潘 磊，崔榮崗，趙保輝，李 華，張忠勇，王旭初

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·論 著·

中藥蛤蚧治療非酒精性脂肪肝小鼠的臨床觀察

目的 研究蛤蚧治療非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型小鼠的臨床效果。方法 選取95只清潔劑雄性昆明小鼠建立NAFLD研究模型，抽簽隨機(jī)分為正常組和模型組，正常組25只給予普通飼料喂養(yǎng)，模型組70只給予高脂飼料喂養(yǎng)，持續(xù)喂養(yǎng)6周建立NAFLD模型。模型建立后將模型組中60只抽簽隨機(jī)分為對照組和觀察組各30只，兩組均給予等滲鹽水灌注治療，觀察組加用蛤蚧進(jìn)行喂養(yǎng)，觀察兩組血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)活性以及血脂總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)變化。結(jié)果 實驗小鼠模型成功建立，血脂指標(biāo)與組織切片與對照組比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。治療后觀察組ALT(33.54±4.23)IU/L、AST(205.73±20.84)IU/L較對照組(38.75±5.81)IU/L、(221.68±21.25)IU/L明顯較低，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。血脂指標(biāo)TC(2.82±0.26)mmol/L、TG(1.87±0.36)mmol/L、LDL-C(0.34±0.08)mmol/L較對照組(3.23±0.32)mmol/L、(2.24±0.38)mmol/L、(0.48±0.11)mmol/L明顯較低，HDL-C(1.06±0.35)mmol/L較對照組(0.73±0.42)mmol/L明顯較高，均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 蛤蚧能有效降低AST、ALT活性。

非酒精性脂肪肝；NAFLD小鼠模型；蛤蚧

非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)是指除酒精以外其他因素所致的以彌漫性干細(xì)胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征，主要包括單純脂肪變性、非酒精性脂肪肝炎和肝硬化，目前醫(yī)學(xué)上多采用動物模型進(jìn)行NAFLD的臨床病理和藥物研究[1-3]。我們建立NAFLD小鼠模型，選取中醫(yī)藥物蛤蚧分組開展藥物研究，報告如下。

1 資料與方法

1.1 小鼠模型建立 95只實驗小鼠由我院實驗室喂養(yǎng)，實驗前行常規(guī)健康檢查均為健康小鼠。其中雌性45只，雄性50只；體重25～31(27.2±1.3)g。隨機(jī)分為2組，正常組25只，普通飼料配方：面粉25%，玉米面30%，麩皮15%，魚粉8%，骨粉3%，奶粉2%，豆粕11%，食鹽0.5%，魚肝油0.5%，雞蛋4%；模型組70只，高脂飼料配方：普通飼料80%，豬油16%，膽固醇2%，豬膽鹽2%。均持續(xù)灌胃喂養(yǎng)8周后兩組各隨機(jī)抽取取10只禁食12h后處死，取眼眶血1～2 mL和肝臟切片。

1.2 研究方法 模型組60只抽簽隨機(jī)分為對照組和觀察組，兩組各30只。兩組均給予等滲鹽水灌注治療，觀察組加用蛤蚧喂養(yǎng)。蛤蚧購自藥材市場，通過煮熟切碎加入飼料喂養(yǎng)，10 mg/d，分2次喂養(yǎng)。均持續(xù)灌胃喂養(yǎng)2周后處死。

1.3 觀察指標(biāo) ① 觀察兩組血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)指標(biāo)活性。② 觀察兩組總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)變化。檢測方法：取眼眶血2 mL離心分離血清后冷存，采用ELISA法和自動生化檢測儀嚴(yán)格按說明書操作測定。

2 結(jié) 果

2.1 模型建立成功標(biāo)準(zhǔn) 模型組實驗室血脂指標(biāo)檢測結(jié)果明顯高于正常組，且光鏡下觀察肝臟切片可見肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞中可見大量脂滴和脂質(zhì)堆積等明顯脂肪肝樣病變癥狀，見表1、圖1。

表1 對照組和模型組小鼠實驗前后血脂指標(biāo)比較(±s)

圖1 模型組肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞中可見大量脂滴和脂質(zhì)堆積等明顯脂肪肝樣病變

