凌金鋒, 周 娟, 彭埃天*, 宋曉兵, 程保平, 陳 霞

(1. 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所, 廣東省植物保護新技術(shù)重點實驗室,廣州 510640; 2. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 廣州 510642)

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吡唑醚菌酯與代森錳鋅對兩種果樹病原菌的聯(lián)合毒力

凌金鋒1,2, 周 娟1, 彭埃天1*, 宋曉兵1, 程保平1, 陳 霞1

(1. 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所, 廣東省植物保護新技術(shù)重點實驗室,廣州 510640; 2. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 廣州 510642)

為了明確吡唑醚菌酯與代森錳鋅混配對荔枝霜疫霉病菌(Peronophythoralitchii)和香蕉尾孢葉斑病菌(Pseudocercosporamusae)的聯(lián)合毒力,分別采用菌絲生長速率法、菌絲干重法測定了吡唑醚菌酯、代森錳鋅及其不同配比混劑對荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌的毒力。結(jié)果表明:吡唑醚菌酯與代森錳鋅質(zhì)量比為1.35∶35的混劑對荔枝霜疫霉病菌表現(xiàn)為相加作用,增效系數(shù)為1.286 3;吡唑醚菌酯與代森錳鋅質(zhì)量比為8∶66、6∶77和4∶88的混劑對香蕉尾孢葉斑病菌同樣表現(xiàn)出較好的相加作用,增效系數(shù)分別為1.299 9、1.378 0和1.390 7;綜合考慮混配經(jīng)濟效益和降低病原菌對吡唑醚菌酯產(chǎn)生抗性風(fēng)險等因素,吡唑醚菌酯與代森錳鋅以質(zhì)量比1.35∶35～8∶66進行混配較為合理。

吡唑醚菌酯; 代森錳鋅; 荔枝霜疫霉病菌; 香蕉尾孢葉斑病菌; 聯(lián)合毒力

荔枝霜疫霉病和香蕉尾孢葉斑病分別是我國南方特色水果荔枝和香蕉上的重要病害,在各產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生,給生產(chǎn)造成嚴(yán)重損失[1-3]。目前,國內(nèi)主要還是依靠化學(xué)農(nóng)藥對這兩個病害進行防控。然而,單一化學(xué)農(nóng)藥長期大面積使用易導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性,而混配農(nóng)藥則具有擴大防治譜、降低成本、提高防治效果及延緩抗藥性等特點,因此利用現(xiàn)有農(nóng)藥進行混配已成為目前農(nóng)藥開發(fā)應(yīng)用的一個重要方面。吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)是一種廣譜甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑,其作用機理是抑制線粒體呼吸作用,同時具有保護作用、治療作用、內(nèi)吸傳導(dǎo)性和耐雨水沖刷等性能[4],對荔枝霜疫霉病和香蕉尾孢葉斑病均具有良好防效[2-3],但目前該藥劑的使用成本較高;代森錳鋅(mancozeb)是一種廣譜硫代氨基甲酸酯類的保護性殺菌劑,其作用機理是抑制菌體內(nèi)丙酮酸的氧化[5],也是荔枝和香蕉生產(chǎn)上常規(guī)藥劑,而有關(guān)兩種殺菌劑混配對荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌的聯(lián)合毒力尚未見報道。為此,筆者測定了吡唑醚菌酯與代森錳鋅不同配比組合對荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌的聯(lián)合毒力,旨在篩選出混配的最佳配比,為研制防控荔枝霜疫霉病和香蕉尾孢葉斑病的混配藥劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

荔枝霜疫霉病菌(Peronophythoralitchii)和香蕉尾孢葉斑病菌(Pseudocercosporamusae)菌株由本研究室分離、保存。

1.2 供試藥劑

250 g/L吡唑醚菌酯乳油,巴斯夫歐洲公司;80%代森錳鋅可濕性粉劑,美國陶氏益農(nóng)公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 單劑EC50的測定

荔枝霜疫霉病菌的生測采用菌絲生長速率法[6],下同。在預(yù)試驗的基礎(chǔ)上,分別配制含吡唑醚菌酯0.002 5、0.005、0.007 5、0.01、0.02和0.03 μg/mL的PSA培養(yǎng)基平板,及含代森錳鋅2.5、5、7.5、10、15和20 μg/mL的PSA培養(yǎng)基平板,同時設(shè)不加藥劑的空白對照,每處理設(shè)4個重復(fù),在平板中央接入約1 mm×1 mm的新鮮菌絲方塊,再置于26.0℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。7 d后用十字交叉法測量菌落直徑,取其平均值,按以下公式計算不同濃度處理的菌絲生長抑制率。

