馬興斌，吳金措姆，拉巴次旦，曾江勇

（1.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，西藏拉薩850009；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730070）

墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬流感病毒的血清學(xué)調(diào)查

馬興斌1,2，吳金措姆1，拉巴次旦1，曾江勇1

（1.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，西藏拉薩850009；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730070）

鑒于墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線是藏豬養(yǎng)殖較為密集區(qū)，為了解該地區(qū)藏豬流感病毒（SIV）的流行情況，采用抗體ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）同時(shí)對(duì)墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線工卡鎮(zhèn)、扎西崗鄉(xiāng)、日多鄉(xiāng)、加興鄉(xiāng)和金達(dá)鎮(zhèn)5個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)藏豬的600份血清進(jìn)行H1N1 SIV和H3N2 SIV抗體檢測(cè)。結(jié)果顯示，H1N1 SIV抗體檢測(cè)分析，陽(yáng)性血清共248份（41.33%）；H3N2 SIV抗體檢測(cè)分析，陽(yáng)性血清共90份（15.00%）；H1N1 SIV和H3N2 SIV混合感染抗體檢測(cè)分析，陽(yáng)性血清共59份（9.83%）。斷奶仔藏豬和1歲以上藏豬的感染率均以海拔相對(duì)較低的加興鄉(xiāng)和金達(dá)鎮(zhèn)為高。研究為墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H1N1 SIV和H3N2 SIV的預(yù)防提供參考依據(jù)。

藏豬；流感病毒；血清學(xué)調(diào)查；ELISA；血凝抑制試驗(yàn)

豬流感病毒（Swine innuenza virus,SIV）在實(shí)驗(yàn)室里所分離出來(lái)的病毒，多被辨識(shí)為A型流感病毒，或者是C型流感病毒的亞種之一，是豬群中一種可引起地方性流行性感冒的正黏液病毒（Orthomyxoviruses）?？梢栽斐韶i急性和高度接觸性呼吸道疾病，能夠引起不同日齡及品種的豬感染發(fā)病[1]。

豬流感是豬體內(nèi)因病毒引起的呼吸系統(tǒng)疾病。豬流感由A型流感[2]引發(fā)，通常暴發(fā)于豬之間，傳染性很高但通常不會(huì)引發(fā)死亡。豬流感病毒有很多個(gè)不同的亞型，計(jì)有H1N1和H3N2等亞型的甲型流感病毒都能導(dǎo)致豬流感的發(fā)生。

自Guan（1996）等[3]從中國(guó)南方以及東南亞地區(qū)分離出類禽（Eurasian Avian-1ike,EA）H1N1 SIV以來(lái)，EAH1N1 SIV在亞洲地區(qū)豬群中廣泛流行。證實(shí)有豬流感病毒在人際間傳染的病例，其傳播途徑與季節(jié)性流感類似，通常是通過(guò)感染者咳嗽和打噴嚏等傳染。豬呼吸道上皮具有2種流感病毒受體，能夠同時(shí)感染人流感病毒和禽流感病毒。因此豬被認(rèn)為是流感病毒的“混合器”，對(duì)新型流感病毒的形成起到重要作用。了解豬群中流感的疫情動(dòng)態(tài)是人類流感防控的重要依據(jù)，具有重大的公共衛(wèi)生學(xué)意義。

為調(diào)查墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬養(yǎng)殖較為密集區(qū)藏豬流感病毒的感染情況，筆者于2015年6月對(duì)上述兩縣的5個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)采集的600份血清樣品進(jìn)行了H1N1 SIV和H3N2 SIV的血清學(xué)檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 參考毒株與主要試劑

豬流感病毒抗體（SIV Ab-H1N1、SIV Ab-H3N2）檢測(cè)ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）試劑盒購(gòu)自美國(guó)IDEXX公司，受體破壞酶（RDE）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。

1.2 樣品的采集

選擇墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線工卡鎮(zhèn)、扎西崗鄉(xiāng)、日多鄉(xiāng)、加興鄉(xiāng)和金達(dá)鎮(zhèn)為采樣點(diǎn)，采集被檢藏豬非抗凝前腔靜脈血液5 mL，共采樣600份，標(biāo)明樣品采集時(shí)間、地點(diǎn)、編號(hào)，置于4℃冰箱保存、備用。

采樣原則：每個(gè)采樣點(diǎn)分別采集1歲以上藏豬（公母各半）非抗凝前腔靜脈血液80頭份，每頭份5 mL；斷奶仔藏豬（公母各半）40頭份，每頭份5 mL。

1.3 樣品處理

將采集血液凝固后離心分離血清并標(biāo)記，置-20℃保存，最后低溫送實(shí)驗(yàn)室于-70℃保存?zhèn)錂z。

1.4 檢測(cè)方法與數(shù)據(jù)處理

為保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，同時(shí)對(duì)采集的600份血清樣品做抗體ELISA檢測(cè)和血凝抑制試驗(yàn)（HI）。

按照IDEXX公司的H1N1、H3N2豬流感病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書對(duì)采集的600份血清樣品進(jìn)行抗體檢測(cè)。

根據(jù)參考文獻(xiàn)[4]通過(guò)血凝抑制試驗(yàn)（HI），對(duì)采集的600份血清樣品進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)。為防止血清學(xué)檢測(cè)中非特異性結(jié)果，采用RDE處理血清樣品，去除血清中非特異性抑制因子。根據(jù)各株抗原病毒的血凝（HA）效價(jià)配制4個(gè)HAU（4單位抗原）。依據(jù)OIE標(biāo)準(zhǔn)血清學(xué)診斷手冊(cè)說(shuō)明進(jìn)行HI試驗(yàn)，記錄HI效價(jià)。陽(yáng)性或陰性的臨界值為1∶40，HI效價(jià)≥1∶40時(shí)，結(jié)果判定為陽(yáng)性。

