲線

2.3 ‘金絲無核小棗’果實木質素沉積

花后不同時期‘金絲無核小棗’果實橫縱切后結果見圖3。從圖3f右上角小圖中觀察到，花后15天時，果實靠近柱基分生組織部位的部分導管呈現(xiàn)紅色?；ê?5天時，果實內果皮仍無明顯顏色變化，變紅部位主要集中在導管組織。圖3h顯示花后40天時，果實內果皮基部呈紅色，尖部未被染色?；ê?5天，內果皮基本被染為紅色，內果皮開始明顯發(fā)生木質化沉積過程?；ê?5天時，內果皮完全木質化，肉眼可見內果皮變?yōu)楹谏?/p>

2.4 ‘金絲小棗’果實木質素沉積

圖4a、b、f、g顯示，在花后15～25天時，果實內導管組織含有一定木質素。花后40天時，內果皮種室開始變紅，肉眼已可看到內果皮部分開始木質化。花后55天時，內果皮被染色部位明顯擴大，顏色加深。花后75天時，內果皮完全被染色，染色程度和范圍都有擴大。

3 結論

吳延軍[23]對棗果實發(fā)育過程研究的結果顯示，棗果實在發(fā)育中只有一次快速增長的過程，屬于非呼吸躍變型果實，果實生長曲線呈單S型，與本研究觀察結果一致。棗果實內果皮的木質化過程在‘金絲無核小棗’和‘金絲小棗’的果實發(fā)育過程中差異明顯。圖2顯示，‘金絲無核小棗’的內果皮木質化過程一直比較平穩(wěn)，而‘金絲小棗’的內果皮木質化則是有2次快速增長的階段，在花后15～40天時增長速率較快；在第2次快速增長期時，木質素沉積的量更多。從2個品種的果實縱切染色圖中可以看出，在花后15天開始，棗果實內的木質素都開始發(fā)生沉積，果實基部的導管最先開始木質化，花后15～25天，2個品種果實內果皮木質素沉積程度大致相同?；ê?0天的果實染色結果顯示，‘金絲小棗’的木質化程度超過‘金絲無核小棗’，內果皮的表面已經全部發(fā)生了木質素的沉積，‘金絲無核小棗’則只是在內果皮的基部部分發(fā)生木質化。在花后55天時，‘金絲小棗’內果皮木質化厚度增加，其中內果皮內側顏色深，木質化程度較高，外圍顏色較淺，說明此時外圍的木質化程度不高，而‘金絲無核小棗’此時內果皮周圍都發(fā)生了木質素的沉積現(xiàn)象，但是木質化程度低。花后75天時，‘金絲小棗’果實內果皮全部顯示為深色，木質素的沉積已相當明顯，但是此時仍可用刀片割開，‘金絲無核小棗’果實內果皮則已基本完成木質素的沉積過程，內果皮未經染色已呈黑色，但是厚度極小?；ê?00天時，‘金絲小棗’內果皮已經無法用刀割開，故而沒有進行染色試驗。從橫切染色結果則可以看出，‘金絲無核小棗’并不是完全無核，只是核層極薄，木質化程度也相對低于‘金絲小棗’。

試驗結果說明，在棗果實的整個發(fā)育過程中，木質素的沉積是一個緩慢的過程。從外觀上看，棗果實內的木質素沉積最先發(fā)生于導管組織，之后才會發(fā)生在內果皮上，由于包裹導管的韌皮部沒有木質素的沉積，不會發(fā)生木質化過程，故而不影響導管的運輸作用；棗果實的內果皮的木質化是從基部開始（圖3h），完成內果皮最內側的木質化，再由內至外，逐漸完成木質素的沉積過程。

圖3 ‘金絲無核小棗’內果皮木質素沉積動態(tài)

