高正洪

(江蘇省靖江市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 214500)

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·臨床研究·

不同免疫學(xué)檢驗(yàn)方法對(duì)于結(jié)核病的臨床價(jià)值研究

高正洪

(江蘇省靖江市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 214500)

目的 探討蛋白芯片法與膠體金法對(duì)于結(jié)核病的臨床價(jià)值。方法 選取該院從2015年2～11月所收治的90例確診結(jié)核病患者作為臨床研究對(duì)象，同時(shí)采用蛋白芯片法與膠體金法進(jìn)行檢測(cè)并比較兩種檢測(cè)方法的差異性，分析不同方法在結(jié)核病輔助診斷當(dāng)中的臨床價(jià)值。結(jié)果 結(jié)核組患者的膠體金法陽(yáng)性反應(yīng)率為73.3%(66/90)，顯著高于對(duì)照組[7.8%(7/90)]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；結(jié)核組患者蛋白芯片法的阿拉伯甘露糖脂(LAM)、蛋白16kD和蛋白38kD陽(yáng)性反應(yīng)率為53.3%(48/90)、22.2%(20/90)和53.3(48/90)，高于對(duì)照組5.6%(5/90)、0%(0/60)和5.6%(5/90)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果表明，結(jié)核組患者的膠體金法陽(yáng)性反應(yīng)率顯著高于蛋白芯片法陽(yáng)性反應(yīng)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 膠體金法在結(jié)核病的輔助診斷中更有優(yōu)勢(shì)，其靈敏度高、操作簡(jiǎn)單，有利于推廣，對(duì)于結(jié)核病的早診斷、早治療具有較強(qiáng)實(shí)用性，是一種比較理想的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法。值得在今后臨床工作中推廣應(yīng)用。

結(jié)核??； 診斷； 蛋白芯片法； 膠體金法

據(jù)研究報(bào)告，目前世界上大約1/3的人口被結(jié)核菌感染，而我國(guó)又是世界上結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)之一，因此對(duì)于結(jié)核病的防控診治刻不容緩[1]。目前對(duì)于結(jié)核病的診斷，主要憑借對(duì)患者癥狀、體征、痰涂片培養(yǎng)以及影像學(xué)檢查，但對(duì)于不典型肺結(jié)核的診斷仍是臨床上棘手的問(wèn)題。此外，影像學(xué)的檢查令結(jié)核病檢查變得快速、有效，大大提升了診斷效率，但無(wú)法找到結(jié)核菌確診。痰培養(yǎng)需時(shí)較長(zhǎng)，肺結(jié)核痰培養(yǎng)的陽(yáng)性反應(yīng)率不高，容易導(dǎo)致漏診與誤診[2]。

結(jié)核病屬于免疫介導(dǎo)慢性疾病，采用免疫學(xué)檢驗(yàn)方法對(duì)抗體進(jìn)行檢測(cè)以輔助診斷結(jié)核病是較佳的方法。目前，蛋白芯片法與膠體金法是比較成熟的兩種免疫學(xué)檢驗(yàn)方法。蛋白芯片法是同時(shí)對(duì)結(jié)核菌阿拉伯甘露糖脂(LAM)、蛋白16kD和蛋白38kD進(jìn)行檢測(cè)，從而診斷結(jié)核菌的感染情況。膠體金色法則是采用葡萄球菌A蛋白(SPA)膠體金綴合物對(duì)結(jié)合IgG抗體進(jìn)行標(biāo)記呈色，從而判斷是否感染結(jié)核菌。本研究將2015年2～11月在本院治療的結(jié)核病患者90例作為研究對(duì)象，同時(shí)采用兩種不同方法進(jìn)行檢測(cè)，比較兩種檢測(cè)方法的差異性，分析不同方法在結(jié)核病輔助診斷當(dāng)中的臨床價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2015年2～11月所收治的90例確診結(jié)核病患者作為研究對(duì)象，其中男49例，女41例，年齡18～83歲，平均(46.7±11.2)歲。結(jié)核病類(lèi)型：肺結(jié)核83例，結(jié)核性腦膜炎2例，結(jié)核性胸膜炎3例，骨關(guān)節(jié)結(jié)核2例。所有患者均符合人民衛(wèi)生出版社2002版《內(nèi)科學(xué)》的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。另選取90例非結(jié)核病患者作為對(duì)照組，其中慢性支氣管炎27例，支氣管肺炎10例，急性上呼吸道感染13例，肺癌18例，淋巴結(jié)炎12例，塵肺10例。

