王衛(wèi)杰,李　惠,王　樂，徐　丹

（開封市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，河南 開封 475000）

飼料添加劑對幼犬睪丸功能相關(guān)酶活性的影響研究

王衛(wèi)杰*,李惠,王樂，徐丹

（開封市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，河南 開封 475000）

觀察飼料添加劑的蓄積對雄性幼犬生殖發(fā)育的影響。選用12只1月齡土犬，隨機(jī)分為試驗組和對照組，試驗組幼犬飼喂正常劑量日糧和高劑量組大鼠鼠肉，正常對照組幼犬飼喂正常劑量日糧和大鼠鼠肉，喂至幼犬成熟，檢測雄性幼犬食用飼料添加劑高劑量組大鼠鼠肉后對其生長、生殖發(fā)育產(chǎn)生影響。檢測幼犬睪丸標(biāo)志酶活性，結(jié)果顯示：試驗組幼犬睪丸組織中酸性磷酸酶ACP和乳酸脫氫酶LDH的酶活性下降，堿性磷酸酶AKP活性未發(fā)生變化。試驗組的酸性磷酸酶和乳酸脫氫酶活性明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。推測飼料添加劑可能通過食物鏈的蓄積影響雄性幼犬的睪丸標(biāo)志酶活性，從而影響雄性幼犬睪丸組織的正常生理功能，進(jìn)一步影響幼犬的生殖功能。

飼料添加劑；犬；睪丸標(biāo)志酶；蓄積

近年來濫用飼料添加劑的危害越來越受到人們的重視。隨著人民生活水平的提高和經(jīng)濟(jì)全球化，人們對畜禽產(chǎn)品的品質(zhì)和安全要求越來越高，高質(zhì)量的畜產(chǎn)品需要有高效安全的飼料作保障，飼料安全已成為動物食品安全的重要環(huán)節(jié)和源頭［1］。飼料添加劑的不當(dāng)或超量使用會對動物產(chǎn)生危害作用，而其在動物產(chǎn)品中的殘留以及蓄積進(jìn)一步對人的健康和環(huán)境產(chǎn)生不良影響。隨著人民生活水平的不斷提高，人們對于食品的安全問題愈加關(guān)注，尤其是動物性食品安全問題。動物飼料是食品中有毒有害物質(zhì)殘留的一個重要來源，飼料添加劑通過畜禽產(chǎn)品帶給人類的隱患將是難以估量的［2-4］。

該試驗通過研究食用飼料添加劑的大鼠鼠肉是否對雄性幼犬的生殖系統(tǒng)及發(fā)育產(chǎn)生影響，通過模擬人類食物鏈試驗，進(jìn)一步為動物飼料添加劑的蓄積對人類生殖系統(tǒng)的影響提供初步試驗依據(jù)，從而推測動物飼料添加劑對生殖發(fā)育的影響。

1　材料與方法

1.1試驗動物

SD雄性大鼠：河南省試驗動物中心購買的26日齡SD雄性大鼠，體質(zhì)量為（85.0±4.5）g。實驗室控制溫度為22～24℃，空氣相對濕度50%～65%，自然采光，自由飲水，環(huán)境安靜。試驗用犬的選擇是3只公犬，10只母犬，均通過農(nóng)村收購，體質(zhì)量為3.5～4.5kg。3只公犬和10只母犬交配，對照組和試驗組均為6只，從交配所生的10窩中選取6窩，每窩選取2只體質(zhì)量相近、發(fā)育良好的幼犬。

1.2飼料添加劑

市售4%仔豬用復(fù)合預(yù)混料配方見表1。

1.3試驗設(shè)計

試驗動物均為體質(zhì)量相近，年齡相近的幼犬12只。隨機(jī)分為試驗組及對照組，每組6只，試驗組從2月齡開始喂養(yǎng)大鼠鼠肉。幼犬每日肉類：0.262×57.3%=0.15kg，試驗大鼠平均重量300.0g，大約需要0.5只；以后每月增加0.5只；對照組飼喂正常犬日糧和正常大鼠鼠肉，試驗組飼喂高劑量組大鼠鼠肉和正常犬日糧，飼喂期為10個月。

表1　復(fù)合預(yù)混料配方

1.4飼養(yǎng)管理

所有試驗犬全部飼養(yǎng)于同一動物舍，單籠飼養(yǎng)，定期沖洗及消毒。預(yù)試期對試驗犬驅(qū)蟲、注射疫苗。采用群飼方式，每天上午8時和下午4時各飼喂1次。觀察犬的生長發(fā)育、排便、采食等健康情況，并記錄各組投料量與剩料量，做好數(shù)據(jù)統(tǒng)計工作。

1.4測定指標(biāo)

1.4.1生長性能指標(biāo)

體質(zhì)量的稱量：在2月齡開始每月第1周周一上午測量1次，連續(xù)測11個月。

1.4.2睪丸組織標(biāo)志酶指標(biāo)

試驗結(jié)束后取雙側(cè)睪丸，用冰冷的生理鹽水漂洗，制成1%的組織勻漿，酸性磷酸酶ACP、堿性磷酸酶AKP和乳酸脫氫酶LDH的活性測定操作按照試劑盒說明進(jìn)行。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理

