陳偉 馬慧玲 陳靜 王敏 孫圣福

（1，山東省濟(jì)南市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 250002；2，山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 250022）

濟(jì)南市部分豬場(chǎng)口蹄疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果與分析

陳偉1馬慧玲2陳靜2王敏2孫圣福2

（1，山東省濟(jì)南市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 250002；2，山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 250022）

為了解濟(jì)南市口蹄疫免疫效果，抽檢了濟(jì)南市的12個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)的血清樣品370份，采用液相阻斷ELISA方法對(duì)其進(jìn)行O型口蹄疫抗體檢測(cè)，其中313份免疫合格，免疫合格率為84.59%，檢測(cè)結(jié)果表明濟(jì)南市規(guī)?；i場(chǎng)口蹄疫免疫效果良好，接種起到免疫預(yù)防的作用。

口蹄疫；規(guī)?；i場(chǎng)；O型口蹄疫；免疫抗體；免疫效果；ELISA；濟(jì)南市

口蹄疫是由口蹄疫病毒 （Foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MD）引起的豬的一種危害嚴(yán)重的烈性接觸性傳染病，其主要特征為嘴周?chē)?、口?nèi)、蹄、乳房和乳頭出現(xiàn)水皰[1]。口蹄疫1514年首次發(fā)現(xiàn)于意大利，1898年確認(rèn)為病毒，目前世界上有70多個(gè)國(guó)家存在該病。該病發(fā)病率高，幾乎達(dá)100%，死亡率低，一般只有2～3%[2]。

口蹄疫病毒侵入機(jī)體內(nèi)，首先在侵入部位的上皮細(xì)胞繁殖，使上皮細(xì)胞逐漸腫大，發(fā)生水泡性變性和壞死，于細(xì)胞間隙出現(xiàn)漿液性滲出，形成水皰，當(dāng)機(jī)體的抵抗力不足以抵抗病毒的致病力時(shí)，則病毒由水皰進(jìn)入血液而擴(kuò)散至全身，引起病毒血癥，造成病畜體溫升高，食欲減退或廢絕，病畜的水泡皮、水皰液、唾液、糞便和呼出的空氣中含有大量的病毒，通過(guò)接觸傳播，健康家畜可以通過(guò)接觸病畜的水皰液而感染?？谔阋邼摲谳^短，豬的潛伏期為18～20h，臨床主要變現(xiàn)為蹄部水皰，體溫升高，口腔黏膜形成小水泡或糜爛，蹄冠、蹄叉等部位出現(xiàn)紅、腫、敏感等癥狀，感染嚴(yán)重時(shí)可使蹄殼脫落，病豬鼻鏡、乳房也常發(fā)生水泡及破潰面，仔豬通常患急性胃腸炎和心肌炎，突然死亡。病理變化主要表現(xiàn)為咽喉、氣管、支氣管和前胃黏膜可見(jiàn)圓形爛斑和潰瘍，心臟有心肌炎病變，心肌松軟，心肌切面有灰白色或淺黃色斑點(diǎn)條紋，稱(chēng)為 “虎斑心”。

口蹄疫病毒屬小RNA病毒科口蹄疫病毒屬，與脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇病毒同屬?？谔阋卟《局饕?個(gè)血清型，即O、A、C、AsiaI和SAT1、SAT2、SAT3，不同血清型之間無(wú)交叉和交叉免疫現(xiàn)象，O、A、C型幾乎遍布亞、非、拉、歐洲各洲，SAT1、SAT2、SAT3主要分布在非洲，AsiaI主要分布在亞洲。北美、中美洲、加勒比海地區(qū)以及大洋洲等為口蹄疫的清潔區(qū)[3]。我國(guó)主要存在O、A和AsiaI3個(gè)血清型。

口蹄疫病毒為單股正鏈RNA病毒，基因組全長(zhǎng)8500個(gè)核苷酸，由5’-端非編碼區(qū) （5’-NCR）一個(gè)開(kāi)放閱讀框（ORF）和3’-端非編碼區(qū)組成，ORF由L基因、P1結(jié)構(gòu)蛋白基因、P2和P3非結(jié)構(gòu)蛋白基因以及起始密碼子和終止密碼子構(gòu)成，長(zhǎng)約6.5kb，編碼成一個(gè)大的聚合蛋白，該聚合蛋白在翻譯過(guò)程中不斷裂解產(chǎn)生病毒的結(jié)構(gòu)蛋白和功能蛋白。P1區(qū)編碼VP4、VP2、VP3和VP1結(jié)構(gòu)蛋白，組裝成病毒的衣殼蛋白，P2區(qū)編碼2A、2B、2C三種非結(jié)構(gòu)蛋白，研究證實(shí)P2與病毒的復(fù)制和毒力相關(guān)；P3區(qū)編碼3A、3B、3C、3D四種非結(jié)構(gòu)蛋白，其中3A與口蹄疫病毒致病性相關(guān)[4]。

