張 暉，張 偉，郭慶明，蕭 偉#（1.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇連云港 222001；2.中藥制藥過程新技術國家重點實驗室，江蘇連云港 222001）

光纖藥物溶出實時測定儀結合f2法評價阿折地平片自制制劑與原研制劑溶出曲線的相似性

張 暉1，2＊，張 偉1，2，郭慶明1，2，蕭 偉1，2#（1.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇連云港 222001；2.中藥制藥過程新技術國家重點實驗室，江蘇連云港 222001）

目的：評價阿折地平片自制制劑與原研制劑溶出曲線的相似性，為其質量控制和臨床使用提供參考。方法：采用槳法，轉速為50 r/min，分別以500 ml的pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液、pH4.0乙酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和水為溶出介質進行溶出度試驗，用光纖藥物溶出實時測定儀測定阿折地平片自制制劑與原研制劑中主成分在不同時間點的累積溶出度，并與紫外-可見分光光度法測定結果進行比較，進而繪制溶出曲線，采用相似因子（f2）法評價二者溶出曲線的相似性。結果：光纖藥物溶出實時測定儀測定的累積溶出度結果與紫外-可見分光光度法測定結果無明顯差異。阿折地平片自制制劑與原研制劑在各溶出介質中溶出曲線的f2均＞50，說明二者溶出曲線具有相似性，但在后3種溶出介質中自制制劑較原研制劑溶出度略低。結論：采用光纖藥物溶出實時測定儀能夠準確、方便地提供藥物的實時溶出度數(shù)據(jù)，反映藥物的動態(tài)溶出過程，為全面考察藥物的內在質量提供有力的檢測手段。而阿折地平片自制制劑的處方和工藝仍有待進一步研究。

阿折地平片；光纖藥物溶出實時測定儀；溶出曲線；相似因子法；評價

阿折地平為新一代二氫吡啶類鈣離子阻滯藥，由日本Sankyo公司與Ube公司聯(lián)合開發(fā)成功并于2003年首次在日本上市，商品名為Calblock?。該藥可通過抑制鈣離子內流使外周血管和冠脈血管擴張，臨床用于輕度及中度高血壓的治療。其作為一種長效抗高血壓藥物，克服了其他一些抗高血壓藥物如硝苯地平和尼卡地平等起效過快、效力不持久的缺點，能擴張血管，降低外周血管和冠脈血管阻力，增加冠狀竇血流，改善心臟和肺的血流動力學。該藥對輕度或中等癥狀的原發(fā)性高血壓以及重度高血壓的降壓作用均較好[1]。

對于口服固體制劑，其體外溶出度試驗和溶出曲線考察不僅可預測藥物體內生物利用度，還可用于：（1）指導新制劑開發(fā)；（2）評價制劑批間質量的一致性；（3）當制劑生產過程中某些因素發(fā)生變化，如處方、生產工藝、生產場所變更或生產工藝放大后，確保其質量和療效的一致性[2]。溶出曲線相似性的評價方法有多種，自1999年美國食品與藥品管理局（FDA）推薦采用相似因子（f2）法[3]以來，該法己被普遍采用。本研究參照《日本藥品品質再評價工程》[4]，并參考國家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）發(fā)布的《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》[5]，選用模擬人體消化道內體液的4種溶出介質進行溶出度試驗，并采用光纖藥物溶出實時測定儀（Fiber-optic dissolution test，F(xiàn)ODT）測定阿折地平片自制制劑與原研制劑中主成分在不同時間點的累積溶出度，同時與阿折地平片自擬標準中溶出度測定方法紫外-可見分光光度法（UV）測定結果進行比較，進而繪制溶出曲線，采用f2法評價二者溶出曲線的相似性，旨在為自制制劑質量控制和臨床使用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

