唐友華 云南省大理州祥云縣沙龍鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站 672102

對(duì)蛋雞禽流感免疫程序和抗體水平的研究

唐友華 云南省大理州祥云縣沙龍鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站 672102

取蛋雞場(chǎng)的雞群作為試驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行禽流感免疫。結(jié)果顯示，H5Re-6株疫苗抗體滴度都在4log2以上，達(dá)到了群體免疫的效果。通過(guò)對(duì)H5免疫抗體滴度的測(cè)試，發(fā)現(xiàn)在蛋雞開(kāi)產(chǎn)前經(jīng)3次以上免疫，開(kāi)產(chǎn)時(shí)均能達(dá)到較高抗體滴度 (H5抗體滴度大于6log2)，為產(chǎn)蛋期蛋雞提供了較高的抵抗能力。產(chǎn)蛋期2～3次免疫接種抗體可以維持較穩(wěn)定的高水平，因而在雞蛋里也保存了較高的母源抗體，為商品代雞提供了很好的免疫保護(hù)。產(chǎn)蛋期的免疫間隔以12～16周為宜。

蛋雞；禽流感；免疫；抗體滴度

1 禽流感的基本概念

流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病。而禽流感(Avianhinuenza，Al)則是由A型流感病毒引起的一種禽類的疾病綜合征。雞、火雞、鴨、鵝和鶴鶉等家禽及野鳥(niǎo)、水禽、海鳥(niǎo)等均可感染。該病是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)規(guī)定的A類傳染病?，F(xiàn)時(shí)在我國(guó)雞群流行的禽流感病毒主要為H5亞型和H9亞型，能引起感染雞群生產(chǎn)性能的急劇下降乃至100％的急性死亡,我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病。

2 病原

引起禽流感的病原為禽流感病毒(AIV)，屬于正粘病毒科流感病毒屬，系RNA病毒。流感病毒內(nèi)部的核心由單鏈核糖核酸及核蛋白組成，根據(jù)核蛋白(NP)與基質(zhì)蛋白(MP)的抗原性不同可分為A、B、C三型，造成危害的禽流感病毒主要是A型。其病毒粒子核心外有一層脂質(zhì)囊膜，從脂質(zhì)中伸出許多微粒，即血凝素(HA)與神經(jīng)氨酸酶(NA)，后兩者是流感病毒的表面抗原，根據(jù)H與N的不同可區(qū)分為不同亞型。血凝素可與紅細(xì)胞表面的糖蛋白受體結(jié)合而發(fā)生紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。流感病毒有變異的特點(diǎn)，主要是H和N的變異。H 有HI-H16，而N僅有N1-Nl0，有時(shí)只有一種發(fā)生變異，有時(shí)兩種同時(shí)變異。小的變異是抗原的量變，稱抗原漂移，形成新的毒株稱為變種。當(dāng)抗原發(fā)生較大的變異時(shí)是抗原的質(zhì)變，稱為抗原株變，產(chǎn)生新的亞型。流感病毒還可以根據(jù)其致病性分為高致病性禽流感病毒、低致病性禽流感病毒與無(wú)致病性禽流感病毒。

3 臨床癥狀及病理變化

高致病性禽流感的表現(xiàn)為發(fā)病率和死亡率很高，一般表現(xiàn)為急性死亡，特急性死亡時(shí)病理變化不明顯。病程稍長(zhǎng)時(shí)表現(xiàn)為體溫升高，精神高度抑郁，食欲廢絕，羽毛松亂。氣管啰音、鳴叫。雞冠、肉髯、眼瞼水腫。眼結(jié)膜發(fā)炎，眼鼻腔有較多的漿液性或膿性分泌物，病雞腿部鱗片有紅色或黑色出血。下痢，排出黃綠色稀便。產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋量下降，甚至停產(chǎn)。產(chǎn)蛋下降的同時(shí)可見(jiàn)軟皮蛋、薄皮蛋、畸形蛋增多。病理變化主要表現(xiàn)為呼吸系統(tǒng)產(chǎn)生炎性分泌物，黏膜充血、出血，肺淤血，氣囊內(nèi)纖維素性滲出，內(nèi)臟普遍性出血。

