張 偉，于云政，劉 潔，王英姿*

(1. 山東省煙臺(tái)市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東 煙臺(tái) 265500； 2. 山東省棲霞市桃村鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站，山東 棲霞 265301)

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生物藥劑對(duì)花生葉斑病的防治研究

張 偉1，于云政2，劉 潔1，王英姿1*

(1. 山東省煙臺(tái)市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東 煙臺(tái) 265500； 2. 山東省棲霞市桃村鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站，山東 棲霞 265301)

為了花生葉斑病防治篩選出安全、高效的生物藥劑，經(jīng)室內(nèi)外試驗(yàn)測(cè)定了7種生物殺菌劑對(duì)花生葉斑病的毒力和藥效。丁子香酚、申嗪霉素對(duì)花生褐斑、黑斑、網(wǎng)斑病菌菌絲生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用，其EC50值均小于1 mg/L，明顯低于生產(chǎn)上常用化學(xué)藥劑多菌靈的EC50值。1%申嗪霉素懸浮劑 600、800、1000倍的田間防效均在80%以上，優(yōu)于對(duì)照藥劑多菌靈的防效。3%多抗霉素可濕性粉劑 600倍、80%乙蒜素乳油 1000倍防效達(dá)到45%，與對(duì)照藥劑防效相當(dāng)。1%申嗪霉素懸浮劑、3%多抗霉素可濕性粉劑、80%乙蒜素乳油是防治花生葉斑病的有效生物殺菌劑。

花生葉斑?。簧锼巹?；毒力測(cè)定；田間防效

花生是我國(guó)重要油料作物之一，對(duì)保障食用油安全供給意義重大。我國(guó)是全球花生貿(mào)易四大出口國(guó)之一，花生是我國(guó)具有較強(qiáng)國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力的農(nóng)產(chǎn)品。葉斑病是花生上發(fā)生最為普遍、最為嚴(yán)重、對(duì)產(chǎn)量影響最大的病害。葉斑病包括褐斑病、黑斑病和網(wǎng)斑病，其共同特征是在葉片上產(chǎn)生病斑，造成葉片枯死、脫落，影響花生光合作用，嚴(yán)重時(shí)發(fā)展至葉柄和莖稈。輪作地發(fā)病輕，連作地發(fā)病重；重茬年限越長(zhǎng)，發(fā)病越重，未到收獲季節(jié)時(shí)，葉片脫落，常被誤認(rèn)為花生成熟。葉斑病通常致花生減產(chǎn)10%～20%，嚴(yán)重地塊可減產(chǎn)50%以上，是影響花生高產(chǎn)的重要因素之一[1-2]。目前防治花生葉斑病仍以化學(xué)防治為主，但大量化學(xué)農(nóng)藥的不合理使用導(dǎo)致了農(nóng)田生態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞、防治對(duì)象的抗藥性、農(nóng)藥殘留等諸多副作用。因此，具有低毒、低殘留、環(huán)境友好型的生物源農(nóng)藥逐漸受到農(nóng)藥界的重視與青睞。

許多生物源農(nóng)藥已得到研究與應(yīng)用?？鄥A對(duì)蚜蟲(chóng)、螨類(lèi)、粉虱、菜青蟲(chóng)、林木病原菌等具有殺蟲(chóng)與抑菌作用[3-4]；與化學(xué)藥劑輪換使用的小檗堿防治萵苣霜霉病具有良好效果[5]，且對(duì)西瓜、南瓜白粉病有很好的防治效果[6-7]；丁子香酚對(duì)人參銹腐病、辣椒疫病、蘋(píng)果輪紋病、葡萄霜霉病有良好的抑菌效果[8-11]；多抗霉素對(duì)葡萄穗軸褐枯病、黑痘病、灰霉病及黃瓜白粉病等病害具有顯著防效[12-13]；寧南霉素防治水稻立枯病、煙草花葉病毒有很好的治療作用[14-15]；乙蒜素對(duì)核桃潰瘍病、黃瓜細(xì)菌性角斑病有較好的防治效果[16-17]；申嗪霉素對(duì)油菜菌核病菌有良好的活性[18]，與化學(xué)藥劑混配對(duì)小麥赤霉病有較好的協(xié)同殺菌作用[19]。但上述苦參堿、丁子香酚等7種生物源農(nóng)藥對(duì)花生葉斑病的室內(nèi)毒力和田間防效評(píng)價(jià)仍未見(jiàn)研究。本文采用不同生物藥劑于2014-2015年開(kāi)展了生物源農(nóng)藥的室內(nèi)外試驗(yàn)，以期篩選出防治花生葉斑病的高效、低毒、低殘留生物源農(nóng)藥。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

