蔡智慧，梁義娟，李瑞，王敬，楊媛媛，馬曉慧

（1.河北大學(xué)附屬醫(yī)院婦科，河北 保定 071000；2.河北省望都縣醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 保定 071000）

論著

女性不孕癥患者血清及宮頸黏液中自身抗體檢測(cè)對(duì)病情的評(píng)估價(jià)值

蔡智慧1，梁義娟1，李瑞1，王敬1，楊媛媛1，馬曉慧2

（1.河北大學(xué)附屬醫(yī)院婦科，河北 保定 071000；2.河北省望都縣醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 保定 071000）

目的分析女性不孕癥患者血清及宮頸黏液中自身抗體檢測(cè)對(duì)病情的評(píng)估價(jià)值。方法選取2012年7月-2014年7月間至該院接受檢查的女性不孕患者138例作為觀察組對(duì)象。另取同期在該院因?qū)m頸炎癥接受檢查的已育女性106例作為對(duì)照組。比較兩組研究對(duì)象的血清及宮頸黏液自身抗體水平、外周血調(diào)解性T細(xì)胞（Treg）水平，進(jìn)一步分析觀察組患者中自身抗體與Treg水平的相關(guān)性。結(jié)果①觀察組患者的血清及宮頸黏液中抗精子抗體（AsAb）、抗卵巢抗體（AoAb）、抗人絨毛膜促性腺激素（AhCGAb）、抗子宮內(nèi)膜抗體（EMAb）、甲狀腺自身抗體（ATA）、抗-β-2糖蛋白1抗體（α-β-2GP1）水平高于對(duì)照組女性（P＜0.05）；②觀察組患者的外周血Treg水平低于對(duì)照組（P＜0.05）；③不孕癥女性血清及宮頸黏液中的AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1等自身抗體水平與外周血Treg水平呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論女性不孕癥患者血清及宮頸黏液中自身抗體水平大幅上升，與患者的疾病發(fā)生發(fā)展以及病情嚴(yán)重程度均關(guān)系密切，是臨床診斷及指導(dǎo)治療的理想指標(biāo)。

不孕癥；自身抗體；調(diào)解性T細(xì)胞

不孕癥的臨床發(fā)病率不低，其中女性不孕癥占50%以上，發(fā)生原因至今仍未完全明了，主要包括炎癥、組織損傷、自身免疫等等，其中自身免疫學(xué)說(shuō)被較多學(xué)者認(rèn)可。研究認(rèn)為女性不孕癥患者體內(nèi)生殖相關(guān)抗體大量產(chǎn)生，通過與針對(duì)性抗原形成復(fù)合物導(dǎo)致性器官的病理?yè)p傷，最終導(dǎo)致受精卵形成、受精卵著床、胚胎生長(zhǎng)等受阻。本次研究主要分析女性不孕癥患者血清及宮頸黏液中自身抗體檢測(cè)對(duì)病情的評(píng)估價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年7月-2014年7月于河北大學(xué)附屬醫(yī)院接受檢查的女性不孕患者138例作為觀察組對(duì)象。另取同期在本院因?qū)m頸炎癥接受檢查的已育女性106例作為對(duì)照組。均抽取外周靜脈血及宮頸黏液。觀察組患者年齡28～38歲，平均（32.18± 4.66）歲；對(duì)照組女性年齡27～38歲，平均（31.79± 4.35）歲。本次研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象在了解研究過程后均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 抗體檢測(cè)標(biāo)本采集抽取所有研究對(duì)象肘靜脈血5 ml，經(jīng)3 000 r/min離心后取上清液；用窺陰器暴露宮頸后，采用棉簽擦拭宮頸管內(nèi)約0.5 cm吸取宮頸黏液，隨后置入試管內(nèi)送檢。

1.2.2 自身抗體檢測(cè)采用抗體定性試劑盒檢測(cè)所有研究對(duì)象血清及宮頸黏液中的自身抗體水平，具體包括：抗精子抗體（anti-sperm antibodies，AsAb）、抗卵巢抗體（anti-ovarian antibodies，AoAb）、抗人絨毛膜促性腺激素（anti-human chorionic gonadotropin antibodies，AhCGAb）、抗子宮內(nèi)膜抗體（endometrial antibody，EMAb），甲狀腺自身抗體（anti-thyroid autoantibody，ATA），抗-β-2糖蛋白1抗體（anti-β-2 glycoprotein 1 antibodies，α-β-2GP1），所有操作均按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.2.3 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory cells，Treg）檢測(cè)抽取患者外周靜脈血，肝素抗凝后加入抗體，室溫孵育后加入細(xì)胞裂解液，1 000 r/min洗滌5 min后棄上清液，震蕩均勻后采用流式細(xì)胞儀測(cè)定其中Treg水平。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Pearson分析、以相關(guān)系數(shù)r表示組間的相關(guān)性，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清自身抗體水平

