張 敏 林巧芹,2 戴愛玲,3 黃思瓊,3 李曉華,3 楊小燕,3* 王德永,2

（1.龍巖學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院福建龍巖364012；2.福建農(nóng)林大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院福州350002；3.福建省生豬疫病防控工程技術(shù)研究中心福建龍巖364012）

相同免疫程序在豬偽狂犬病陽性場和陰性場免疫效果分析

張 敏1林巧芹1,2戴愛玲1,3黃思瓊1,3李曉華1,3楊小燕1,3*王德永1,2

（1.龍巖學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院福建龍巖364012；2.福建農(nóng)林大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院福州350002；3.福建省生豬疫病防控工程技術(shù)研究中心福建龍巖364012）

為確定豬偽狂犬病常用免疫程序是否在陰性場和陽性場均適宜，分別于豬偽狂犬病陰性場和陽性場選取胎次、日齡、母源抗體水平相近的90頭仔豬進行試驗。兩組采用相同的免疫程序，分別于仔豬2、4、6、8、11、13周齡采血檢測PRV-gB/gE抗體。結(jié)果顯示，偽狂犬病陰性場商品豬2、4、6、8周齡PRV-gB抗體陽性率分別為100%、90%、60%、40%，經(jīng)過2次免疫，陰性場商品豬PRV-gB抗體陽性率上升至100%。偽狂犬病陽性場商品豬2、4、6、8、11、13周齡PRV-gE抗體陽性率分別為72.7%、73.3%、60%、60%、6%、0；PRV-gB抗體陽性率在2、4、6、8周齡均為100%，11周齡下降至60%，13周齡下降至13.3%，與PRV-gE抗體變化趨勢一致。由此可知，豬偽狂犬病常用免疫程序在陰性場取得較好的免疫效果。

豬偽狂犬病免疫程序免疫效果

豬偽狂犬病是一種高熱性、傳染性疾病，主要侵害神經(jīng)系統(tǒng)及生殖系統(tǒng)[1]，國際動物衛(wèi)生組織（OIE）已將其列為二類傳染病[2]。自2011年底起至今，豬偽狂犬病在我國大范圍暴發(fā)，從華北、華中到華東、華南[3]，陰性場紛紛轉(zhuǎn)陽，給生豬養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。在偽狂犬病如此猖獗的大環(huán)境下，為了加大對偽狂犬病的防控力度，普遍采用的免疫程序是三次免疫，即出生1日齡滴鼻1頭份；56～60日齡第一次免疫，肌注2頭份；86～90日齡第二次免疫，肌注2頭份。為了確定該免疫程序是否在陰性場和陽性場均適宜，對該免疫程序在偽狂犬病陰性場和陽性場的免疫效果進行分析，為偽狂犬病防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物母源抗體水平相近的1日齡仔豬各90頭分別來自偽狂犬病陰性豬場N（存欄母豬500頭）和偽狂犬病陽性豬場P（存欄母豬700頭以上）。

1.2 試劑PRV-gE酶聯(lián)免疫試劑盒（IDEXX）、PRV-gB酶聯(lián)免疫試劑盒（IDEXX）購自北京愛德士元亨生物科技有限公司；弱毒活疫苗BarthaK-61株購自上海勃林格殷格翰生物制品有限公司。

1.3 方法陰性場N組和陽性場P組采用相同的免疫程序，即1日齡滴鼻1頭份；56日齡第一次免疫，肌注2頭份；86日齡第二次免疫，肌注2頭份。試驗重復(fù)3次。兩組仔豬分別于2、4、6、8、11、13周齡采血，檢測gE或gB抗體水平。檢測步驟及結(jié)果判定參照試劑盒使用說明書。

2 結(jié)果

2.1 疫苗免疫后陰性場PRV-gB抗體水平陰性場PRV-gB抗體檢測結(jié)果見表1。N組商品豬2、4、6周齡gB抗體陽性率分別為100%、90%、60%，S/N平均值均小于0.6；隨著日齡增加，豬只母源抗體呈現(xiàn)下降趨勢，到8周齡gB抗體陽性率下降到40%，S/N平均值大于0.7。56日齡（8周齡）第一次免疫后，到11周齡gB抗體陽性率上升至66.7%，至第二次免疫后gB抗體陽性率上升至100%。