2.2 兩組AST、ALT活性比較 觀察組治療后AST、ALT指標(biāo)較對照組明顯較低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組AST、ALT指標(biāo)檢測結(jié)果比較(±s)

2.3 兩組血脂指標(biāo)比較 觀察組治療后TC、TG、LDL-C較對照組下降更為明顯，HDL-C較對照組顯著較高，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組血脂相關(guān)指標(biāo)結(jié)果比較(±s)

3 討 論

隨著生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的變化以及體力活動的減少，肥胖、高脂血癥、糖尿病等代謝性疾病患者日趨增多[4]，非酒精性脂肪肝發(fā)病率也隨之增加，且有向年輕群體蔓延的趨勢[5-8]。AST、ALT是反映肝細(xì)胞病變的重要生化指標(biāo)，當(dāng)機(jī)體代謝失衡、肝臟細(xì)胞沉積時引起的肝臟炎癥反應(yīng)會刺激AST、ALT分泌，同時干細(xì)胞攝取過多的游離脂肪酸超過了線粒體的氧化能力，進(jìn)而促進(jìn)脂質(zhì)物合成提高血脂水平[9]。

蛤蚧是中小型的蜥蜴，在動物性中藥中較為珍貴，具有補(bǔ)肺益腎、納氣平喘、助陽益精等功效[10]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)蛤蚧含有較為豐富的膽堿、肌肽、肉堿等成分，而膽堿、肌肽、肉堿具有較強(qiáng)的抗氧化能力，可清除在氧化應(yīng)激過程中使細(xì)胞膜的脂肪酸過度氧化而形成的活性氧自由基以及α-β不飽和醛，能有效抑制肝臟炎癥細(xì)胞因子的釋放、調(diào)節(jié)血壓血脂進(jìn)而達(dá)到保護(hù)肝腎功能、改善脂肪肝炎的作用[11-12]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實，蛤蚧含多種游離氨基酸及Fe、Zn、Cu、Se、Co、Mn等微量元素[13]。其中Fe為血紅蛋白組成部分，缺乏易引起貧血。Cu對超氧化物歧化酶、細(xì)胞色素氧化酶等多種酶的活性有重要影響。Se本身為抗氧化劑，參與谷胱甘肽過氧化物酶的合成，且具有多方面活性，可清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化、保護(hù)心肌、肝臟及抗癌，維持細(xì)胞膜通透性與穩(wěn)定性。Co可促進(jìn)紅細(xì)胞再生、生血作用。蛤蚧具有抗炎、抗應(yīng)激、抗氧化衰老、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用，應(yīng)用于非酒精性脂肪肝小鼠模型可形成肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脅迫機(jī)制，減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激并調(diào)節(jié)小鼠脂代謝，發(fā)揮保肝護(hù)肝作用，對NAFLD具有治療作用[14]。

本次研究結(jié)果表明，觀察組治療后AST(33.54±4.23)IU/L、ALT(205.73±20.84)IU/L與對照組相較明顯較低，血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C等指標(biāo)也明顯改善，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，這和李民等[15]的研究結(jié)論基本相吻合，可見蛤蚧具有較好的治療效果。

綜上所述，通過NAFLD小鼠模型研究，發(fā)現(xiàn)蛤蚧治療非酒精性脂肪肝效果較為顯著，為NAFLD臨床治療的提供參考用藥[16]。

[1] 張忠勇,祁月英,蘇秀海,等.非酒精性脂肪肝治療研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2012,21(8):902-904.

[2] 劉 濤，徐秋玲，趙 巖.非酒精性脂肪肝大鼠腸道黏膜屏障功能的實驗研究[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報,2015,28(11): 1124-1127.

[3] 游云鵬，鄭大東，王 穎，等.左卡尼汀對非酒精性脂肪肝的療效觀察[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報,2015,28(8): 847-849.

[4] 矯樹華; 劉鵬亮; 溫艷惠. 脂肪肝與血脂、血糖、血尿酸及血清鐵蛋白的相關(guān)性分析[J]. 東南國防醫(yī)藥，2015，17(3)：275-277.

[5] 冷 亮,蔣卓勤,紀(jì)桂元,等.抗氧化劑防治非酒精性脂肪肝的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2012,39(3):564-565.