FODT-601型FODT、FAVD-25型智能真空脫氣儀（上海富科思分析儀器有限公司）；UV-2401PC型UV計（日本島津公司）；XP6型電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；PB-10型pH計（德國賽多利斯公司）；KQ5200V型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司，功率：200 W，頻率：40 kHz）。

1.2 藥品與試劑

阿折地平片（自制制劑，江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，批號：131001、131002、131003，規(guī)格：8 mg；原研制劑，日本第一三共株式會社，批號：GHA2014，規(guī)格：8 mg）；阿折地平對照品（江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，批號：130701，純度：99.7%）；所用試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液 精密稱取阿折地平對照品20 mg，置于50 ml量瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，量取2 ml，置于50 ml量瓶中，用pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液稀釋至刻度，制成每1 ml約含16μg阿折地平的對照品溶液（以pH4.0乙酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和水制備的對照品溶液均有沉淀析出，故不予采用）。

2.1.2 空白溶液 按自制制劑處方稱取輔料適量（約22.4 mg），置于100 ml量瓶中，加pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液超聲處理5 min，溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為空白溶液。

2.1.3 溶出介質 pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液（a）——取氯化鈉2.0 g，加水適量使溶解，加鹽酸7 ml，用水稀釋至1 000 ml，搖勻，即得；pH4.0乙酸鹽緩沖液（b）——取乙酸鈉1.22 g，加2 mol/L乙酸溶液（取120 g冰乙酸加水稀釋至1 000 ml，搖勻，即得）20.5 ml，用水溶解并稀釋至1 000 ml，搖勻，即得；pH6.8磷酸鹽緩沖液（c）——取磷酸二氫鉀1.7 g和無水磷酸氫二鈉1.775 g，加水溶解并稀釋至1 000 ml，搖勻，即得；水（d）——純化水。

2.2 FODT測定條件的確定

取“2.1”項下阿折地平對照品溶液（16μg/ml）適量，在FODT上掃描吸收光譜。結果顯示，在269 nm波長處有最大吸收，故選用269 nm作為測定波長，并選擇550 nm為參比波長，進行雙波長空白校正。根據(jù)Lamber-Beer定律，當光程為1.0 cm（探頭規(guī)格為5 mm）時，阿折地平在雙波長下吸光度的差值與質量濃度呈良好的線性關系。故確定FODT的測定條件為：測定波長269 nm，參比波長550 nm，探頭規(guī)格5.0 mm，測定光程1.0 cm，取樣時間間隔30 s。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察 精密稱取阿折地平對照品20.08 mg，置于50 ml量瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取1、2、3、4、8 ml，置于100 ml量瓶中，加pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液稀釋至刻度，搖勻，制得質量濃度分別為4.016、8.032、12.048、16.064、32.128μg/ml的系列對照品溶液。使用FODT按“2.2”項下條件測定吸光度（6個通道），以質量濃度（x，μg/ml）為橫坐標、雙波長吸光度的差值ΔA（y）為縱坐標進行線性回歸，回歸方程見表1。

由表1可以看出，6個通道測定結果均一性良好，阿折地平檢測質量濃度線性范圍為4.016～32.128μg/ml。

表1 6個通道的回歸方程Tab 1 Regression equations of 6 pathways

2.3.2 精密度試驗 將FODT的6個探頭分別浸入“2.3.1”項下的低、中、高3種質量濃度（8.032、12.048、16.064μg/ml）的對照品溶液中，按“2.2”項下條件測定吸光度，連續(xù)測定6次，計算RSD。結果，阿折地平6個通道ΔA的RSD＝0.86%～1.63%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.3.3 回收率試驗 根據(jù)處方比例，分別按標示量的50%、80%、100%精密稱取對照品（4、6.4、8 mg），輔料按處方量的100%稱取，每個水平各3份，按照2015年版《中國藥典》（四部）0931“溶出度與釋放度測定法”項下的第二法（槳法）[6]，以pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液為溶出介質，介質體積500 ml，轉速50 r/min，溫度（37.0±0.5）℃，依法操作，經60 min，在FODT中按“2.2”項下條件測定吸光度并計算回收率，結果見表2。