表1 陰性豬場N組不同日齡豬只PRV-gB抗體水平

2.2 疫苗免疫后陽性場PRV-gB/gE抗體水平陽性場PRV-gB抗體檢測結(jié)果見表2。P組商品豬2、4、6、8周齡gB抗體陽性率均為100%。56日齡（8周齡）第一次免疫后，到11周齡gB抗體陽性率下降至60%，至第二次免疫后gB抗體陽性率下降至13.3%。免疫之后gB抗體陽性率呈現(xiàn)下降趨勢。

表2 陽性豬場P組不同日齡豬只PRV-gB抗體水平

陽性場PRV-gE抗體檢測結(jié)果見表3。P組商品豬2、4、6、8、11、13周齡gE抗體陽性率分別為72.7%、73.3%、60%、60%、6%、0，野毒感染的血清陽性率隨著年齡的增長呈現(xiàn)下降趨勢，野毒抗體水平在13周齡最低。

表3 陽性豬場P組不同日齡豬只PRV-gE抗體情況

2.3 疫苗免疫后PRV-gB/gE抗體水平分析將陰性場PRV-gB、陽性場PRV-gB/gE抗體水平進行比較。由圖1可知，陰性場N商品豬偽狂犬病母源抗體水平較高，隨著豬只日齡增加，母源抗體呈現(xiàn)下降趨勢，到8周齡gB抗體S/N平均值達最高值，經(jīng)過兩次免疫后，S/N平均值逐漸下降。且縱觀整個試驗期間，陰性場gB抗體陽性率較高，S/N平均值較小，

最高也僅接近于判定臨界值，但離散度較大，整齊度稍差。陽性場在第一次免疫前gB抗體陽性率很高，S/N平均值較小。但在免疫之后，gB抗體陽性率呈現(xiàn)下降趨勢，S/N平均值逐漸上升，陽性場免疫未取得良好效果，且gB抗體水平受到gE抗體水平影響，二者變化趨勢一致。

3 討論

免疫接種疫苗是防控和根除豬偽狂犬病的主要手段，商品化豬偽狂犬病疫苗在不同規(guī)模生豬養(yǎng)殖場中廣泛應(yīng)用[4]。除正確選擇有保護力的疫苗之外，合適的免疫程序也是增強豬只自身對感染的抵抗力、阻止病毒激活、降低病毒傳播幾率的關(guān)鍵所在。在偽狂犬病陰性場，首要任務(wù)是提高豬只PRV-gB抗體水平，做好生物安全防控，撲滅偽狂犬病傳染源，阻斷偽狂犬病病毒傳播途徑。而在偽狂犬病陽性場，主要工作在于控制潛伏病毒，避免病毒再度激活。1日齡滴鼻1頭份、56～60日齡第一次免疫（肌注2頭份）、86～90日齡第二次免疫（肌注2頭份）是目前普遍采用的商品豬偽狂犬病免疫程序，但是該免疫程序是否適用于目前偽狂犬病病毒變異且大范圍暴發(fā)的情況，是否對偽狂犬病陰性場和陽性場均有較好的免疫效果，仍然未知。

在本試驗中，陰性場商品豬母源抗體水平在2、4、6周齡分別為100%、90%、60%，S/N平均值均小于0.6，說明在0～6周齡該場商品豬偽狂犬病母源抗體水平較高，對偽狂犬病有較好的免疫保護力，但隨著豬只日齡增加，母源抗體呈現(xiàn)下降趨勢，到8周齡gB抗體陽性率下降到40%，S/N平均值大于0.7，此時進行加強免疫是比較好的時機。56日齡（8周齡）第一次免疫后，到11周齡gB抗體陽性率上升至66.7%，至第二次免疫后gB抗體陽性率上升至100%。說明0～3日齡滴鼻免疫、56～60日齡第一次免疫、86～90日齡第二次免疫這個免疫程序在偽狂犬病陰性豬場能取得較好的免疫效果。