觀察組患者的血清AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1水平高于對(duì)照組女性（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組研究對(duì)象的血清自身抗體水平比較（ng/ml，±s）

表1 兩組研究對(duì)象的血清自身抗體水平比較（ng/ml，±s）

組別AsAbAoAbAhCGAbEMAbATAα-β-2GP1觀察組3.26±0.632.71±0.693.46±0.723.15±0.592.67±0.353.15±0.47對(duì)照組0.92±0.071.05±0.121.42±0.210.92±0.091.14±0.150.89±0.11 t值8.247.248.459.636.537.26 P值0.0150.0230.0130.0110.0270.021

2.2 宮頸黏液自身抗體水平

觀察組患者的宮頸黏液AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1水平高于對(duì)照組女性（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組研究對(duì)象的宮頸黏液自身抗體水平（ng/ml，±s）

表2 兩組研究對(duì)象的宮頸黏液自身抗體水平（ng/ml，±s）

組別AsAbAoAbAhCGAbEMAbATAα-β-2GP1觀察組3.82±0.491.92±0.191.91±0.271.76±0.271.82±0.191.76±0.35對(duì)照組1.01±0.090.74±0.081.08±0.180.72±0.081.02±0.131.18±0.21 t值6.385.887.128.368.729.27 P值0.0240.0290.0210.0170.0130.011

2.3 Treg水平

觀察組患者的外周血TREG比例為（3.27± 0.38）%，水平低于對(duì)照組的（8.93±1.21）%（P＜0.05）。見附圖。

2.4 自身抗體與Treg水平相關(guān)性

不孕癥女性血清及宮頸黏液中的AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1等自身抗體水平與外周血TREG水平呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見表3。

附圖兩組患者外周血中Treg比例比較

表3 不孕癥患者的自身抗體與TREG水平的相關(guān)性

3 討論

全球不孕不育癥發(fā)病率呈遞增趨勢(shì)，目前我國(guó)不孕癥患病率約為5%～10%，其中以女方因素導(dǎo)致的不孕不育占50%以上。女性不孕癥的發(fā)生因素較多，包括子宮、輸卵管、卵巢等生育器官因素，炎癥因素，自身免疫因素等。有研究顯示免疫因素導(dǎo)致的女性不孕占12%以上，且有遞增趨勢(shì)，說(shuō)明自身免疫原因已經(jīng)成為造成女性不孕的最主要因素之一。

生殖免疫抗體可以從精子活性、受精卵形成、胚胎著床等多個(gè)環(huán)節(jié)干擾女性生殖過程，嚴(yán)重影響女性生育能力。AsAb是不孕不育患者體內(nèi)最多見的自身抗體，在正常女性中當(dāng)精子進(jìn)入生殖道后，女性生殖道的自身屏障作用可以抑制對(duì)精子抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，故無(wú)AsAb產(chǎn)生。當(dāng)生殖道炎癥、出血等異常情況下，黏膜屏障被破壞，精子與血液接觸后將激發(fā)女性免疫系統(tǒng)而產(chǎn)生AsAb，阻礙精子活力以及受精卵的形成。AoAb可以由卵巢任何一種成分在感染或者手術(shù)等誘因下產(chǎn)生，是卵巢組織的多靶位抗體，其與異常表達(dá)的抗原結(jié)合可以導(dǎo)致卵巢病理?yè)p傷，當(dāng)發(fā)生顆粒細(xì)胞變性壞死、黃體細(xì)胞膽固醇代謝困難時(shí)，可以影響雌孕激素產(chǎn)生，引起強(qiáng)烈的抗生育作用。AhCGAb可以與hCG特異性結(jié)合降低hCG活性及濃度，致使hCG無(wú)法有效支配受精卵著床以及維持妊娠。EMAb是子宮內(nèi)膜異位癥的標(biāo)志性抗體，以子宮內(nèi)膜為靶細(xì)胞，可以導(dǎo)致子宮內(nèi)膜免疫性損傷，最終引發(fā)子宮內(nèi)膜發(fā)育不良、內(nèi)膜細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變，導(dǎo)致受精卵著床困難，患者不孕或者流產(chǎn)概率成倍增加。本次研究對(duì)不孕癥女性及正?？梢陨呐赃M(jìn)行血清及宮頸黏液中上述抗體水平檢測(cè)，結(jié)果顯示，觀察組患者的血清及宮頸黏液中AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb水平明顯高于對(duì)照組女性（P＜0.05），提示不孕癥女性體內(nèi)存在高水平的生殖免疫抗體，與不孕癥的發(fā)生關(guān)系密切。

