朱秀高，李艷青，葉晶，唐萬勇，丁文格，柯佳晶，石勇耀，程福生，蔣文明，陸軍

（1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100000；2.武漢回盛生物科技有限公司，湖北武漢430042；3.濰坊科技學(xué)院生物研發(fā)中心，山東壽光262700）

2015年北方部分省份規(guī)?；i場偽狂犬病感染狀況分析與建議

朱秀高1,2，李艷青3，葉晶2，唐萬勇2，丁文格2，柯佳晶2，石勇耀2，程福生2，蔣文明2，陸軍2

（1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100000；2.武漢回盛生物科技有限公司，湖北武漢430042；3.濰坊科技學(xué)院生物研發(fā)中心，山東壽光262700）

通過對2015年1—12月份北方5省份（河北、山東、陜西、遼寧、河南）母豬存欄200～1 000頭豬場送檢的血清樣本，利用gE-ELISA試劑盒檢測的結(jié)果統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，河南和遼寧的偽狂犬病野毒陽性率最高，為60%以上，其他依次為河北、山東和陜西，陽性率分別為56.32%、47.70%和39.69%；不同階段豬群中公豬最高為68.18%，其次為經(jīng)產(chǎn)母豬66.57%、肥育豬55.20%、后備母豬39.47%、保育豬37%，產(chǎn)房仔豬最低為18.46%。說明這些省份的PRV野毒感染壓力依舊很大，且有上升趨勢，因此非常有必要加強(qiáng)對PRV變異株的研究。

北方；偽狂犬??；規(guī)?；i場

1 背景

豬偽狂犬?。⊿wine Pseudorabies,PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies Virus,PRV）引起的導(dǎo)致母豬繁殖障礙和仔豬神經(jīng)癥狀的傳染病，該病最早出現(xiàn)于美國，匈牙利科學(xué)家Aujeszky首先分離到病毒，因此該病又稱為奧耶斯基病（Aujeszky Disease）。在該病的防控過程中，伴隨分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，人們研發(fā)出了一系列基于特定基因缺失的基因缺失疫苗，其中g(shù)E基因缺失疫苗及配套抗體檢測技術(shù)在很多國家的PR凈化中起到了非常重要的作用。這一疫苗也在我國大面積使用，通過檢測淘汰等配套方法的應(yīng)用，在很多區(qū)域特別是一些種豬場實(shí)現(xiàn)了PR的凈化，使豬群PR的感染壓力大幅降低。從2011年左右開始，筆者在山東、遼寧、河北、河南、浙江等地接觸到了很多以母豬產(chǎn)死胎、產(chǎn)房仔豬和保育豬神經(jīng)癥狀以及肥育豬呼吸道病癥狀為主的PR病例，實(shí)驗(yàn)室檢測這些均為PRV感染造成，根據(jù)一些研究資料報道，同一時期國內(nèi)很多地區(qū)都出現(xiàn)了此類感染。對分離毒株的基因序列分析顯示，這些病毒與常用疫苗毒相比已經(jīng)出現(xiàn)了變異，如TK基因、gE基因等，因此豬場必須高度重視PR的防控，以減輕損失。為了解北方地區(qū)規(guī)?；i場中偽狂犬病感染狀況，我們將2015年1—12月份河北、山東、陜西、河南、遼寧等5省份存欄母豬規(guī)模200～1 000頭、免疫背景清楚且免疫Bathar K61疫苗的豬場送檢血清的檢測結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示豬群PR野毒感染嚴(yán)重。

2 材料與方法

2.1 試驗(yàn)材料

豬偽狂犬病gE-ELISA抗體檢測試劑盒，購自武漢科前生物制品有限公司；MUltiskan FC酶標(biāo)儀、Eppdorf移液器、恒溫箱等。

待檢樣品：共1 808份，各場自行采集并編號，待自然凝固析出血清后，放入裝有冰袋的保溫箱內(nèi)，于48小時內(nèi)送至武漢回盛生物科技有限公司豬病檢測所實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。

2.2 試驗(yàn)方法

采用阻斷ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）方法，按試劑盒使用說明書嚴(yán)格進(jìn)行操作，結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)如下：若S/N≤0.35，樣品判為gE抗體陽性；若0.35＜S/N≤0.4，樣品判為可疑，該樣品必須重測，如結(jié)果相同，則判為gE抗體陽性；若S/N＞0.4，樣品判為gE抗體陰性。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 不同省份送檢樣品的檢測結(jié)果

2015年1—12月份檢測PR野毒抗體的血清樣本有3 000多份，其中符合分析條件，即免疫背景清楚且使用Barthar K61毒株、母豬規(guī)模為200～1 000頭的北方地區(qū)豬場送檢樣品數(shù)為1 808份，這些省份有河北、河南、遼寧、山東和陜西。各省具體檢測結(jié)果見表1，送檢樣品數(shù)方面，各省排名依次為山東（40.82%）、河南（25.72%）、陜西（14.49%）、河北（10.51%）和遼寧（8.46%），其中河南和遼寧的偽狂犬病野毒陽性率最高為60%以上，其他依次為河北、山東和陜西，陽性率分別為56.32%、47.70%和39.69%。

表1 不同省份樣品的偽狂犬病檢測結(jié)果

3.2 不同階段豬群的檢測結(jié)果

將符合條件的送檢樣品按不同階段進(jìn)行分類后，主要集中在以下幾個階段：公豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、產(chǎn)房仔豬、保育豬和肥育豬，其中送檢數(shù)最多的為經(jīng)產(chǎn)母豬，占到總送檢樣品數(shù)的39.71%，其次為后備母豬，約占24.94%，母豬的總占比達(dá)到64.66%。公豬的偽狂犬病野毒陽性率最高為68.18%，其次為經(jīng)產(chǎn)母豬66.57%、肥育豬55.20%、后備母豬39.47%、保育豬37.00%，產(chǎn)房仔豬最低為18.46%，詳見表2。