[6] 李博萍,陳依雨,潘競鏘,等.決明子提取物對非酒精性脂肪肝大鼠的護(hù)肝、拮抗胰島素抵抗和抗氧化糖基化作用[J].環(huán)球中醫(yī)藥,2015,35(10):1171-1175.

[7] 王 宇.非酒精性脂肪肝營養(yǎng)干預(yù)的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報,2014,27(1)：99-101.

[8] 張容亮，韋 嘉，陸永萍，等.超聲監(jiān)測非酒精性脂肪肝兔模型的建立[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報,2015,28(1): 28-31.

[9] 劉家奇,邵宛芳,黃業(yè)偉,等.普洱茶(熟茶)茶粉、黑茶茶粉、六堡茶對非酒精性脂肪肝大鼠肝細(xì)胞CYP2E1表達(dá)的影響[J].胃腸病學(xué),2013,18(7):411-415.

[10]蘇劍鋒,江 偉,楊 靜,等.活血降脂保肝湯對非酒精性脂肪肝大鼠肝組織Nrf2、PKB表達(dá)的影響[J].中成藥,2015,37(8):1828-1832.

[11]徐永莉,張月云,黃 勇，等.黑點(diǎn)蛤蚧與紅點(diǎn)蛤蚧治療哮喘小鼠的療效比較[J].四川大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2014,25(2):419-422.

[12]張小兆.蛤蚧六參湯對穩(wěn)定期慢性阻塞性肺疾病的影響[J].中成藥,2014,36(9):1831-1834.

[13]萬 穎,房殿亮,沈 薇,等.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)肝細(xì)胞脂肪沉積及可能機(jī)制[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2012,33(10):1055-1059.

[14]何宗全,章安慶,葉顯道,等.牛磺熊去氧膽酸對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].中國普通外科雜志,2015,24(7):990-995.

[15]李 民,達(dá)坤林,徐建中,等.清脂護(hù)肝方治療非酒精性脂肪肝療效觀察[J].中國美容醫(yī)學(xué),2010,19(z4):23.

[16]王 宇，鄭錦鋒. 非酒精性脂肪肝營養(yǎng)干預(yù)的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報，2014，27(1):99-101.

(本文編輯：齊 名； 英文編輯：王建東)

Clinical observation of medicineTokay in nonalcoholic fatty liver therapy

PAN Lei1, CUI Rong-gang1, ZHAO Bao-hui1,LIHua2,ZHANGZhong-yong1,WANGXu-chu1.

1.HebeiProvinceCangzhouHospitalofIntegratedTraditionalandWesternMedicine,Cangzhou,Hebei061001,China;2.People’sHospitalinHebeiProvinceHejianCity,Cangzhou,HeBei061001,China

Objective To research the clinical effect of tokay on treating nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) of model mice. Methods 95 male cleaner kunming mice were selected to establish the study model of NAFLD, and were randomly divided into normal group and model group. 25 mice of normal group were given normal feed and 70 mice of model group were given a high-fat feed, then they were continuously fed for 6 weeks to build NAFLD model. After the model was established, 60 draw in the model group were randomly divided into control group (30 cases) and observation group (30 cases). The two groups were given isotonic saline infusion treatment, and observation group were added with tokay feeding. Serum alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) activity and lipid acyl of total cholesterol (TC), three glycerin (TG), high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C), low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) of the two groups were observed. Results The experimental mice model was successfully established. Compared with control group, lipid indexes and tissue biopsies of observation group had statistically significant difference. ALT and AST of observation group after treatment were significantly lower than the control group and the difference was statistically significant (P<0.05). Blood lipid index of TC, TG and LDL -C were significantly lower than the control group, HDL-C was significantly higher than the control group, and the difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion Tokay can effectively reduce the activity of AST and ALT.

nonalcoholic fatty liver disease; NAFLD mouse model; tokay

河北省中醫(yī)藥管理局計劃項目(2015290)

1．061001河北滄州，河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院;2. 061001河北滄州，河北省河間市人民醫(yī)院

潘 磊，崔榮崗，趙保輝，等.中藥蛤蚧治療非酒精性脂肪肝小鼠的臨床觀察[J].東南國防醫(yī)藥，2016,18(4):465-467.

R285.6

A

10.3969/j.issn.1672-271X.2016.05.005

2016-01-08；

2016-05-18)