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，比較不同地區(qū)、不同年齡藏豬感染情況。

2 結(jié)果

2.1 墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H1N1 SIV抗體檢測(cè)結(jié)果

采用抗體ELISA和HI試驗(yàn)同時(shí)對(duì)墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H1N1流感病毒抗體檢測(cè)分析，陽(yáng)性血清共248份（41.33%）。斷奶仔藏豬以海拔相對(duì)較低的日多鄉(xiāng)（32.50%）和金達(dá)鎮(zhèn)（40%）為高；1歲以上藏豬以加興鄉(xiāng)（46.67%）和金達(dá)鎮(zhèn)（54.17%）為高，見表1。

表1 墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H1N1 SIV抗體檢測(cè)情況

2.2 墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H3N2 SIV抗體檢測(cè)結(jié)果

采用抗體ELISA和HI試驗(yàn)同時(shí)對(duì)墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H3N2流感病毒抗體檢測(cè)分析，陽(yáng)性血清共90份（15.00%）。斷奶仔藏豬以海拔相對(duì)較低的金達(dá)鎮(zhèn)（20.00%）為高；1歲以上藏豬以加興鄉(xiāng)（17.50%）為高，見表2。

表2 墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H3N2 SIV抗體檢測(cè)情況

2.3 墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H1N1 SIV和H3N2 SIV混合感染抗體檢測(cè)結(jié)果

采用抗體ELISA和HI試驗(yàn)同時(shí)對(duì)墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H1N1 SIV和H3N2 SIV混合感染抗體檢測(cè)分析，陽(yáng)性血清共59份（9.83%）。斷奶仔藏豬以海拔相對(duì)較低的加興鄉(xiāng)（15.00%）和金達(dá)鎮(zhèn)（15.00%）為高；同樣，1歲以上藏豬以加興鄉(xiāng)（11.25%）和金達(dá)鎮(zhèn)（11.25%）為高，見表3。

表3 墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H1N1 SIV和H3N2 SIV混合感染抗體檢測(cè)

3 分析與討論

實(shí)驗(yàn)室抗體檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行抗體ELISA和HI試驗(yàn)，陽(yáng)性數(shù)據(jù)基本一致。在此次調(diào)查中，H1N1亞型整體抗體陽(yáng)性率（41.33%）明顯高于H3N2亞型的（15.00%），差異顯著（P＜0.05），且兩種亞型混合感染率為9.83%。說(shuō)明H1N1豬流感病毒可能是墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬中流行的豬流感病毒的主要亞型。共同感染使病毒發(fā)生重組的幾率增加，因此藏豬豬流感病毒抗體共同感染陽(yáng)性率也說(shuō)明藏豬已成為流感病毒重組的潛在載體。

此次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，對(duì)斷奶仔藏豬和1歲以上藏豬，不論是H1N1亞型、H3N2亞型還是兩者的混合感染率均以海拔相對(duì)較低且空氣較濕潤(rùn)的加興鄉(xiāng)和金達(dá)鎮(zhèn)為高，說(shuō)明流感病毒與環(huán)境氣候有一定關(guān)系。

由于豬流感病毒在人際間傳染的病例，其傳播途徑與季節(jié)性流感類似，通常是通過(guò)感染者咳嗽和打噴嚏等傳染。此次調(diào)查僅為摸底性，由于項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)限制，暫時(shí)未能做具體不同年齡階段藏豬和季節(jié)的動(dòng)態(tài)學(xué)研究，特別是與旅游季節(jié)相關(guān)性分析。

此次調(diào)查采樣時(shí)間為2015年6月，且采樣地點(diǎn)不同于時(shí)新春（2013）[5]的林芝地區(qū)米林縣和林芝縣，亞型整體抗體陽(yáng)性率均略低于時(shí)新春（2013）[5]抗體ELISA試驗(yàn)結(jié)果。

本次調(diào)查為騎行旅游人流量相對(duì)較多的川藏公路線，且為藏豬養(yǎng)殖較為密集的墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣，結(jié)果為制定和實(shí)施有效的藏豬流感防控措施提供參考，并對(duì)西藏居民乃至全國(guó)人民H1N1 SIV和H3N2 SIV的防控具有十分重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。

[1]Olsen C W.The emeerence of novel swine influenza viruses in Nonh America[J].Virus Res,2002,85(2):199-210.

[2]豬流感病毒[M/OL].http://baike.baidu.com/link?url=T_BGPv8 WXxbcLGh9TjXwKwXTczW9O IB8 t3OPm-Nv49O8QvI5xB8Q aFhyIB75NZTxPyGTUlpfMLFDqJPC7AVfpK.

[3]Guan Y,Shortridge K F,Krauss S,et al.Emergence of avian H1N1 influenza viruses in pigs in China[J].J Virol,1996,70(11): 8041-8046.

[4]何淑儀，馬駿，方博，等.華南地區(qū)豬場(chǎng)豬流感和甲型H1N1/ 2009流感病毒的血清學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2015，37（9）：660-664.

[5]時(shí)新春.西藏林芝地區(qū)藏豬群6種傳染病的血清學(xué)流行病學(xué)調(diào)查[D].西安：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2013.（編輯：柳青）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)03-0123-02

2016-03-15

馬興斌（1984-），男，甘肅榆中人，助理研究員，在讀博士研究生，主要從事高原動(dòng)物疫病防控研究.E-mail：309528454@qq.com

曾江勇（1973-），男，湖南桃源人，研究員，博士，主要從事動(dòng)物流行病學(xué)研究.E-mail：zengjiangyong@126.com