1.2 方法[4]

1.2.1 蛋白芯片法 選擇結(jié)核分枝桿菌IgG抗體檢測(cè)試劑盒及 PBT-X2型芯片閱讀儀(南京大淵生物技術(shù)工程有限責(zé)任公司生產(chǎn))對(duì)患者血清進(jìn)行檢測(cè)，以3種結(jié)核菌復(fù)合群特異性抗原：LAM、蛋白16kD和蛋白38kD以檢測(cè)血清之中的抗體，若任一抗體檢測(cè)為陽(yáng)性則判定患者為陽(yáng)性。若3種抗體檢測(cè)全為陰性則判斷為陰性。

1.2.2 膠體金法 采用迪比多試劑盒(上海奧普生物科技有限公司生產(chǎn))對(duì)患者血清進(jìn)行檢測(cè)，采用斑點(diǎn)免疫膠體金滲濾技術(shù)，對(duì)結(jié)核分枝桿菌特異性膜蛋白抗原進(jìn)行分離純化，再在硝酸纖維素膜上點(diǎn)樣再固定，膜上的結(jié)核抗原會(huì)和人血清中的結(jié)核分枝桿菌抗體進(jìn)行結(jié)合，再用葡萄球菌A蛋白(SPA)膠體金綴合物和結(jié)合之后的結(jié)核IgG抗體的呈色，若出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，則判定患者為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

結(jié)核組患者的膠體金法陽(yáng)性反應(yīng)率為73.3%(66/90)，顯著高于對(duì)照組[7.8%(7/90)]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；結(jié)核組患者的蛋白芯片法檢測(cè)LAM、蛋白16kD和蛋白38kD陽(yáng)性反應(yīng)率為53.3%(48/90)、22.2%(20/90)和53.3(48/90)，高于對(duì)照組5.6%(5/90)、0%(0/60)和5.6%(5/90)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果表明，結(jié)核組患者的膠體金法陽(yáng)性反應(yīng)率顯著高于蛋白芯片法陽(yáng)性反應(yīng)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 蛋白芯片法和膠體金法對(duì)結(jié)核病的陽(yáng)性反應(yīng)率比較[n(%)]

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與蛋白芯片法比較，#P<0.05。

3 討 論

結(jié)核病指的是顯微鏡下或者培養(yǎng)后的陽(yáng)性結(jié)核分枝桿菌結(jié)果，或者具有影像學(xué)和臨床結(jié)核病特征，患者常有低熱、夜間盜汗和咳嗽等癥狀。目前，結(jié)核病已占據(jù)全世界感染性疾病死亡的首要原因，嚴(yán)重危害人們的生命健康，根據(jù)全國(guó)性的流行病學(xué)調(diào)查，我國(guó)活動(dòng)性肺結(jié)核患病率為367/10萬(wàn)，涂陽(yáng)性肺結(jié)核患病率122/10萬(wàn)，菌陽(yáng)患病率為160/10萬(wàn)[5]。在基礎(chǔ)衛(wèi)生條件薄弱和群眾醫(yī)療意識(shí)不足的地區(qū)情況尤為嚴(yán)峻。

因此如何快速準(zhǔn)確地診斷并予以有效的治療，意義重大。目前，分枝桿菌培養(yǎng)是診斷結(jié)核病的金標(biāo)準(zhǔn)，但培養(yǎng)的周期長(zhǎng)，一般需要6周才能確診，因此影響了早期診斷和及時(shí)治療，甚至可能造成疾病的傳染[6]。影像學(xué)診斷快速有效，但若患者癥狀不典型，可能會(huì)造成誤診或漏診。近年來(lái)，血清免疫學(xué)檢驗(yàn)方法逐漸廣泛應(yīng)用，以補(bǔ)充影像學(xué)和痰涂片培養(yǎng)法的不足。而其中，蛋白芯片法和膠體金法是最為常用的兩種方法。