4 討論

筆者選取了‘金絲無核小棗’和‘金絲小棗’2個品種對棗果實內果皮發(fā)育過程中發(fā)生的木質素沉積進行研究，前人尚未曾報道過。本次研究認為，‘金絲無核小棗’與‘金絲小棗’在內果皮發(fā)育過程中木質素沉積差異明顯，‘金絲小棗’木質素沉積過程明顯高于‘金絲無核小棗’。本研究只是對棗果實在發(fā)育過程中的木質素沉積變化做了初步研究，要想深入了解發(fā)育過程中木質素沉積的規(guī)律以及導致木質素沉積差異機理，從分子水平研究其生長、發(fā)育和木質素合成顯得尤為重要。本試驗設定的樣品采集時間范圍存在一定的局限性，采樣密度為2～4周，而對在此期間棗果實的木質素沉積的變化情況，也需要做進一步的試驗分析。

在棗果實中，內果皮起著保護種子等關鍵作用，其木質素的沉積是一個重要的生理過程[24-25]。但是內果皮的木質化，嚴重影響著棗果實的可食行和后期加工過程，制約著國內棗產業(yè)的發(fā)展。試驗結果證明，棗果實內果皮木質素沉積過程分為2個階段，第1階段（花后15～40天）木質素沉積程度在2個品種內基本相同，第2階段（花后40～100天）時，‘金絲小棗’木質素沉積程度明顯高于‘金絲無核小棗’，并且這一階段的木質素沉積量占整個果實內果皮木質化的大部分，在這個時期適當控制內果皮木質素沉積的碳素來源有可能成為培育無核棗新品種的新途徑。另外，試驗選用的2個品種在內果皮木質化過程中存在著明顯的差異，但具體導致這種差異的原因仍需進一步研究。

圖4 ‘金絲小棗’內果皮木質素沉積動態(tài)

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The Lignin Deposition Process in Fruit Endocarp of Different Jujube Cultivars

Meng Ze1,Yu Jia1,Yang Aizhen2,Shi Guanglu2，Zhang Tieqiang3,Wang Younian3

(1College of Plant Science and Technology,Beijing University of Agriculture,Beijing 102206,China;2College of Biological Science and Engineering,Beijing University of Agriculture,Beijing 102206,China;3Key Laboratory of Urban Agriculture(North)Ministry of Agriculture,Beijing 102206,China)

To understand the change of lignin content and endocarp lignin deposition process in different periods of different cultivars,‘Jinsixiaozao’and‘Jinsiwuhexiaozao’were used as the test materials,the lignin content in jujube fruit was measured by the Klason method and the distribution of lignin was observed by color reaction between the phloroglucinol and lignin for the purpose of researching the dynamic changes of lignin deposition in jujube fruit.The results showed that:in jujube fruit the endocarp lignin deposition process was from the base,after the lignification of medial peel was completed,the lignification was achieved from the inside to the outside until gradually accomplished;during 15-25 days after flowering,the lignin content in‘Jinsixiaozao’and‘Jinsiwuhexiaozao’fruit was basically the same,and starting from the 40 days after flowering,the lignin content in‘Jinsixiaozao’fruit began to rise and exceeded the lignin content in‘Jinsiwuhexiaozao’fruit;the change of the lignin content in‘Jinsiwuhexiaozao’fruit was smooth within all fruit development period,and that in‘Jinsixiaozao’fruit increased obviously during 15-75 days,after 75 days the lignin content showed a leap in growth and increased more significantly.There are significant differences in the process of lignification between the two cultivars of jujube in the experiment,so they can be used forrelated research on jujube fruit endocarp lignification.

Jujube Fruit;Endocarp;Lignin Deposition

S665.1

A論文編號：cjas15070017

北京市2015人才培養(yǎng)質量提高經費（科研）-團隊支持計劃“植物源農藥”(KCT2014001)；北京市2014人才培養(yǎng)質量提高經費（科研）-團隊支持計劃“植物源農藥”(KCT2015007)。

孟澤，男，1989年出生，山西人，碩士研究生，研究方向：果品優(yōu)質生態(tài)安全。通信地址：102206北京市昌平區(qū)回龍觀鎮(zhèn)北農路7號北京農學院，E-mail：mzwawr@163.com。

師光祿，男，1958年出生，山西人，教授，博士，研究方向：果品優(yōu)質生態(tài)安全。通信地址：102206北京市昌平區(qū)回龍觀鎮(zhèn)北農路7號北京農學院，Tel：010-80799116，E-mail：glshi@126.com。

2015-07-29，

2015-08-30。