低致病性禽流感是由H9N2等血清亞型引起的。該型的特點(diǎn)是潛伏期長(zhǎng)、發(fā)病比較緩和、病程稍長(zhǎng)、發(fā)病率和死亡率較低、差異大和疫情范圍逐漸擴(kuò)大，主要引起產(chǎn)蛋雞發(fā)病，青年雞和雛雞發(fā)病較少，一旦發(fā)病，疫情難以控制。病雞表現(xiàn)為采食量明顯減少，飲水增加，精神沉郁，從鼻腔中流出分泌物。眼結(jié)膜發(fā)紅，流淚，眼角有小氣泡。呼吸道癥狀較輕，嚴(yán)重程度不一。有的病雞表現(xiàn)為咳嗽，有的出現(xiàn)啰音，有的呼吸困難，伸頸張嘴，發(fā)出呼吸尖叫聲。病雞水樣稀便或排黃綠色稀便，產(chǎn)蛋下降的幅度與持續(xù)時(shí)間各個(gè)雞群完全不同，下降幅度為20％～80％，一般7～10天后下降到最低點(diǎn)，在此水平停留2周左右才緩慢回升?；謴?fù)期軟殼蛋、白殼蛋、沙皮蛋和畸形蛋比例增多。產(chǎn)蛋下降幅度和回升快慢與當(dāng)?shù)仉u群感染毒株的毒力、有否用過(guò)疫苗、飼養(yǎng)管理得好壞及是否進(jìn)行對(duì)癥治療等密切相關(guān)?？偟那闆r是雞群感染的毒株為低毒力的，曾經(jīng)用過(guò)禽流感疫苗，飼養(yǎng)管理?xiàng)l件較好，及時(shí)進(jìn)行了對(duì)癥治療等，其產(chǎn)蛋下降幅度較小，產(chǎn)蛋恢復(fù)也較快，有的雞群甚至可恢復(fù)到發(fā)病前的產(chǎn)蛋水平。青年雞發(fā)病時(shí)呼吸道癥狀較明顯，發(fā)病率高，死亡率與并發(fā)感染密切相關(guān)，可達(dá)5％～60％。低致病力禽流感發(fā)生時(shí)如并發(fā)或繼發(fā)其他疾病，則癥狀更加嚴(yán)重，病情更為復(fù)雜，死亡率、病死率升高。

4 禽流感的診斷

根據(jù)流行病學(xué)和臨床癥狀可進(jìn)行初步診斷，進(jìn)一步的診斷方法有病理學(xué)診斷、病毒分離和測(cè)血凝價(jià)。血清學(xué)診斷方法包括血凝和血凝抑制試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、中和試驗(yàn)和免疫熒光技術(shù)。其它檢測(cè)技術(shù)有補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)(CF)、單克隆抗體免疫過(guò)氧化物酶染色法、放射免疫測(cè)定(RIA)、核酸檢測(cè)技術(shù)和熒光RT-PCR技術(shù)等。

5 主要疫苗

表達(dá)H5亞型高致病性禽流感病毒血凝素基因的重組雞痘病毒(rFPV-HA)、H5亞型禽流感油乳劑全病毒滅活疫苗。H5亞型禽流感滅活疫苗的制備方法為將水相緩慢加入盛有油相的乳化反應(yīng)釜中,同時(shí)開(kāi)啟高速乳化剪切機(jī)進(jìn)行乳化制備疫苗。

6 本次研究的目的

疫苗免疫是預(yù)防和控制高致病性禽流感最有效的方法,我縣家禽需要預(yù)防的疫病較多,使用的疫苗種類也很多,因此在制定禽流感免疫程序時(shí)要兼顧其他疫病的免疫,確保免疫程序科學(xué)合理、便于操作。同時(shí)定期開(kāi)展免疫抗體監(jiān)測(cè),及時(shí)掌握免疫抗體水平,通過(guò)免疫抗體監(jiān)測(cè)指導(dǎo)養(yǎng)殖戶提高防疫認(rèn)識(shí)。

