錢鈞強，張霄蓓

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·論著·

乳腺癌患者細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶5調(diào)節(jié)亞基相關(guān)蛋白2表達與新輔助化療療效的相關(guān)性研究

錢鈞強，張霄蓓

目的 通過檢測新輔助化療前乳腺癌組織中細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶5調(diào)節(jié)亞基相關(guān)蛋白2(CDK5RAP2)表達情況，分析其對乳腺癌新輔助化療效果的評估作用。方法 選取2014年于天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院乳腺外科初診的女性乳腺癌患者191例為研究對象。收集患者臨床病理資料，包括年齡、腫瘤家族史、絕經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分子分型等；針吸乳腺癌組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)法檢測CDK5RAP2表達?；颊呓邮?個周期的TEC新輔助化療后進行乳腺癌仿根治術(shù)或保乳手術(shù)，術(shù)前評估化療療效。結(jié)果 本組患者中，18例(9.4%)患者獲得病理完全緩解(pCR)，23例(12.1%)患者獲得臨床完全緩解(cCR)，106例(55.5%)患者獲得部分緩解(PR)，44例患者(23.0%)獲得穩(wěn)定(SD)。不同腫瘤直徑、分子分型的患者新輔助化療療效比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。38例(19.9%)患者CDK5RAP2表達陰性，153例(80.1%)患者CDK5RAP2表達陽性。不同CDK5RAP2表達的乳腺癌患者新輔助化療療效比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。不同CDK5RAP2表達的Luminal A型、基底樣乳腺癌患者新輔助化療療效比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。不同CDK5RAP2表達的Luminal B型、Her-2陽性乳腺癌患者新輔助化療療效比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 CDK5RAP2表達對Luminal B型及Her-2陽性乳腺癌患者新輔助化療療效具有一定的預(yù)測作用。

乳腺腫瘤；細(xì)胞周期蛋白依賴激酶5；新輔助化療；治療結(jié)果

錢鈞強，張霄蓓.乳腺癌患者細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶5調(diào)節(jié)亞基相關(guān)蛋白2表達與新輔助化療療效的相關(guān)性研究[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2016，19(35)：4346-4349.[www.chinagp.net]

QIAN J Q,ZHANG X B.Correlation between CDK5RAP2 expression and effect of neoadjuvant chemotherapy in breast cancer[J].Chinese General Practice，2016，19(35)：4346-4349.

研究表明，中心體的異常與惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[1]。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶5調(diào)節(jié)亞基相關(guān)蛋白2(cyclin-dependent kinase 5 regulatory subunit-associated protein 2,CDK5RAP2)最早發(fā)現(xiàn)于常染色體隱性遺傳病小頭畸形的患者中[2]，其在γ-微管蛋白定位于中心體中發(fā)揮著重要作用[3]?，F(xiàn)有研究表明，在乳腺正常腺體組織中CDK5RAP2不表達或低表達，而在導(dǎo)管原位癌及浸潤性乳腺癌中均高表達，提示CDK5RAP2的表達與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4]。而CDK5RAP2表達水平對乳腺癌化療療效的預(yù)測價值研究仍較少見。本研究探討新輔助化療前乳腺癌組織中CDK5RAP2表達與新輔助化療療效的關(guān)系，為改善乳腺癌患者預(yù)后提供依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2014年于天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院乳腺外科初診的女性乳腺癌患者191例為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)粗針吸穿刺活檢證實的臨床分期為T1～4N0～2M0的乳腺癌；(2)臨床病理資料完整?；颊呔炇鹬橥鈺?，本研究通過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核。

1.2 方法

1.2.1 臨床病理資料收集 收集患者臨床病理資料，包括年齡、腫瘤家族史、絕經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分子分型等，乳腺癌分子分型參考2013年St Gallen專家共識[5]。