生物殺菌劑：1%申嗪霉素懸浮劑(SC)，上海農(nóng)樂(lè)生物制品股份有限公司產(chǎn)品；3%多抗霉素可濕性粉劑(WP)，吉林省延邊春雷生物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；0.3%丁子香酚可溶液劑(SL)，山東省億嘉農(nóng)化有限公司產(chǎn)品；80%乙蒜素乳油(EC)，天津市漢邦植物保護(hù)劑有限責(zé)任公司產(chǎn)品；1.5%苦參堿水劑(AS)，成都新朝陽(yáng)作物科學(xué)有限公司產(chǎn)品；8%寧南霉素水劑(AS)，德強(qiáng)生物股份有限公司產(chǎn)品；0.5%小檗堿水劑(AS)，浙江華京生物科技開(kāi)發(fā)有限公司產(chǎn)品。對(duì)照藥劑：500 g/L多菌靈懸浮劑(SC)，江蘇龍燈化學(xué)有限公司產(chǎn)品。

1.2 室內(nèi)毒力測(cè)定

1.2.1 菌株分離與保存 花生褐斑、黑斑病菌為煙臺(tái)市農(nóng)科院田間采集典型樣本并室內(nèi)分離保存的菌株；花生網(wǎng)斑病菌由沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院植物病理學(xué)教研室贈(zèng)予。

1.2.2 室內(nèi)藥劑配制 將1%申嗪霉素SC稀釋為100、25、6.25、1.5625、0.390625 mg/L；0.3%丁子香酚SL濃度稀釋為30、7.5、1.875、0.46875、0.01171875 mg/L；3%多抗霉素WP、1.5%苦參堿AS、0.5%小檗堿AS、80%乙蒜素EC稀釋為300、75、18.75、4.6875、1.171875 mg/L；8%寧南霉素AS稀釋為1600、400、100、25、6.25、1.5625 mg/L；500g/L多菌靈SC稀釋為20、10、5、2.5、1.25 mg/L。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)方法 將含藥的PDA培養(yǎng)基倒入直徑為90 mm的培養(yǎng)皿中，以不加藥劑的PDA平板為空白對(duì)照，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)重復(fù)。在平板中央接入直徑6 mm的病原菌活化菌餅，置于26 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)至對(duì)照菌絲近長(zhǎng)滿平板時(shí)，采用十字交叉法測(cè)定菌絲塊的生長(zhǎng)直徑。根據(jù)藥劑濃度對(duì)數(shù)(橫坐標(biāo))及對(duì)應(yīng)的菌絲生長(zhǎng)抑制率概率值(縱坐標(biāo))作回歸分析，求出毒力回歸方程y=a+bx，相關(guān)系數(shù)r，藥劑抑制中濃度EC50。

1.3 田間藥效試驗(yàn)

1.3.1 試驗(yàn)地點(diǎn)及概況 2014年設(shè)在牟平區(qū)玉林店鎮(zhèn)，品種為花育22號(hào)；2015年設(shè)在煙臺(tái)農(nóng)科院高陵試驗(yàn)農(nóng)場(chǎng)，品種為魯花11。試驗(yàn)地砂壤土質(zhì)，肥水良好，管理水平較高，采用覆膜栽培，壟距85 cm，一壟雙行，行距35 cm，株距16 cm，每穴2粒。試驗(yàn)期間為花生盛花期至結(jié)果期。

1.3.2 試驗(yàn)方法 每個(gè)處理重復(fù)3次，隨機(jī)區(qū)組排列。7月上中旬開(kāi)始施藥，間隔10～15 d施藥一次，連續(xù)噴施4次，正反面葉面噴霧至藥液滴下，每次藥液濃度相同。

1.3.3 防治效果調(diào)查 施藥前觀察葉斑病發(fā)生情況，末次施藥后15 d調(diào)查防治效果。每小區(qū)對(duì)角線5點(diǎn)取樣調(diào)查，每點(diǎn)4株，每株調(diào)查全部葉片，以每片葉上病斑面積占整個(gè)葉面積的百分率分級(jí)。分級(jí)方法：0級(jí)：無(wú)病；1級(jí)：病斑面積占整片葉面積的5%以下；3級(jí)：病斑面積占整片葉面積的6%～25%；5級(jí)：病斑面積占整片葉面積的26%～50%；7級(jí)：病斑面積占整片葉面積的51%～75%；9級(jí)：病斑面積占整片葉面積的76%以上[20]。病情指數(shù)和防治效果計(jì)算公式為：

