陳泳珊+周小玲+何潔芙

【摘要】 目的 了解廣東省中山地區(qū)育齡女性中常見(jiàn)非缺失型α-地中海貧血（α-地貧）的基因突變類型及構(gòu)成比。方法 應(yīng)用反向斑點(diǎn)雜交（RDB）技術(shù)和高效液相色譜法（HPLC）對(duì)40000例受檢對(duì)象進(jìn)行非缺失型α-地貧基因分析。結(jié)果 中山地區(qū)育齡婦女非缺失型α-地貧基因總攜帶率為0.41%（165/40000）， 其中異常血紅蛋白QS（HbQS）111例， 發(fā)生率為0.28%， 構(gòu)成比為67.27%；異常血紅蛋白WS（HbWS）30例， 發(fā)生率為0.08%， 構(gòu)成比為18.18%；異常血紅蛋白CS（HbCS）24例， 發(fā)生率為0.06%， 構(gòu)成比為14.55%。結(jié)論 該研究首次闡述了廣東省中山地區(qū)育齡婦女中常見(jiàn)非缺失型α-地貧的分子流行病學(xué)情況， 為本地區(qū)開(kāi)展地貧篩查工作， 降低非缺失型血紅蛋白H（HbH）病患兒出生率， 制定干預(yù)方案提供了重要的科學(xué)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 非缺失型α-地中海貧血；基因；篩查

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.27.081

α-地貧是一組遺傳性血紅蛋白合成障礙性疾病， 其發(fā)病機(jī)制是由于α珠蛋白基因發(fā)生缺失或點(diǎn)突變， 使其編碼的α珠蛋白鏈缺如或不足， 從而引起嚴(yán)重的溶血性貧血[1]?？煞譃槿笔停ㄖ饕淖儺愵愋停┖头侨笔蛢煞N， α珠蛋白基因大片段的缺失可導(dǎo)致缺失型α-地貧的發(fā)生， 而非缺失型α-地貧則是由于α珠蛋白基因或其調(diào)節(jié)序列發(fā)生點(diǎn)突變（包括核苷酸的缺失或插入以及單堿基置換）所致。α-地貧具有高度的遺傳異質(zhì)性， 其分子缺陷具有一定程度的種族特異性。關(guān)于缺失型α-地貧的研究既往的分子流行病學(xué)調(diào)查資料較多， 而對(duì)非缺失型α-地貧則報(bào)道甚少。因血紅蛋白（Hb） Barts水腫胎的致死性， HbH病是臨床上出生后最嚴(yán)重的α-地貧類型， 也分為缺失型和非缺失型兩種， 后者臨床表現(xiàn)更為嚴(yán)重[2]。據(jù)報(bào)道， 在我國(guó)廣西省有45.8%～53.3%的HbH病患者攜帶有非缺失型α-地貧基因[3]。因此在高危人群中篩查非缺失型α-地貧基因攜帶者尤為必要。本研究旨在初步了解中山地區(qū)非缺失型α-地貧的基因突變類型和構(gòu)成比， 以進(jìn)一步提高α-地貧的總檢出率， 為本地區(qū)開(kāi)展地貧篩查工作， 降低非缺失型HbH病患兒出生率， 制定干預(yù)方案提供重要的科學(xué)依據(jù)。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 受檢對(duì)象為2013年7月～2015年7月產(chǎn)前診斷門(mén)診接受咨詢的40000例已婚待孕或已孕婦女， 年齡20～40歲。所有受試者均知情同意。

1. 2 方法 血常規(guī)初篩：使用EDTA抗凝管采集外周靜脈血2～4 ml， 采用五分類全自動(dòng)血常規(guī)分析儀進(jìn)行血細(xì)胞分析， 應(yīng)用血常規(guī)進(jìn)行地貧初篩， 以平均紅細(xì)胞體積（MCV）≤82 fl 和（或）平均紅細(xì)胞血紅蛋白量（MCH）≤27 pg 為篩查陽(yáng)性， 篩查陽(yáng)性者則進(jìn)一步行HPLC檢測(cè)。HPLC：篩查采用HPLC法測(cè)定HbA2和HbF的洗脫峰含量?；蛐丸b定：對(duì)可疑非缺失型α-地貧基因攜帶者進(jìn)行常見(jiàn)非缺失型α-地貧基因檢測(cè)， 主要包括血常規(guī)初篩陽(yáng)性而常見(jiàn)缺失型α-地貧基因未檢出異常者；α-地貧缺失型檢測(cè)為--SEA/αα， 但HPLC提示為HbH病者；血紅蛋白電泳異常；配偶為--SEA/αα攜帶者。采用反向斑點(diǎn)雜交法對(duì)3種非缺失型α-地貧基因（HbCS、HbQS、HbWS）進(jìn)行檢測(cè)， 按DNA提取試劑盒（ 北京天根生化科技有限公司）說(shuō)明提取基因組DNA， 采用基因診斷試劑盒（深圳益生堂生物技術(shù)有限公司）進(jìn)行基因檢測(cè)。診斷采用《血液病診斷與療效標(biāo)準(zhǔn)》中的地貧診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。

