蘇志 （河南省信陽市平橋區(qū)畜牧局 464000)

A型產(chǎn)氣莢膜梭菌致仔豬猝死癥的診斷

蘇志 （河南省信陽市平橋區(qū)畜牧局 464000)

通過對病豬病例剖檢和實驗室診斷，確定哺乳仔豬死亡由A型產(chǎn)氣莢膜梭菌感染引起，提出相應(yīng)的綜合防控措施。

A型產(chǎn)氣莢膜梭菌；哺乳仔豬；實驗室診斷

1892年，美國病理學(xué)家W·H·韋爾奇等最早分離到產(chǎn)氣莢膜梭菌，因而又稱韋氏梭菌或魏氏梭菌。該菌廣泛存在于土壤、人和動物的腸道中，其致病性主要是由其產(chǎn)生的外毒素引起的。

在生產(chǎn)中，由魏氏梭菌引起產(chǎn)房仔豬紅痢的案例多有報道，但引起哺乳仔豬猝死的案例尚不多見。近日，通過實驗室診斷工作，確診一例由A型魏氏梭菌病誘發(fā)哺乳仔豬猝死癥的案例，現(xiàn)報告如下。

1 發(fā)病情況

信陽市潢川縣某養(yǎng)豬場，成立于2000年前后，規(guī)模為300頭種豬，年出欄6000頭商品育肥豬左右。于2014年12月22日，向筆者反映，昨晚至今晨8時，產(chǎn)房不同窩中出現(xiàn)急性死亡8頭5～7日齡哺乳仔豬，因為死亡是發(fā)生于夜間，沒有發(fā)現(xiàn)死前癥狀。另在其他窩中發(fā)現(xiàn)4頭精神不振，體溫正常，但腹圍增大、俯臥時四肢向腹部緊緊靠攏的疑似病豬。哺乳母豬臨床表現(xiàn)健康，食欲旺盛，未發(fā)現(xiàn)異常。

2 診斷方法

2.1 病理剖檢

病死豬外表可見腹圍膨大，發(fā)紺，柔軟，小腹部皮下水腫。打開腹腔后，發(fā)現(xiàn)大量腸道內(nèi)容物充滿整個腹腔，腥臭味嚴(yán)重。剖檢消化系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)結(jié)腸處有一處破裂，腸內(nèi)內(nèi)容物均系此處流入腹腔。死亡8頭哺乳仔豬剖檢癥狀均有結(jié)腸破裂這種現(xiàn)象，其他器官未見典型病變。

根據(jù)臨床和剖檢癥狀，無法判斷疾病發(fā)生根本原因。繼續(xù)剖檢臨床上腹圍膨大的活體哺乳仔豬，外表可見輕度消瘦，腹圍增大，精神稍差，神智清醒，打開腹腔后，發(fā)現(xiàn)小腸鼓氣，結(jié)腸部位靠腸系膜側(cè)嚴(yán)重不規(guī)則充血，內(nèi)容物鮮黃。

2.2 形態(tài)與染色鏡檢

無菌分別取心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)及小腸等臟器組織涂片，進行革蘭氏染色，并逐一鏡檢。記錄鏡檢結(jié)果。

2.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)

取病死豬胃、腸內(nèi)容物適量接種于普通肉湯培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)24h。同時，將上述內(nèi)臟樣本勻漿后用少量滅菌生理鹽水制成懸液，將組織懸液樣本分別接種于普通瓊脂平板和血瓊脂平板上，分別37℃常規(guī)及厭氧培養(yǎng)24h。僅在厭氧培養(yǎng)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌生長，挑取單個菌落轉(zhuǎn)種于厭氧增菌培養(yǎng)基中，37℃增菌培養(yǎng)24h。

厭氧增菌培養(yǎng)基、需氧增菌培養(yǎng)基、血瓊脂平板、葡萄糖血瓊脂平板購自青島海博生物技術(shù)有限公司。普通肉湯培養(yǎng)基、肉肝湯培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基、牛乳培養(yǎng)基購自杭州天和微生物制劑有限公司。產(chǎn)氣莢膜梭菌A型、B型、C型、D型4種分型血清購自新疆生物制品廠。

圖1 腹圍膨大

圖2 腹部潮紅

圖3 腹腔內(nèi)充斥腸道內(nèi)容物

圖4 結(jié)腸袢水腫

2.4 細(xì)菌的致病性試驗

取12只20g左右健康的小白鼠，分成2組。第1組6只，將37℃培養(yǎng)24h的純培養(yǎng)物肉湯培養(yǎng)液分別腹腔注射接種，每只0.12ml；第2組6只，每只接種0.12ml滅菌肉湯作為對照。

2.5 細(xì)菌的鑒定

觸 （涂）片、染色、鏡檢：取肝、脾、腎、胃、腸病料及純培養(yǎng)物按常規(guī)方法制成觸 （涂）片，革蘭氏及瑞氏染色后鏡檢。生化試驗：按常規(guī)方法進行生理生化特性鑒定。