表2 不同階段豬群的偽狂犬病檢測結(jié)果

4 分析與討論

（1）從檢測結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，送檢樣品的整體偽狂犬病野毒陽性率較高達(dá)到51.88%。5省份中河南、遼寧在60%以上，陜西最低但接近40%；豬群中公豬和經(jīng)產(chǎn)母豬的陽性率也在60%以上，產(chǎn)房仔豬最低為18.46%。這說明2015年北方地區(qū)這些省份的PR野毒感染率仍然偏高，其中以經(jīng)產(chǎn)母豬、公豬和肥育豬為重。從Wu等[1]、鄒敏等[2]、張棟等[3]的調(diào)查數(shù)據(jù)來看，這些地區(qū)的PR野毒陽性率在2015年還有上升趨勢，因此豬場必須要高度重視PR的防控，特別是種豬場需要考慮PR的凈化，以保證生產(chǎn)水平的維持。

（2）PRV的重新感染問題從2011年起就有豬場開始出現(xiàn)，之后國內(nèi)許多專家進(jìn)行了細(xì)致研究，在病毒分離、生物學(xué)特性研究和基因序列測定分析等方面都做了很多工作，目前大家一致認(rèn)為與現(xiàn)有疫苗毒相比新感染毒株在一些基因片段方面出現(xiàn)了變異。趙鴻遠(yuǎn)等[4]發(fā)現(xiàn)，2012—2014年的分離毒株與經(jīng)典毒株相比，其gE蛋白的48位和492位各存在一個天冬氨酸的插入，而且進(jìn)化分析顯示，這3年分離株明顯自成一個分支。范克偉等[5]對2013年以后收集的福建地區(qū)PRV野毒的TK基因分析發(fā)現(xiàn)，雖然TK基因高度保守，但這些分離株在16位和129位處有獨(dú)特性的氨基酸突變。不過目前研究者們還未對變異株的特征有統(tǒng)一認(rèn)識，也未對變異位點(diǎn)在致病力增強(qiáng)和逃避免疫保護(hù)方面的相關(guān)性進(jìn)行深入研究。

（3）由于gE基因缺失疫苗的使用使得進(jìn)行PR抗體檢測時可以有效區(qū)分疫苗抗體和野毒感染抗體，也為進(jìn)行PR的凈化提供了良好的條件。本次統(tǒng)計顯示，不同階段豬群中產(chǎn)房仔豬的野毒陽性率最低，隨著仔豬日齡的增加，陽性率逐步上升至肥豬階段的55%左右，說明母源抗體對仔豬的保護(hù)非常重要，因此豬場必須采取措施提高母源抗體的滴度和延長維持時間。近年來，在尚無以變異株為毒株的疫苗應(yīng)用情況下，我們在生產(chǎn)中利用現(xiàn)有疫苗通過增加免疫次數(shù)和增加單次免疫劑量的方法發(fā)現(xiàn)，可以有效提高母源抗體水平，不過使用中也必須注意不能過度免疫。此外提早阻斷PRV的感染通路也是降低感染風(fēng)險的一個有效方法，多年的研究和應(yīng)用已經(jīng)證實(shí)給仔豬進(jìn)行滴鼻免疫就是非常好的措施，生產(chǎn)中也發(fā)現(xiàn)對野毒感染壓力大的豬場在仔豬出生后就進(jìn)行滴鼻免疫可以明顯降低野毒感染率。對種豬群的野毒感染問題，在臨床上我們建議公豬、后備母豬和5胎及以上的經(jīng)產(chǎn)母豬帶毒豬必須要淘汰處理，4胎以下可以通過調(diào)整免疫程序的方法來降低仔豬的感染壓力和保持生產(chǎn)的正常進(jìn)行。

PRV變異株的出現(xiàn)以及由此帶來的野毒感染率上升問題和繼發(fā)感染已經(jīng)嚴(yán)重影響了近年來國內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，為了提高國內(nèi)養(yǎng)豬生產(chǎn)水平、降低疾病感染壓力，必須要加快對PRV變異株的研究并盡早推出針對性的疫苗和防控方案。

[1]Wu R,Bai C,Sun J,et al.Emergence of virulent pseudorabies virusinfectioninNorthernChina[J].JournalofVeterinaryScience, 2013,14(3):363-365.

[2]鄒敏，楊旭兵，鄭輝，等.2012―2013年我國部分地區(qū)豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查[J].中國動物檢疫，2015，32（4）：1-5.

[3]張棟，張月，李云崗，等.山東省部分規(guī)模豬場豬偽狂犬病的免疫效果評估與分析[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2015（10）：103-104.

[4]趙鴻遠(yuǎn)，彭金美，安同慶，等.豬偽狂犬病病毒變異株的分離鑒定及其gE基因的分子特征[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2014，36（7）：506-509.

[5]范克偉，戴愛玲，劉建奎，等.閩西地區(qū)豬偽狂犬病毒變異株TK基因新變異序列鑒定[J].中國獸醫(yī)學(xué)報，2015，35（9）：1415-1421.

（編輯：柳青）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)03-0111-02

2016-01-04

朱秀高（1984-），男，山東濰坊人，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，博士，主要從事動物疫病防控與監(jiān)測.E-mail:zhuxiugaao＠163.com