1.2.2 免疫組織化學(xué)法檢測CDK5RAP2表達 針吸乳腺癌組織標(biāo)本置于10%甲醛溶液，并進行石蠟包埋。CDK5RAP2抗體由天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院公共實驗室贈予。石蠟塊連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、高溫高壓修復(fù)3.5 min，3%過氧化氫溶液浸泡，血清封閉，加入一抗(CDK5RAP2)，抗體滴度為1∶200，4 ℃冰箱過夜，加入二抗，37 ℃孵育40 min；辣根過氧化酶標(biāo)記的卵白素工作液反應(yīng)20 min，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色；蘇木素復(fù)染1～2 min，1%鹽酸乙醇溶液洗滌20 s，氨水返藍2 min。梯度乙醇脫水，透明，封固。設(shè)陽性和陰性對照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷：染色陽性強度分為無著色0分，淺著色1分，中等著色2分，強著色3分；染色陽性細(xì)胞所占比例<1%為0分，1%～33%為1分，34%～67%為2分，>67%為3分。染色陽性強度和染色陽性細(xì)胞所占比例得分乘積為最后得分，0分為陰性，1～2分為低表達，3～6分為中度表達，7～9分為高表達。

1.2.3 新輔助化療及療效評估 病理證實為乳腺癌后，給予TEC新輔助化療，方案為紫杉與蒽環(huán)類聯(lián)合或序貫治療：紫杉醇135 mg/m2(或多西紫杉醇75 mg/m2)，第1天，1次/3周；吡柔比星35 mg/m2(或表柔比星75 mg/m2)，第1天,1次/3周；環(huán)磷酰胺500 mg/m2,第1天，1次/3周；共6個周期。新輔助化療后3～4周行乳腺癌仿根治術(shù)或保乳手術(shù)。術(shù)前依據(jù)RICIST實體瘤評估標(biāo)準(zhǔn)(version 1.1)[6]對新輔助化療療效進行評估，分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)、進展(PD)，其中CR可分為病理完全緩解(pCR，腫瘤原發(fā)灶處連續(xù)切片未見腫瘤細(xì)胞)和臨床完全緩解(cCR)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料以相對數(shù)表示，兩組等級資料的比較采用Mann-WhitneyU檢驗，多組等級資料的比較采用Kruskal-WallisH檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同臨床病理特征的乳腺癌患者新輔助化療療效比較 本組患者中，18例(9.4%)患者獲得pCR，23例(12.1%)患者獲得cCR，106例(55.5%)患者獲得PR，44例(23.0%)患者獲得SD。不同年齡、腫瘤家族史、絕經(jīng)狀態(tài)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期的患者新輔助化療療效比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。不同腫瘤直徑、分子分型的患者新輔助化療療效比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

2.2 不同CDK5RAP2表達的乳腺癌患者新輔助化療療效比較 38例(19.9%)患者CDK5RAP2表達陰性，153例(80.1%)患者CDK5RAP2表達陽性，其中低表達31例，中度表達64例，高表達58例(見圖1，本文彩圖詳見本刊官網(wǎng)www.chinagp.net電子期刊相應(yīng)文章附件)。不同CDK5RAP2表達的乳腺癌患者新輔助化療療效比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,見表2)。

表1 不同臨床病理特征的乳腺癌患者新輔助化療療效比較〔n(%)〕

Table 1 Comparison of effect of neoadjuvant chemotherapy among different clinical pathological features in patients with breast cancer