而在陽性場中，商品豬在2、4、6、8、11、13周齡PRV-gE抗體陽性率分別為72.7%、73.3%、60%、 60%、6%、0；野毒感染的血清陽性率隨著年齡的增長而呈現(xiàn)下降趨勢，到13周齡降至0。這符合偽狂犬病循環(huán)感染的特點，即在感染的急性期后有一個潛伏感染期。在潛伏感染期，病毒DNA持續(xù)存在，但不轉(zhuǎn)錄翻譯[5]。豬只終生帶毒，不表現(xiàn)臨床癥狀。另外，陽性場PRV-gB抗體陽性率在0～8周齡均維持在較高水平，未呈現(xiàn)陰性場PRV-gB相似的消長規(guī)律，且在兩次免疫后不升反降，與PRV-gE抗體水平保持平行的消長規(guī)律。該現(xiàn)象一方面可能是由于疫苗株與野毒株產(chǎn)生了某些中和作用，使gB、gE抗體均呈現(xiàn)下降趨勢[6]；另一方面可能是由于陽性場商品豬gB抗體由野毒感染引起，隨著野毒感染陽性率下降，gB抗體陽性率也呈現(xiàn)下降趨勢[7]。另外，可能是偽狂犬病病毒存在，侵害豬只免疫器官，導(dǎo)致豬只免疫抑制，疫苗免疫后機體無法應(yīng)答。該現(xiàn)象在豬瘟病毒、豬圓環(huán)病毒的感染過程中均有報道[8-9]，但在偽狂犬病毒上還未見報道，有待進一研究。

[1]臧素芳.偽狂犬病病毒感染誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細胞動態(tài)學(xué)變化的研究[D].北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2015.

[2]Pomeranz L E,Reynolds A E,Hengartner C J.Molecular biology of pseudorabies virus：impact on neurovirology and veterinary medicine[J].Microbiology and molecular biology reviews,2005,69(3)：462-500.

[3]劉吉山,李峰,姚春陽,等.豬偽狂犬病的流行特點與防控誤區(qū)[J].北方牧業(yè),2015(15)：18-19.

[4]張文通,魏鳳,苗立中,等.國內(nèi)外商品化豬偽狂犬疫苗分類及特點[J].飼料與畜牧：規(guī)模養(yǎng)豬,2015(5)：64-66.

[5]姜焱.偽狂犬病病毒上海株gE-/gI-/GFP+/LacZ+缺失株的構(gòu)建及其免疫原性初步研究[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué), 2002.

[6]邱美珍,李海輝,楊俊,等.豬偽狂犬病陽性場gE與gB抗體監(jiān)測及風(fēng)險評估[J].養(yǎng)豬,2014(6)：124-126.

[7]王慧,邱美珍,楊俊,等.豬偽狂犬病野毒陽性場gE和gB抗體檢測以及與陰性場gB抗體對比分析[J].養(yǎng)豬,2015(5)：94-96.

[8]陳鍇.豬瘟慢性感染對豬免疫功能影響的細胞與分子機制研究[D].雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué),2012.

[9]施開創(chuàng),楊漢春,郭鑫,等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬圓環(huán)病毒2型共感染對豬體內(nèi)病毒動態(tài)及免疫反應(yīng)的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報,2009,40(2)：228-234.

Immunity effect analysis of same immune program in pseudorabies positive pig farm and negative pig farm

Zhang Min1Lin Qiaoqin1,2Dai Ailing1,3Huang Siqiong1,3Li Xiaohua1,3Yang Xiaoyan1,3*Wang Deyong1,2
(1.College of Life Science,Longyan University,Fujian Longyan 364012; 2.College of Animal Science,Fujian Agriculture and Forestry University,Fuzhou 350002; 3.Fujian Engineering Research Center for Swine Disease Control and Prevention,Fujian Longyan 364012)

To understand the immunity effect of same immune program in PRV positive pig farm and negative pig farm,90 piglets which have the same physical state were respectively picked from PRV positive pig farm and PRV negative pig farm to perform the experiment.Both two groups give the same immune program,then PRV-gE or PRV-gB antibodies were detected every two weeks.The results showed that the seropositivity rate of gB antibodies in pseudorabies negative pig farm were 100%,90%,60%and 40%respectively in 2w,4w,6w and 8w,and then rised to 100%after twice immunization.The seropositivity rate of gE antibodies in pseudorabies positive pig farm were 72.7%,73.3%,60%,60%,6%and 0 in 2w,4w,6w,8w,11w and 13w.While the seropositivity rate of gB antibodies were 100%in 2w,4w,6w and 8w,then which decreased to 60%in 11w,and 13.3%in 13w.Within 13 weeks,the gB antibod-

Porcine pseudorabies Immune program Immune effect

A

1003-4331（2016）06-0020-03

福建省科技廳重大專項專題項目（2014NZ01060015）資助。

張敏（1983-），女，講師，博士。

*通信作者：楊小燕（1961-）女，教授。

ies showed the same trend of gE in positive pig farm.In a word,this immune program fitted for PRV negative pig farms.