蛋白芯片法是采用結(jié)核菌特異性細(xì)胞壁脂多糖抗原LAM與基因工程充足DNA技術(shù)生產(chǎn)純化了的蛋白16kD和蛋白38kD特異性抗原固定在同一膜片上面，令抗原反應(yīng)快速在固相膜中進(jìn)行，再通過(guò)免疫金為標(biāo)志物以顯色于膜上，實(shí)現(xiàn)對(duì)結(jié)核病的檢測(cè)[7]。

LAM為分枝桿菌屬于細(xì)胞壁的組成部分，屬于特異抗原，檢驗(yàn)的靈敏度比較高。然而，除了結(jié)核分枝桿菌之外，還有多種分枝桿菌也含有LAM，因此其特異度不高[8]。而蛋白16kD和蛋白38kD屬于結(jié)核分枝桿菌的特有抗原，和其他分枝桿菌沒(méi)有交叉反應(yīng)，因此特異度比較高。

膠體金法是采用斑點(diǎn)免疫膠體金滲濾技術(shù)，把結(jié)核分枝桿菌的特異性膜蛋白抗原進(jìn)行分離純化后，采用葡萄球菌A蛋白對(duì)結(jié)核IgG進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)是否出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)確定是否感染結(jié)核病[9]。膠體金法具有以下優(yōu)勢(shì)：(1)結(jié)果穩(wěn)定。由于血清中IgG的含量相對(duì)穩(wěn)定，不會(huì)受到細(xì)菌活力與形態(tài)影像，因此其測(cè)驗(yàn)的穩(wěn)定性高；(2)使用方便。膠體金法不需要貴重的檢測(cè)儀器和材料，而且操作簡(jiǎn)單，一般而言十多分鐘就能出結(jié)果，因此推廣型比較強(qiáng)[10]；(3)準(zhǔn)確率高。和蛋白芯片法比較，膠體金法的檢測(cè)準(zhǔn)確率比較高，適合用于臨床檢測(cè)。

本研究也表明，不同組別患者在兩種方法檢測(cè)的陽(yáng)性反應(yīng)率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明不同免疫學(xué)檢驗(yàn)方法均能有效對(duì)結(jié)核病進(jìn)行診斷。而兩種方法的診斷有效率比較中，膠體金法陽(yáng)性反應(yīng)率為73.3%(66/90)，高于蛋白芯片法的LAM、蛋白16kD和蛋白38kD陽(yáng)性反應(yīng)率為53.3%(48/90)、22.2%(20/90)和53.3(48/90)，表明膠體金法較蛋白芯片法有更高的診斷效果。有研究表明，若同時(shí)采用兩種方法檢測(cè)，并不會(huì)有效提高診斷準(zhǔn)確率，提示在兩種方法中，膠體金法是更好的選擇。

綜上所述，膠體金法在結(jié)核病的輔助診斷中更有優(yōu)勢(shì)，其靈敏性高、操作簡(jiǎn)單，有利于推廣，對(duì)于結(jié)核病的早診斷、早治療具有較強(qiáng)實(shí)用性，是一種比較理想的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法。值得在今后臨床工作中推廣應(yīng)用。

[1]滕巖，遲偉，姜順愛(ài)，等.蛋白芯片法與膠體金標(biāo)記結(jié)核抗體法在結(jié)核病患者檢測(cè)中的臨床價(jià)值[J].中國(guó)民康醫(yī)學(xué),2016,27(7):80-81.

[2]米曉燕，劉春燕，李小謀，等.蛋白芯片法檢測(cè)結(jié)核抗體在活動(dòng)性結(jié)核病的診斷價(jià)值[J].吉林醫(yī)學(xué)，2011,32(31)：6545-6546.

[3]葉任高.內(nèi)科學(xué)[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：94.

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[7]羅招凡，林向華，李競(jìng).蛋白芯片法與金標(biāo)法及抗酸染色法診斷結(jié)核病的比較[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007,22(2)：52-54.

[8]莫鳳明，劉愛(ài)菊，張璐，等.血清結(jié)核桿菌抗體膠體金法的應(yīng)用價(jià)值[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012,9(9)：1118-1119.

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.059

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