臨床病理特征例數(shù)pCRcCRPRSDZ(H)值P值年齡(歲)-1.7200.085 ≤35254(16.0)5(20.0)12(48.0)4(16.0) >3516614(8.4)18(10.8)94(56.6)40(24.2)腫瘤家族史-0.3420.732 無13210(7.6)18(13.6)76(57.6)28(21.2) 有598(13.6)5(8.5)30(50.8)16(27.1)絕經(jīng)狀態(tài)-0.0150.988 絕經(jīng)前918(8.8)13(14.3)48(52.7)22(24.2) 絕經(jīng)后10010(10.0)10(10.0)58(58.0)22(22.0)腫瘤直徑(cm)-3.854<0.001 ≤58414(16.7)14(16.7)44(52.4)12(14.2) >51074(3.7)9(8.4)62(57.9)32(30.0)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移-1.0820.279 陰性546(11.1)10(18.5)26(48.2)12(22.2) 陽性13712(8.8)13(9.5)80(58.4)32(23.3)臨床分期(期)-0.6790.497 Ⅱ648(12.5)10(15.6)30(46.9)16(25.0) Ⅲ12710(7.9)13(10.2)76(59.8)28(22.1)分子分型11.604a0.009 LuminalA型370 3(8.1)20(54.1)14(37.8) LuminalB型804(5.0)12(15.0)46(57.5)18(22.5) Her-2陽性428(19.0)6(14.3)20(47.6)8(19.1) 基底樣326(18.8)2(6.2)20(62.5)4(12.5)

注：pCR=病理完全緩解，cCR=臨床完全緩解，PR=部分緩解，SD=穩(wěn)定；a為H值

注：A示陰性，B示低表達，C示中度表達，D示高表達

圖1 免疫組織化學(xué)法檢測乳腺癌組織CDK5RAP2表達(SP染色，×400)

Figure 1 The expression of CDK5RAP2 in breast cancer by immunohistochemical method

表2 不同CDK5RAP2表達的乳腺癌患者新輔助化療療效比較

〔n(%)〕

Table 2 Comparison of effect of neoadjuvant chemotherapy between different expression of CDK5RAP2 in patients with breast cancer

CDK5RAP2表達例數(shù)pCRcCRPRSD陰性388(21.1)8(21.1)15(39.5)7(18.3)陽性15310(6.5)15(9.8)91(59.5)37(24.2)Z值-2.645P值0.008

注：CDK5RAP2=細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶5調(diào)節(jié)亞基相關(guān)蛋白2

2.3 不同CDK5RAP2表達的各分子分型乳腺癌患者新輔助化療療效比較 不同CDK5RAP2表達的Luminal A型、基底樣乳腺癌患者新輔助化療療效比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。不同CDK5RAP2表達的Luminal B型、Her-2陽性乳腺癌患者新輔助化療療效比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表3)。

表3 不同CDK5RAP2表達的各分子分型乳腺癌患者新輔助化療療效比較

Table 3 Comparison of effect of neoadjuvant chemotherapy between different expression of CDK5RAP2 in breast cancer patients with different molecular subtypes

CDK5RAP2表達例數(shù)pCRcCRPRSDZ值P值LuminalA-0.6610.508 陰性4002/42/4 陽性3303(9.2)18(54.4)12(36.4)LuminalB-3.1520.002 陰性152/157/154/152/15 陽性652(3.1)5(7.7)42(64.6)16(24.6)Her-2陽性-2.6980.007 陰性54/501/50 陽性374(10.8)6(16.2)19(51.4)8(21.6)基底樣-1.0100.398 陰性142/141/148/143/14 陽性184/181/1812/181/18

3 討論

細(xì)胞進行有絲分裂時，首先是染色體發(fā)生凝聚，在動粒區(qū)域形成更致密的結(jié)構(gòu)。當(dāng)在著絲粒上動粒完成了組裝，中心體發(fā)出的微管形成雙極紡錘體，在相關(guān)的周期蛋白依賴性激酶(如CDKs)調(diào)控下，雙極紡錘體可與動粒相連接[7]。早期研究表明，中心體及其相關(guān)調(diào)控蛋白在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用[8]。以CDK1為例，BENADA等[9]研究表明，CDK1可介導(dǎo)PLK1與DNA損傷修復(fù)因子的相互作用?；A(chǔ)研究及臨床試驗證實，CDK抑制劑對惡性腫瘤的生長存在抑制作用[10-11]。在乳腺正常腺體組織中，CDK5RAP2不表達或者低表達，而在導(dǎo)管原位癌及浸潤性癌中均高表達，提示CDK5RAP2的表達在乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用[4]。本研究發(fā)現(xiàn)，19.9%的患者CDK5RAP2表達陰性，而CDK5RAP2表達陽性的患者占80.1%，CDK5RAP2表達情況與新輔助化療療效密切相關(guān)。