7 試驗(yàn)內(nèi)容

（1）材料。疫苗為AI油苗H5(Re-6)，取各不同日齡的蛋雞作為試驗(yàn)雞群，分3段式飼養(yǎng)。1～6周齡為育雛期、7～24周齡為育成期、25～67周齡為產(chǎn)蛋期。育雛和育成期主要是體重控制、性成熟控制、死淘率控制和均勻度控制，產(chǎn)蛋期主要是飼料的控制、疾病防治、體重控制和保證產(chǎn)蛋性能的正常發(fā)揮。雞舍夏季縱、橫兩向通風(fēng)，冬季縱向通風(fēng)，雞舍環(huán)境包括供暖、排風(fēng)、光照、舍內(nèi)氣壓均為自動(dòng)控制系統(tǒng)控制。還有體重、溫度、濕度、采食量與飲水量自動(dòng)記錄功能。都采用人工加料的方式。

（2）方法。選取不同日齡的蛋雞作為試驗(yàn)對(duì)象，編號(hào)為一批、二批、三批。一批為1～6周齡、二批為7～24周齡、三批為25～67周齡，均接種H5（Re-6），一批、二批進(jìn)行3次接種，三批只進(jìn)行2次接種。頸部皮下注射,每次接種量為0.5mL。從翅靜脈采血，每份血樣采集量為0.5～1.0mL。

（3）試驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析見(jiàn)表1、表2和圖1。

表1 蛋雞免疫程序

圖1 不同日齡蛋雞H5Re-6株抗體檢測(cè)結(jié)果

（4）結(jié)果分析。抗體HI效價(jià)測(cè)定。按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T18936-2003)血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)評(píng)定HI抗體水平操作方法進(jìn)行。按照農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T7692004進(jìn)行判定,即HI抗體滴度≥4log2為免疫抗體合格,抗體合格率≥70％為群體免疫合格。

從圖1中可以看出，接種H5Re-6株疫苗以后只有前兩次的抗體滴度沒(méi)有達(dá)到4log2，以后都在這以上，并維持一個(gè)較高的水平，抗體合格率明顯高于70％。試驗(yàn)表明，在開(kāi)產(chǎn)前經(jīng)3次以上免疫，開(kāi)產(chǎn)時(shí)均能達(dá)到較高的抗體滴度。產(chǎn)蛋期2～3次免疫接種抗體可以維持較穩(wěn)定的水平，因而為產(chǎn)蛋期的蛋雞提供了很好的免疫保護(hù)。從表中可以看出，產(chǎn)蛋期的免疫間隔以12～16周為宜。

表2 第三批蛋雞H5Re-5株抗體檢測(cè)結(jié)果

（5）討論。禽流感疫苗的生產(chǎn)由國(guó)家嚴(yán)格的控制，目前只指定3～5個(gè)廠家生產(chǎn)。關(guān)于禽流感疫苗在生產(chǎn)實(shí)踐中使用效果的報(bào)道很少，國(guó)內(nèi)學(xué)者的報(bào)道多是實(shí)驗(yàn)室結(jié)果。唐秀英等認(rèn)為，4～8周齡SPF雞和20～28周齡蛋雞免疫后7天產(chǎn)生免疫力，3周達(dá)到高峰，抗體值達(dá)7.0～10.5log2。免疫后180天，抗體不低于6.5log2，保護(hù)率仍可達(dá)90％。

實(shí)驗(yàn)室條件下疫苗免疫后抗體滴度普遍高于本實(shí)驗(yàn)實(shí)際使用時(shí)的抗體滴度，在生產(chǎn)中應(yīng)用禽流感疫苗要考慮到實(shí)驗(yàn)室與現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境及試驗(yàn)對(duì)象的差異。目前，一些學(xué)者己關(guān)注到禽流感疫苗的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)題。田國(guó)斌等認(rèn)為，現(xiàn)在疫苗的標(biāo)準(zhǔn)化方面還存在著一些不足，如沒(méi)有標(biāo)定疫苗中血凝素抗原的含量，疫苗的免疫效力試驗(yàn)必須用試驗(yàn)雞進(jìn)行，檢驗(yàn)周期長(zhǎng)，浪費(fèi)大量的人力和物力等。

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