用SPSS21.0作方差、x2檢驗等統(tǒng)計分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2　結(jié)果與分析

2.1犬體質(zhì)量測定結(jié)果（見表2）

表2　試驗組犬體質(zhì)量變化結(jié)果

由表2可知，試驗組幼犬4個月齡開始其體質(zhì)量明顯增加，具有顯著性差異（P＜0.01）；喂養(yǎng)不同天數(shù)后，試驗組犬體質(zhì)量與對照組相比明顯升高，差異具有顯著性（P＜0.01）。

2.2犬的睪丸組織標(biāo)志酶指標(biāo)結(jié)果

由表3可知，增加食用實驗大鼠鼠肉的劑量，試驗組睪丸組織標(biāo)志酶的變化如下：試驗組酸性磷酸酶ACP、乳酸脫氫酶LDH活性下降，試驗組的堿性磷酸酶AKP活性未發(fā)生明顯變化。與對照組相比，試驗組的ACP、LDH活力明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

表3　試驗中各組犬的睪丸組織標(biāo)志酶指標(biāo)結(jié)果

3　討論

3.1雄性幼犬食用試驗大鼠對其體質(zhì)量的影響

飼料添加劑引起機(jī)體和器官組織的改變，往往在動物體質(zhì)量上反映出來。因此動物體質(zhì)量是機(jī)體改變的重要而敏感的指標(biāo)之一。該試驗結(jié)果顯示，試驗初始幼犬體質(zhì)量沒有出現(xiàn)顯著差異，但試驗組雄性幼犬食用大鼠鼠肉后，試驗組幼犬體質(zhì)量從4月齡開始逐漸增加，試驗組體質(zhì)量增加速度相比對照組較快。這表明飼料添加劑的二次蓄積能夠促進(jìn)雄性幼犬的生長。經(jīng)過試驗，飼料添加劑的殘留或蓄積通過食物鏈顯著提高了雄性幼犬的生長。

3.2雄性幼犬食用試驗大鼠對其睪丸標(biāo)志酶指標(biāo)的影響

雄性生殖細(xì)胞在睪丸組織中的發(fā)育依賴于其生存的穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境、激素以及相關(guān)酶類的調(diào)節(jié)。有研究表明，睪丸組織標(biāo)志酶在精子發(fā)生與成熟過程中起重要作用，比如琥珀酸脫氫酶（SDH）、乳酸脫氫酶（LDH）、酸性磷酸酶（ACP）等。主要分布于生精細(xì)胞的線粒體內(nèi)，是能量代謝的主要參與酶，精子的發(fā)生和成熟與SDH和LDH的活力大小密切相關(guān)［5-7］。

睪丸堿性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）和乳酸脫氫酶（LDH）是睪丸中的幾種標(biāo)志酶，其活性是睪丸機(jī)能正常與否的標(biāo)志，也是維持精子發(fā)生不可缺少的重要條件。LDH主要存在于生精細(xì)胞胞質(zhì)及精子尾中段線粒體上，催化丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸進(jìn)行無氧代謝，其活性與精子生成、精子活動、獲能及受精有關(guān)。筆者在試驗中發(fā)現(xiàn)10月齡幼犬睪丸組織中LDH活性下降，說明睪丸組織細(xì)胞能量代謝作用受到影響，進(jìn)而影響到精子質(zhì)量；ACP由前列腺分泌，主要分布于睪丸支持細(xì)胞的溶酶體內(nèi)，它參與精子代謝并有助于精子活力，其活性受雄激素調(diào)控，它在精液中的含量變化能反應(yīng)前列腺的分泌功能并有助于前列腺疾病的診斷。ACP在性激素誘導(dǎo)下參與蛋白質(zhì)的合成，其活性改變與上皮細(xì)胞的變性有關(guān)，可作為是否有生精障礙的指標(biāo)；筆者的結(jié)果同樣顯示，試驗組酸性磷酸酶活性隨精子密度及活動率減低而下降。

該試驗結(jié)果表明，雄性犬增加食用大鼠鼠肉的劑量，實驗組睪丸組織中LDH、ACP活性隨之下降。睪丸LDH參與能量代謝，該酶受到抑制，將阻礙能量的供給，造成精子活動度降低，良好精子比例下降。這與該研究關(guān)于飼料添加劑對犬精子及生殖器官發(fā)育的影響結(jié)果一致［8-9］。

4　結(jié)論

雄性幼犬食用實驗大鼠瘦肉后睪丸組織中乳酸脫氫酶、酸性磷酸酶活性下降，堿性磷酸酶活性未見明顯變化。說明雄性幼犬食用實驗大鼠后可干擾其部分睪丸標(biāo)志酶的正常反應(yīng)，引起生殖系統(tǒng)的損傷。

［1］唐黎標(biāo).飼料添加劑對畜產(chǎn)品安全的影響及對策［J］.江西飼料，2016，（1）：6-7.

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［3］周文.喹賽多在比格狗中的亞慢性毒性研究［D］.武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011.

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