目前，乳腺癌的4種分子亞型(Luminal A、Luminal B、Her-2陽性型和基底樣)是基于基因表達譜的分子分型，眾多研究表明，該分子分型可有效預(yù)測乳腺癌的預(yù)后以及治療效果[12-13]。2011年，St.Gallen會議達成共識，認(rèn)為采用新輔助化療達到pCR的患者其預(yù)后明顯改善[14]。本研究通過分析191例接受6個周期新輔助化療乳腺癌患者的臨床資料，了解CDK5RAP2表達在不同分子分型乳腺癌中療效的預(yù)測作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在Luminal B型乳腺癌及Her-2陽性乳腺癌患者中，CDK5RAP2表達與新輔助化療療效相關(guān)，CDK5RAP2表達與Luminal A型、基底樣乳腺癌患者新輔助化療療效無關(guān)。

綜上所述，本研究證實了CDK5RAP2表達對新輔助化療的療效具有一定的預(yù)測作用，其預(yù)測作用主要是針對Luminal B型乳腺癌及Her-2陽性乳腺癌。本研究未對CDK5RAP2不同陽性表達強度患者的療效進行評估，未來需進一步比較CDK5RAP2不同陽性表達強度患者新輔助化療療效及預(yù)后的差異。

作者貢獻：錢鈞強進行課題設(shè)計與實施、資料收集整理、質(zhì)量控制、成文并對文章負(fù)責(zé)；張霄蓓進行課題設(shè)計與實施、評估、資料收集整理。

本文無利益沖突。

[1]GONCZY P.Centrosomes and cancer:revisiting a long-standing relationship [J].Nat Rev Cancer,2015,15(11):639-652.

[2]WOODS C G,BOND J,ENARD W.Autosomal recessive primary microcephaly(MCPH):a review of clinical,molecular,and evolutionary findings[J].Am J Hum Genet,2005,76(5):717-728.

[3]FONG K W,CHOI Y K,RATTNER J B,et al.CDK5RAP2 is a pericentriolar protein that functions in centrosomal attachment of the gamma-tubulin ring complex[J].Mol Biol Cell,2008,19(1):115-125.

[4]張彤雯.中心體相關(guān)蛋白CDK5RAP2在乳腺癌前病變及癌變中表達的研究[D].天津：南開大學(xué)，2007. ZHANG T W.Study on the expression of centrosome associated protein CDK5RAP2 in premalignant and malignant lesions in breast cancer[D].Tianjin：Nankai University,2007.

[5]GOLDHIRSCH A,WINER E P,COATES A S,et al.Personalizing the treatment of women with early breast cancer:highlights of the St Gallen International Expert Consensus on the Primary Therapy of Early Breast Cancer 2013[J].Ann Oncol,2013,24(9):2206-2223.

[6]EISENHAUER E A,THERASSE P,BOGAERTS J,et al.New response evaluation criteria in solid tumours:revised RECIST guideline(version 1.1)[J].Eur J Cancer,2009,45(2):228-247.

[7]ROESLEY S N,SURYADINATA R,MORRISH E,et al.Cyclin-dependent kinase-mediated phosphorylation of breast cancer metastasis suppressor 1(BRMS1) affects cell migration[J].Cell Cycle,2016,15(1):137-151.

[8]BUCKLEY M F,SWEENEY K J,HAMILTON J A,et al.Expression and amplification of cyclin genes in human breast cancer[J].Oncogene,1993,8(8):2127-2133.

[9]BENADA J,BURDOVK,LIDAK T,et al.Polo-like kinase 1 inhibits DNA damage response during mitosis[J].Cell Cycle,2015,14(2):219-231.