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)毒力測(cè)定

表1表明，丁子香酚、申嗪霉素對(duì)3種病菌的抑制效果最好，EC50值均小于1 mg/L；其次為多抗霉素和乙蒜素，多抗霉素對(duì)花生褐斑、黑斑、網(wǎng)斑病菌的EC50值分別為13.3039 mg/L、5.2840 mg/L、37.0567 mg/L，乙蒜素對(duì)花生褐斑、黑斑、網(wǎng)斑病菌的EC50值分別為15.4243 mg/L、9.8344 mg/L、42.2784 mg/L，常用500 g/L多菌靈SC為對(duì)照，其對(duì)花生褐斑、黑斑、網(wǎng)斑病菌的EC50值分別為8.0068 mg/L、11.4025 mg/L、4.9070 mg/L，多抗霉素和乙蒜素對(duì)褐斑病菌的EC50值是對(duì)照藥劑EC50值的1.66倍、1.92倍，多抗霉素和乙蒜素對(duì)網(wǎng)斑病菌的EC50值是對(duì)照藥劑EC50值的7.55倍、8.62倍，而對(duì)照藥劑的EC50值對(duì)黑斑病菌的EC50值是多抗霉素和乙蒜素EC50值的2.16倍、1.16倍；小檗堿、苦參堿、寧南霉素的EC50值均遠(yuǎn)高于對(duì)照。綜合各殺菌劑的EC50值，0.3%丁子香酚SL和1%申嗪霉素SC對(duì)花生葉斑病菌生長(zhǎng)的抑制作用最強(qiáng)，3%多抗霉素WP、80%乙蒜素EC次之，1.5%苦參堿AS、0.5%小檗堿AS、8%寧南霉素AS最弱。

表 1 不同殺菌劑防治花生葉斑病病菌的室內(nèi)抑菌活性測(cè)定結(jié)果

2.2 田間藥效試驗(yàn)結(jié)果

1%申嗪霉素SC對(duì)花生葉斑病具有較好的防效(表2)，兩年防效均達(dá)到80%以上，5%水平上顯著優(yōu)于對(duì)照藥劑500 g/L多菌靈SC防效；3%多抗霉素WP和80%乙蒜素EC防效相當(dāng)，二者最高濃度防效5%水平上與對(duì)照化學(xué)藥劑防效無(wú)顯著差異；其他生物藥劑各濃度防效均顯著低于常用化學(xué)藥劑。田間觀察，各藥劑處理皆未出現(xiàn)藥害；申嗪霉素三處理葉片明顯較對(duì)照藥劑多菌靈濃綠、落葉少。因此，1%申嗪霉素SC、80%乙蒜素EC和3%多抗霉素WP對(duì)花生安全、優(yōu)于或相當(dāng)于常用化學(xué)農(nóng)藥，可作為防控花生葉斑病的有效藥劑使用，或與化學(xué)藥劑交替輪換使用。

表 2 生物藥劑對(duì)花生葉斑病防治效果比較

注：表中同列數(shù)據(jù)后相同字母表示經(jīng)DMRT檢驗(yàn)差異不顯著 (p=0.05)。

Note: Same letters after the data in the same column of the table indicate the difference is insignificant by DMRT test under the possibility level of 0.05.

3 討論與結(jié)論

花生葉斑病在我國(guó)普遍嚴(yán)重發(fā)生。目前，生產(chǎn)上用于防治花生葉斑病的藥劑以多菌靈為主，由于長(zhǎng)期單一使用該藥劑，已導(dǎo)致部分病原菌產(chǎn)生抗藥性[21]。用生物源制劑防治植物病害，是農(nóng)藥研究的一個(gè)熱點(diǎn)，也是實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的一個(gè)重要環(huán)節(jié)[22-23]。

多抗霉素對(duì)花生葉斑病病菌的EC50值位于5.2840～37.0567 mg/L范圍內(nèi)，田間防治效果與常規(guī)藥劑相當(dāng)，該藥劑也在葡萄、蘋(píng)果、黃瓜等作物上具有良好抑制和防治效果[10,12-13]。