2 結(jié)果

40000例參加孕前孕期篩查的育齡婦女中有480例進(jìn)行3種非缺失型α-地貧基因篩查， 共有165例檢出常見(jiàn)非缺失α-地中海貧血基因攜帶， 總攜帶率為0.41%（165/40000）， 其中HbQS 111例（αQS α/αα 105例、-- SEA /αQSα 5例、-α3.7/αQSα 1例）， 發(fā)生率為0.28%， 構(gòu)成比為67.27%；HbWS 30例（αWS α/αα 30例）， 發(fā)生率為0.08%， 構(gòu)成比為18.18%；HbCS 24例 （αCS α/αα 22例、--SEA /αCSα2例）， 發(fā)生率為0.06%， 構(gòu)成比為14.55%。

3 討論

地中海貧血是我國(guó)長(zhǎng)江以南各省發(fā)病率最高的遺傳疾病之一， 尤以廣東、廣西、貴州、四川等省發(fā)病為高[5]?？煞譃棣?地貧、β-地貧、αβ-地貧以及δ-地貧等類型。α-地貧是最主要的地貧類型之一。一份基于全國(guó)90萬(wàn)人的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果得出的總發(fā)病率為2.46%， 其中以廣西省最高， 發(fā)病率為14 .95%， 其次為廣東和江西省， 發(fā)病率分別為4.11%和2.6%[6]。α-地貧分為缺失型和非缺失型兩種。非缺失型α-地貧雖然不是主要的突變類型， 但其所占的比例不容忽視， 且在HbH病中有較高的基因攜帶率[3]。因此對(duì)高危人群進(jìn)行非缺失型α-地貧篩查有著重要的意義。

然而， 3種非缺失型α-地貧基因HbQS 、HbCS以及HbWS 因其不穩(wěn)定性在常規(guī)的血紅蛋白電泳分析中較難準(zhǔn)確檢出， 大多只能通過(guò)基因分析確診， 以致無(wú)法進(jìn)行大樣本人群的篩查， 本次研究對(duì)中山地區(qū)的高危人群開(kāi)展此項(xiàng)檢查， 結(jié)果顯示， 常見(jiàn)的非缺失型α-地貧基因的總攜帶率為0.41%， 這與潘干華等[7]報(bào)道廣東省南海地區(qū)的總攜帶率結(jié)果類似（0.47%）， 但不同的是， 該報(bào)道中僅以MCV<80 fl做為地貧篩查陽(yáng)性表型指征， 對(duì)所有篩查陽(yáng)性樣品同時(shí)進(jìn)行18種中國(guó)人常見(jiàn)及少見(jiàn)β地貧基因型分析、常見(jiàn)缺失型α-地貧基因分析以及常見(jiàn)3種非缺失型α-地貧基因分析。而在本文研究中除了血常規(guī)初篩陽(yáng)性者之外， 其他如α-地貧缺失型檢測(cè)為--SEA /αα， 但HPLC提示為HbH病者；血紅蛋白電泳異常者；配偶為--SEA/αα攜帶者也納入篩查范圍。此外， 在常見(jiàn)3種非缺失型α-地貧HbWS、HbQs、HbCS的攜帶率及構(gòu)成比上， 本研究與潘干華等[7]報(bào)道也不一致， 在本研究結(jié)果中， 三者的攜帶率（構(gòu)成比）依次為0.08%（18.18%）、0.28%（67.27%）、0.06%（14.55%）， 而潘干華等[7]報(bào)道中三者的攜帶率（構(gòu)成比）則依次為0.19%（40.45%）、0.17%（35.39%）、0.11%（24.16%）。黃忠等[8]報(bào)道了廣西橫縣地區(qū)的非缺失型α-地貧基因的總攜帶率為2.14%， 周艷潔等[9]報(bào)道了南寧地區(qū)的非缺失型α-地貧基因的總攜帶率為2.44%， 均顯著高于本研究報(bào)道， 在構(gòu)成比上也有較大差異。這可能與不同的地理和人群， α-地貧基因突變存在差異有關(guān)[10]。

綜上所述， 本研究首次闡述了廣東省中山地區(qū)育齡婦女中常見(jiàn)非缺失型α-地貧的分子流行病學(xué)情況， 為本地區(qū)開(kāi)展地貧篩查工作， 降低非缺失型HbH病患兒出生率， 制定干預(yù)方案提供了重要的科學(xué)依據(jù)， 同時(shí)也為雙方均為α-地貧攜帶者的夫婦提供了更加準(zhǔn)確的遺傳咨詢和優(yōu)生指導(dǎo)。然而本研究的研究結(jié)果仍有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

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[收稿日期：2016-08-03]