[10]JABBOUR-LEUNG N A,CHEN X,BUI T,et al.Sequential combination therapy of CDK inhibition and doxorubicin is synthetically lethal in p53-mutant triple-negative breast cancer[J].Mol Cancer Ther,2016,15(4):593-607.

[11]VIDULA N，RUGO H S.Cyclin-dependent kinase 4/6 inhibitors for the treatment of breast cancer:a review of preclinical and clinical data[J].Clin Breast Cancer,2016,16(1):8-17.

[12]S?RLIE T.Molecular portraits of breast cancer:tumour subtypes as distinct disease entities[J].Eur J Cancer,2004,40(18):2667-2675.

[13]BRENTON J D,CAREY L A,AHMED A A,et al.Molecular classification and molecular forecasting of breast cancer:ready for clinical application?[J].J Clin Oncol,2005,23(29):7350-7360.

[14]GOLDHIRSCH A,WOOD W C,COATES A S,et al.Strategies for subtypes-dealing with the diversity of breast cancer:highlights of the St.Gallen International Expert Consensus on the Primary Therapy of Early Breast Cancer 2011 [J].Ann Oncol,2011,22(8):1736-1747.

(本文編輯：吳立波)

Correlation between CDK5RAP2 Expression and Effect of Neoadjuvant Chemotherapy in Breast Cancer

QIANJun-qiang,ZHANGXiao-bei.

TianjinMedicalUniversityCancerInstituteandHospital,NationalClinicalResearchCenterforCancer，KeyLaboratoryofCancerPreventionandTherapyofTianjin,Tianjin300060,China

Correspondingauthor：QIANJun-qiang,TianjinMedicalUniversityCancerInstituteandHospital,NationalClinicalResearchCenterforCancer，KeyLaboratoryofCancerPreventionandTherapyofTianjin,Tianjin300060,China；E-mail：qianjunqiang@163.com

Objective To detect the CDK5RAP2 expression in breast cancer before neoadjuvant chemotherapy(NAC),and analyze its value in evaluating the effect of NAC.Methods 191 patients with primary invasive breast in Department of Breast Surgery，Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital in 2014 were selected.The clinical and pathological data were collected,including age,family history of cancer,menopausal status,tumor diameter,lymph node metastasis,clinical stage,and molecular type.Breast cancer tissue specimens were needle aspirated and the expression of CDK5RAP2 was determined by immunohistochemistry.After 6 cycles of TEC NAC,patients accepted radical mastectomy or breast-conserving surgery.The chemotherapy effect was preoperatively evaluated.Results In patients,18 cases(9.4%) got pCR,23 cases(12.1%) got cCR,106 cases(55.5%) got PR and 44 cases(23.0%) got SD.There were statistically significant difference in the efficacy of NAC among patients with different tumor diameter and molecular type(P<0.05).CDK5RAP2 expression was negative in 38 patients(19.9%) and positive in 153 patients(80.1%).There was statistically significant difference in the efficacy of NAC among patients between different CDK5RAP2 expression(P<0.05).There were no statistically significant difference in the efficacy of NAC between different CDK5RAP2 expression among Luminal A,basal-like breast cancer patients(P>0.05).There were statistically significant difference in the efficacy of NAC between different CDK5RAP2 expression among Luminal B,Her-2 positive breast cancer patients(P<0.05).Conclusion The expression of CDK5RAP2 could predict the efficacy of NAC in breast cancer,especially in Luminal B and Her-2 positive breast cancer.

Breast neoplasms；Cyclin-dependent kinase 5；Neoadjuvant chemotherapy；Treatment outcome

300060天津市，天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院，國家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津市“腫瘤防治”重點實驗室

錢鈞強，300060天津市，天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院，國家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津市“腫瘤防治”重點實驗室；E-mail:qianjunqiang@163.com

R 737.9

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2016.35.011

2016-02-29；

2016-09-28)