表2 回收率試驗結果（n＝9）Tab 2 Results of recovery test（n＝9）

2.4 溶出度測定及溶出曲線繪制

采用2015年版《中國藥典》（四部）0931“溶出度與釋放度測定法”項下的第二法（槳法）[6]，轉速為50 r/min，分別將500 ml脫氣后的4種溶出介質（pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液、pH4.0乙酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和水）加入各溶出杯內，待溶出介質溫度恒定在（37.0±0.5）℃時，開始溶出度試驗。將FODT光纖探頭定位于杯中標準的取樣位置，打開FODT實時監(jiān)測系統(tǒng)，首先掃描空白溶出介質檢測探頭有無異常情況，若無異常情況，分別將3批自制制劑和1批原研制劑樣品（每批測12片）投入溶出杯中，按“2.2”項下測定條件，監(jiān)測時間為60 min，由計算機實時監(jiān)測樣品的溶出過程獲得溶出曲線。與此同時，選擇1批自制制劑（批號：131001）和原研制劑（批號：GHA2014），于10、20、30、45、60 min時分別取樣5 ml（及時補充相同體積的空白溶出介質），濾過，棄去初濾液，以UV計在269 nm波長處測定吸光度，計算各時間點的累積溶出度。阿折地平片自制制劑與原研制劑在各溶出介質中的平均累積溶出度測定結果見表3，溶出曲線見圖1。

由圖1可知，在pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液中，在10 min時自制制劑藥物累積溶出度較原研制劑稍高；到20 min時兩種制劑藥物累積溶出度均＞75%，到60 min時兩種制劑藥物累積溶出度均＞90%。而在pH4.0乙酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和水介質中，10～20 min時兩種制劑藥物溶出接近飽和，60 min時兩種制劑藥物累積溶出度均＜50%，原研制劑略高于自制制劑。

表3 阿折地平片自制制劑與原研制劑在各溶出介質中的平均累積溶出度（n＝12）Tab 3 Cumulative dissolution of the self-prepared and original preparations in the different dissolution media（n＝12）

圖1 阿折地平片自制制劑與原研制劑在各溶出介質中的溶出曲線（n＝12）A.以pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液為介質；B.以pH4.0乙酸鹽緩沖液為介質；C.以pH6.8磷酸鹽緩沖液為介質；D.以水為介質Fig 1 Dissolution curves of the self-prepared and original preparations in the different dissolution media（n＝12）A.pH1.2 HCL-NaCL as medium；B.pH4.0 acetate buffer as medium；C. pH6.8 phosphate buffer as medium；D.water as medium

2.5 溶出曲線的相似性評價

采用美國FDA推薦的f2法評價口服固體制劑體外溶出曲線是否具有相似性。f2計算公式如下：

式中，n為取樣時間點數(shù)；Rt和Tt分別為參比制劑（原研制劑）和受試制劑（自制制劑）第t時間點的平均累積溶出度。若f2≥50，則認為兩種制劑的溶出曲線相似；若f2＜50，則認為兩種制劑的溶出曲線不相似。經計算，阿折地平片自制制劑與原研制劑在各溶出介質中溶出曲線的f2見表4。

由表4可知，3批自制制劑與原研制劑樣品在4種溶出介質中溶出曲線的f2均＞50，說明二者溶出曲線具有相似性。

3 討論

3.1 FODT法與UV法的比較

表4 阿折地平片自制制劑與原研制劑在各溶出介質中溶出曲線的f2Tab 4 f2similar factor of the self-prepared and original preparations in the different dissolution media