口蹄疫的診斷包括臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷，根據(jù)口蹄疫的典型癥狀:高熱、厭食、流涎以及在舌面、齒齦、唇內(nèi)側(cè)、頰部黏膜、趾間皮膚、蹄叉、蹄部出現(xiàn)水皰可初步診斷，確診需要結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)進(jìn)行。

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)包括病毒分離鑒定，分子生物學(xué)診斷技術(shù)和血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)等，病毒分離可選取病料進(jìn)行接種豬原代腎細(xì)胞進(jìn)行病毒分離，也可接種2～7日齡幼鼠進(jìn)行口蹄疫病毒的分離；分子生物學(xué)手段主要包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （含熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）等，血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)包括補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、病毒中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、血凝試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、金標(biāo)試紙條等[5]。

目前口蹄疫的防疫在我國(guó)實(shí)行強(qiáng)制免疫的防控策略，目前常用的疫苗有滅活疫苗、合成肽疫苗等。滅活疫苗以細(xì)胞的全病毒進(jìn)行提純滅活后作抗原；合成肽疫苗采用病毒衣殼表面抗原作為抗原涉及合成肽疫苗；目前研發(fā)階段的還有蛋白質(zhì)和病毒亞單位疫苗、DNA疫苗、表達(dá)病毒蛋白的復(fù)制缺陷性病毒載體疫苗等[4]。

1 材料與方法

1.1 試劑

O型口蹄疫液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所提供。

1.2 血清樣品

2015年1～12月份抽檢濟(jì)南市12個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)口蹄疫疫苗免疫的血清樣品370份。

1.3 主要儀器設(shè)備

酶標(biāo)儀:美國(guó)Thermo MK3，洗板機(jī):405 Touch微孔板洗板機(jī)；移液器:法國(guó)吉爾森。

1.4 檢測(cè)方法

參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。按照 《2015年國(guó)家動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃》進(jìn)行結(jié)果判定，抗體效價(jià)≥1∶64判定為免疫合格。

2 結(jié)果

從抽檢的12個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的監(jiān)測(cè)結(jié)果來(lái)看，采集的12個(gè)豬場(chǎng)中，豬場(chǎng)的口蹄疫免疫效果參差不齊，群體免疫合格率從37.50%到100%不等，其中10個(gè)豬場(chǎng)的免疫抗體合格率在70%以上 （農(nóng)業(yè)部群體免疫合格標(biāo)準(zhǔn)），12個(gè)豬場(chǎng)共采集了370份血清樣品，其中313份免疫合格，樣品免疫合格率為84.59%，場(chǎng)點(diǎn)免疫合格率為83.33%。

附表 不同場(chǎng)點(diǎn)口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

（1）共抽檢了12個(gè)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)，經(jīng)過(guò)調(diào)查，12個(gè)豬場(chǎng)都進(jìn)行了口蹄疫的免疫，說(shuō)明養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)于口蹄疫免疫的重視程度，也從側(cè)面說(shuō)明了口蹄疫對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的重要性。

（2）抽檢的370份樣品，樣品免疫合格率為84.59%（313/370），場(chǎng)點(diǎn)的免疫合格率為83.33% （10/12），抽檢的樣品大部分為育肥豬，口蹄疫免疫效果尚算理想，遠(yuǎn)高于農(nóng)業(yè)部要求的70%的群體免疫合格率。

（3）抽檢的12個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)，10個(gè)豬場(chǎng)的口蹄疫免疫合格率達(dá)到70%以上，有2個(gè)豬場(chǎng)免疫合格率不足70%，表明該2個(gè)豬場(chǎng)存在發(fā)生口蹄疫的風(fēng)險(xiǎn)，需要進(jìn)一步加強(qiáng)口蹄疫的防疫。

[1]龔團(tuán)蓮,孫立杰,毛景東,等.口蹄疫研究概述[J].內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）,2001,16（4）:393-396.

[2]馮雪平.口蹄疫疫情與控制[J].中國(guó)獸醫(yī)科技,1986（1）:62-64.

[3]Sobrino F.Saiz M，Jimenez M A，et al.Foot-and-mouth virus：a long known virus，but a current theat[J].Vet Res,2001,32:1-30.

[4]盧曾軍,劉在新.口蹄疫病毒研究概況[J].中國(guó)獸醫(yī)科技,2003（2）:69-73.

[5]董志強(qiáng),張志等.口蹄疫檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2007,24（3）:48-50.

陳偉 （1978-），女，山東省濟(jì)南市人，助理畜牧師，主要從事動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查工作。