作為植物源農(nóng)藥的丁子香酚對(duì)三種花生葉斑病菌表現(xiàn)出良好的室內(nèi)抑制作用，丁子香酚對(duì)其他病原菌表現(xiàn)出同等的抑制效果，林述平等確定丁子香酚對(duì)辣椒疫霉病菌的EC50值為0.0851 mg/L[24]，楊泓威等明確丁子香酚對(duì)黃瓜疫霉病菌和稻瘟病菌的EC50值分別為0.6223 mg/L和0.4697 mg/L[25]，這些研究結(jié)論表明丁子香酚對(duì)不同屬的真菌生長(zhǎng)均有良好的抑制效果。在田間表現(xiàn)出的防效不如對(duì)照藥劑多菌靈的防效，也遠(yuǎn)低于生物藥劑申嗪霉素的防效，這可能與丁子香酚的作用機(jī)理、天氣情況、田間環(huán)境有關(guān)，還需進(jìn)一步試驗(yàn)研究，但丁子香酚對(duì)馬鈴薯晚疫病[26]、辣椒疫病[8]等病害表現(xiàn)出良好的防效。

申嗪霉素是由熒光假單胞菌M18發(fā)酵出來(lái)的微生物產(chǎn)物，主要有效成分是吩嗪-1-羧酸，室內(nèi)外均對(duì)花生葉斑病表現(xiàn)出良好抑制效果和防效。申嗪霉素對(duì)其他作物病害表現(xiàn)出良好效果，鄭文君等報(bào)道申嗪霉素對(duì)51個(gè)油菜菌核病病菌生長(zhǎng)的平均EC50值為3.31±0.77 mg/L，田間防效可達(dá)83.2%，優(yōu)于化學(xué)藥劑異菌脲[18]；對(duì)水稻紋枯病的EC50和防治效果分別為0.08 mg/L和81.23%以上[27]。

乙蒜素是一種植物仿生農(nóng)藥，可抑制花生葉斑病致病菌生長(zhǎng)和田間控制病害發(fā)展，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。據(jù)報(bào)道，乙蒜素對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病[17]、水稻穗頸瘟[28]等病害均表現(xiàn)出良好的防效。

研究表明，3%多抗霉素WP、1%申嗪霉素SC、80%乙蒜素EC可與化學(xué)藥劑交替輪換使用，在發(fā)病前或發(fā)病初期防控花生葉斑病。

致謝：本研究獲沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院植物病理學(xué)教研室傅俊范教授、周如軍副教授惠贈(zèng)花生網(wǎng)斑病菌菌株及承蒙指導(dǎo)，在此表示誠(chéng)摯感謝！

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The Research of Biological Agents on Control Effects against Peanut Leaf Spot

ZHANG Wei1, YU Yun-zheng2, LIU Jie1, WANG Ying-zi1*

(1.YantaiAcademyofAgriculturalSciences,Yantai265500,China; 2.TaocunAgriculturalTechnologyPromotionStationofQixia,Qixia265301,China)

To screen safe and efficient fungicides to control peanut leaf spot, the toxicity and efficacy of 7 biological fungicides were researched based on the toxicity tests and field trials. The EC50values of 0.3% eugenol and 1% phenazino-1-carboxylic acid againstCercosporaarachidicola,CercosporapersonataandPhomaarachidicolawere less than 1mg/L, significantly lower than the production of commonly used chemical agent carbendazim EC50values. The control efficacy of 1% phenazino-1-carboxylic acid 600×, 800×, 1000× were all above 80%, much better than the carbendazim (CK) in field during 2014 and 2015. The control effect of 3% polyoxin WP 600× and 80% ethylicin EC 1000× was both above 45%, almost equal to the effect of carbendazim. The test result showed: 1% phenazino-1-carboxylic acid SC, 3% polyoxin WP and 80% ethylicin EC could be used as effective fungicides to control peanut leaf spot.

peanut leaf spot; biological fungicide; toxicity test; field efficacy

10.14001/j.issn.1002-4093.2016.02.012

2016-03-30

煙臺(tái)市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014NC107)；山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系花生產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)病蟲(chóng)防控崗位(SDAIT-05-022-07)

張偉(1979-)，女，山東龍口人，山東省煙臺(tái)市農(nóng)科院植保所高級(jí)農(nóng)藝師，碩士，主要從事植物保護(hù)研究。

*通訊作者：王英姿(1962-)，女，研究員，主要從事植物保護(hù)研究。E-mail: ytnkyzbs@126.com

S435.652; S482.2+92

A