本試驗結果顯示，F(xiàn)ODT法與UV法溶出度測定結果無明顯差異，而與傳統(tǒng)UV法相比，F(xiàn)ODT法優(yōu)勢明顯：UV法需在規(guī)定的時間點抽取一定體積的樣品溶液，必須經濾過、稀釋后測定吸光度，經計算得到結果，過程繁雜，容易引入人為操作誤差；FODT法則通過選擇不同規(guī)格的光纖探頭和參比波長，實現(xiàn)藥物的連續(xù)、原位、在線、實時測定，避免了稀釋、濾過等操作對試驗結果的影響。儀器操作通過相關控制軟件的圖形用戶界面進行，測定的時間間隔以秒計算，取樣時間非常精確，同時其可以很方便地計算出評價溶出曲線相似性的f2，極大地提高了工作效率。近年的研究和大量的應用實踐證明[7-9]，F(xiàn)ODT性能穩(wěn)定、可靠，能實時、準確地監(jiān)測口服固體制劑的動態(tài)溶出過程，是評價藥物體外溶出行為的有力手段。

3.2 溶出介質的影響

由不同溶出介質中溶出曲線可知，隨著介質pH值增大制劑中藥物累積溶出度減少，說明阿折地平的溶解度呈pH值依賴性，易溶于酸性介質。以pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液為溶出介質時，自制制劑和原研制劑在60 min內均全部溶出；而以pH4.0乙酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和水為溶出介質時，自制制劑較原研制劑溶出度略低，可能與原料的粒度、輔料類型、制劑工藝、檢測方法等因素有很大關系。通過上述試驗表明自制制劑的處方、工藝及檢測方法等仍有待進一步研究。

[1] 舒成仁，衛(wèi)樂樂，葛苗苗.阿折地平片的人體藥動學研究[J].中國藥房，2012，23（10）：896.

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（編輯：周 箐）

Evaluation of the Similarity of Dissolution Curves in vitro of Azelnidipine Tablet between the Self-prepared and Original Preparations by Fiber-optic Dissolution Tester and f2

ZHANG Hui1，2，ZHANG Wei1，2，GUO Qingming1，2，XIAO Wei1，2（1.Jiangsu Kanion Parmaceutical Co.，Ltd.，Jiangsu Lianyungang 222001，China；2.State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process，Jiangsu Lianyungang 222001，China）

OBJECTIVE：To evaluate the similarity of dissolution curves in vitro of Azelnidipine tablet between the self-prepared and original preparations，and provide reference for its quality control and clinical application.METHODS：Paddle method was used at rate of 50 r/min，and dissolution test was conducted with media of 500 ml pH1.2 Hydrochloric acid sodium chloride solution，pH4.0 Acetate buffer solution，pH6.8 Phosphate buffer solution，fiber-optic dissolution tester was used to detect the cumulative dissolution the main ingredients in Azelnidipine tablet between the self-prepared and original preparations at different time points，and compared with the results of UV-visible spectrophotometry，then dissolution curve was plotted，f2was used to evaluate the similarity of their similarity.RESULTS：There was no obvious difference in the results between fiber optic drug dissolution real-time detector and UV-visible spectrophotometry.f2Similarity factors were more than 50 and the dissolution curves of the self-prepared and original preparations were similar in the different dissolution media，while the dissolution was relatively low in the last 3 media.CONCLUSIONS：Fiber-optic dissolution tester can accurately and conveniently provide the real-time dissolution and reflect its dynamic dissolution process，which provides an effective way to investigate the inner quality of drug completely.However，the formulation and technology of the self-prepared preparation of Azelnidipine tablet need to be further studied.

Azelnidipine tablet；Fiber-optic dissolution tester；Dissolution curve；f2；Evaluation

R927

A

1001-0408（2016）33-4739-04

2015-12-03

2016-10-08）

＊工程師。研究方向：新藥研發(fā)。電話：0518-81152332。E-mail：huizhang_96@163.com

#通信作者：研究員級高級工程師，博士。研究方向：中藥新藥研發(fā)。電話：0518-81152367。E-mail：kanionlunwen@163.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.33.44