α-β-2GP1是導(dǎo)致APS的主要抗體，當(dāng)α-β-2GP1與ATA結(jié)合后可以導(dǎo)致血液凝固調(diào)節(jié)發(fā)生障礙，血管內(nèi)血栓形成阻礙胎盤循環(huán)，胎盤功能迅速減低，最終導(dǎo)致流產(chǎn)發(fā)生。ATA普遍存在于育齡期女性中，在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)女性中表達(dá)率大幅增加，是導(dǎo)致不孕、流產(chǎn)及早產(chǎn)等的獨(dú)立危險(xiǎn)因子之一。上述研究檢測(cè)了不孕癥及健康女性的血清及宮頸黏液中上述抗體水平，結(jié)果顯示：觀察組患者的血清及宮頸黏液中ATA、α-β-2GP1水平明顯高于對(duì)照組女性（P＜0.05），提示ATA、α-β-2GP1在女性不孕癥發(fā)生中也發(fā)揮了重要作用，是不孕癥產(chǎn)生的因素之一。

Treg是一類控制體內(nèi)自身免疫反應(yīng)的T細(xì)胞亞群，與各類自身免疫性疾病的發(fā)生均關(guān)系密切。有研究顯示Treg的異常表達(dá)是導(dǎo)致女性不孕癥的一個(gè)重要因素，當(dāng)Treg表達(dá)量降低時(shí)，對(duì)機(jī)體的自身抗體抑制性降低，最終導(dǎo)致自身抗體大量表達(dá)并引起組織病理?yè)p傷，最終導(dǎo)致不孕、流產(chǎn)及早產(chǎn)的發(fā)生。上述研究結(jié)果顯示觀察組患者的外周血Treg水平顯著低于對(duì)照組女性（P＜0.05），提示Treg對(duì)自身免疫反應(yīng)的抑制減弱與不孕癥的發(fā)生關(guān)系密切，也間接證明了自身抗體的表達(dá)量增加及自身免疫反應(yīng)的增強(qiáng)是導(dǎo)致不孕癥發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。在進(jìn)一步對(duì)自身抗體水平與外周血Treg水平進(jìn)行相關(guān)性分析后發(fā)現(xiàn)，不孕癥女性血清及宮頸黏液中的AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1等自身抗體水平與外周血TREG水平呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），提

示自身抗體水平的升高可以直接表明不孕癥患者自身免疫水平的紊亂，且與紊亂程度直接相關(guān)，可以作為判斷病情嚴(yán)重程度以及指導(dǎo)臨床治療的重要指標(biāo)之一。

綜上所述，得出以下結(jié)論：女性不孕癥患者血清及宮頸黏液中自身抗體水平大幅上升，與患者的疾病發(fā)生、發(fā)展以及病情嚴(yán)重程度均關(guān)系密切，是臨床診斷及指導(dǎo)治療的理想指標(biāo)，值得在日后臨床實(shí)踐中推廣應(yīng)用。

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（張蕾 編輯）

Evaluation of autoantibodies in serum and cervical mucus of female infertility patients

Zhi-hui Cai1,Yi-Juan Liang1,Rui Li1,Jing Wang1,Yuan-yuan Yang1,Xiao-hui Ma2
(1.Department of Gynecology,the Affiliated Hospital of Hebei University,Baoding,Hebei 071000, China;2.Department of Gynecology,the People's Hospital of Wangdu County, Baoding,Hebei 071000,China)

Objective To analyze the assessed value of autoantibodies in female infertility patients'serum and cervical mucus.Methods Totally 138 cases of female infertility patients in our hospital between July 2012 and July 2014 were chosen as observation group,at same time 106 cases of female with cervix inflammation were chosen as control group.Serum and cervical mucus levels of autoantibodies and peripheral Treg level were compared between the two groups.The relationships between the autoantibodies with Treg level in the observation group were further analyzed.Results The serum and cervical mucus levels of AsAb,AoAb,AhCGAb,EMAb,ATA and α-β-2GP1 in the observation group were significantly higher than those in the control group(P＜0.05).The peripheral Treg level in the observation group was significantly lower than that in the control group(P＜0.05).In the observation group, serum and cervical mucus levels of AsAb,AoAb,AhCGAb,EMAb,ATA,α-β-2GP1 were inversely related with peripheral blood Treg level(P＜0.05).Conclusions In infertile females,serum and cervical mucus levels of antibodies significant increase,which are closely related to the development and severity of th disease,and are ideal indicators for clinical diagnosis and treatment guidance.

infertility;autoantibody;Treg

R711.6

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.22.008

1005-8982（2016）22-0038-04

2016-02-23

梁義娟，Tel：0312-5981092，15833868558