2.6 血清型鑒定

將純培養(yǎng)物接種于厭氣肉肝湯中37℃培養(yǎng)8h，培養(yǎng)物2000r/min離心30min。分別取上清液1ml與等量的A、B、C、D4種分型血清混合，37℃作用45min，每一個血清型分別靜脈注射小白鼠2只，0.14ml/只，觀察24h，根據(jù)結(jié)果確定分離菌血清型。

3 結(jié)果

3.1 細(xì)菌的分離與培養(yǎng)特性

該菌為嚴(yán)格厭氧菌。將肝、腸道內(nèi)容物等直接涂片瑞氏染色，可見大量兩端鈍圓的粗大桿菌，獨立或成雙排列，短鏈較少，無鞭毛，不能運動。革蘭氏染色陽性。有的菌體中央或近端有芽孢，芽孢小于菌體橫徑。在血瓊脂平板上可形成莢膜，無芽孢。在葡萄糖血瓊脂平板上形成圓形、光滑、隆起、淡黃色、直徑2～4mm的菌落，有的呈圓盤形，邊緣成鋸齒狀。菌落周圍有棕色溶血區(qū)，呈輻射狀條紋。牛乳培養(yǎng)基中培養(yǎng)10h后，牛乳被酸凝，凝塊呈多孔的海綿狀。肉肝湯培養(yǎng)變得渾濁并產(chǎn)生大量氣體。

3.2 生化試驗

見附表。

3.3 致病性試驗結(jié)果

注射純培養(yǎng)物肉湯培養(yǎng)液的試驗組小鼠均死亡，注射滅菌肉湯的對照組小鼠均存活。

3.4 血清學(xué)分型鑒定結(jié)果

注射等量純培養(yǎng)物懸液與A型血清混合物的小白鼠正常存活，而其他小白鼠全部死亡。說明A型血清中的抗體被特異性中和，由此可以確定該豬場的病原應(yīng)該是A型產(chǎn)氣莢膜梭菌。

4 小結(jié)和討論

經(jīng)對分離菌株進行厭氧培養(yǎng)、生化鑒定、動物接種、血清型鑒定，同時結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀觀察、病理剖檢等措施，確定該豬場產(chǎn)房仔豬猝死的原因是感染A型產(chǎn)氣莢膜梭菌。產(chǎn)氣莢膜梭菌可分為A、B、C、D、E和F6個血清型，其中A型和C型是導(dǎo)致動物發(fā)生疾病的主要病原。產(chǎn)氣莢膜梭菌對養(yǎng)豬業(yè)的危害貫穿豬的整個一生，可引起乳豬的紅痢、梭菌性仔豬腹瀉、中大豬及母豬的脹氣、壞死性腸炎及猝死。

A型產(chǎn)氣莢膜梭菌是豬腸內(nèi)正常微生物區(qū)系的一部分，但其也可引起新生仔豬的腸道疾病。當(dāng)產(chǎn)氣莢膜梭菌或其芽孢被豬采食后在腸道內(nèi)大量增殖，或當(dāng)采食飼料過多而滯留于胃腸內(nèi)，消化道蠕動不足，飼料、氣候及環(huán)境突變導(dǎo)致豬只抵抗力下降，腸道菌群失調(diào)，使腸道內(nèi)原有的產(chǎn)氣莢膜梭菌大量繁殖而發(fā)病。產(chǎn)氣莢膜梭菌繁殖后，產(chǎn)生大量氣體，不能及時從肛門排出，使胃腸鼓脹，壓迫心臟和肺部，導(dǎo)致血液循環(huán)和呼吸系統(tǒng)功能障礙，最終導(dǎo)致豬窒息死亡。

發(fā)病場作為一個運行15年的老豬場，生產(chǎn)設(shè)備已趨于老化，環(huán)境清潔衛(wèi)生及消毒工作存在漏洞。加之近年來受行情影響，生產(chǎn)效益下滑，母豬淘汰減緩，部分高胎次母豬可能攜帶有A型產(chǎn)氣莢膜梭菌。哺乳期間，發(fā)病仔豬其本是獲得母體的病原菌，導(dǎo)致此次臨床病情發(fā)生。

抗生素只對產(chǎn)氣莢膜梭菌本身起作用，對其釋放的毒素?zé)o任何作用，采用有效合理的預(yù)防措施的意義大于治療。本病發(fā)生與環(huán)境衛(wèi)生有直接關(guān)系，故豬舍糞便應(yīng)及時清理，欄舍定期消毒。合理配制日糧，保證飼料原材料質(zhì)量，禁用霉變飼料或突然更換飼料。豬場若常爆發(fā)此病，可在冬春季節(jié)，在飼料中添加甲硝唑200g/t，連喂3～5d。可起到較好預(yù)防效果。在母豬產(chǎn)前和產(chǎn)后半個月內(nèi)飼料中添加酸化劑和微生態(tài)制劑，可有效緩解母豬便秘和梭菌在體內(nèi)過度增殖，起到對仔豬安全保護作用。

附表 生化試驗結(jié)果

蘇志 （1972-)，女，大專，河南省信陽市人，中級獸醫(yī)師，研究方向：動物疫病防控。