菌絲生長抑制率(%)=(對照菌落增長直徑-處理菌落增長直徑)/對照菌落增長直徑×100。

香蕉尾孢葉斑病菌的生測采用菌絲干重法[7],下同。在預(yù)試驗的基礎(chǔ)上,分別配制含吡唑醚菌酯0.005、0.01、0.025、0.05、0.1和0.25 μg/mL的PS液體培養(yǎng)基,和含代森錳鋅0.1、0.3、0.5、0.7、0.9和1.1 μg/mL的PS液體培養(yǎng)基,同時設(shè)不加藥劑的空白對照,每處理設(shè)4個重復(fù)(每重復(fù)為1個150 mL三角瓶,內(nèi)裝50 mL PS液體培養(yǎng)基),再將預(yù)先在PSA上培養(yǎng)好的新鮮菌絲體切成約1 mm×1 mm×1 mm的菌絲方塊,每瓶接入6塊,在26.0℃、130 r/min條件下恒溫振蕩培養(yǎng)12 d后用濾紙真空抽濾收集菌絲體,并置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中60～70℃烘干至恒重,用電子天平稱量菌絲干重,按以下公式計算不同濃度處理的菌絲生長抑制率。

菌絲生長抑制率(%)=(對照菌絲干重-處理菌絲干重)/對照菌絲干重×100。

1.3.2 最佳配比篩選

采用交互測定法進行最佳配比的篩選[8-9]。以單劑吡唑醚菌酯和代森錳鋅的EC50為基礎(chǔ),分別按其EC50值劑量百分比的比例設(shè)置設(shè)2個單劑、9個配比及空白對照共12個處理進行測定,見表1(分別以單劑的EC50劑量為 100%,然后 10 等分,分別計算此兩藥劑在各配比中的質(zhì)量濃度,并以兩者之和作為該配比的測試濃度),每處理4個重復(fù),具體步驟見1.3.1,計算各配比的菌絲生長抑制率,再根據(jù)以下公式計算各配比的毒性比率。

預(yù)期抑制率(%)=吡唑醚菌酯EC50值劑量實際抑制率×配比中吡唑醚菌酯EC50值劑量百分比+代森錳鋅EC50值劑量實際抑制率×配比中代森錳鋅EC50值劑量百分比;

毒性比率=實際抑制率/預(yù)期抑制率;

毒性比率大于1.25時,表現(xiàn)為增效作用;毒性比率小于0.75時,表現(xiàn)為拮抗作用;毒性比率在1左右時,為相加作用;在此基礎(chǔ)上初步篩選出最佳配比。

表1 各處理吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50劑量百分比Table 1 Proportion of EC50 of pyraclostrobin and mancozeb in mixture

1.3.3 最佳配比聯(lián)合毒力測定

根據(jù)1.3.2試驗結(jié)果,初步篩選出最佳配比,并對該最佳配比混劑進行聯(lián)合毒力測定,采用Wadley法[10]計算混劑的增效系數(shù)(synergistic ratio,SR),評價藥劑混用的增效作用:SR>1.5表示具有增效作用,0.5≤SR≤1.5表示具有相加作用,SR<0.5表示具有拮抗作用。

EC50(th)=(a+b)/[a/EC50(ob) (A)+b/EC50(ob) (B)]

SR=EC50(th)/EC50(ob)

EC50(ob) (A)、EC50(ob) (B)分別代表混劑中吡唑醚菌酯和代森錳鋅的EC50實測值;EC50(ob)、EC50(th)分別代表混劑的EC50實測值和理論值;a、b分別代表吡唑醚菌酯和代森錳鋅在混劑中的百分含量,單位為百分率(%);SR代表增效系數(shù)。

1.3.4 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2003軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計,計算各處理平均菌落直徑和平均抑制率;采用DPS 7.05軟件[11]對藥劑濃度對數(shù)值及對應(yīng)的菌絲生長抑制率幾率值進行回歸分析,求出各單劑及其不同配比混劑的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)r和EC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 吡唑醚菌酯和代森錳鋅對兩病原菌的毒力

毒力測定結(jié)果表明(表2),吡唑醚菌酯和代森錳鋅對荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌均表現(xiàn)出較好的毒力,吡唑醚菌酯對兩種病原菌的EC50分別為0.012 1 μg/mL和 0.017 0 μg/mL,代森錳鋅對兩種病原菌的EC50分別為3.359 0 μg/mL和0.107 0 μg/mL。

表2 吡唑醚菌酯和代森錳鋅對荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌的毒力Table 2 Toxicity of pyraclostrobin and mancozeb against Peronophythora litchii and Pseudocercospora musae

2.2 吡唑醚菌酯和代森錳鋅最佳配比的篩選

以單劑吡唑醚菌酯和代森錳鋅的近似EC50(對荔枝霜疫霉病菌,分別取0.015 μg/mL和3.5 μg/mL;對香蕉尾孢葉斑病菌,分別取0.02 μg/mL和0.11 μg/mL)為基礎(chǔ),采用交互測定法進行最佳配比的篩選,試驗結(jié)果表明(表3),在所選配比中,吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50值劑量比例90∶10、80∶20、70∶30、60∶40和50∶50對荔枝霜疫霉病菌的毒性比率分別為0.98、0.83、0.89、0.82、0.84,表現(xiàn)為相加作用;當(dāng)吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50值劑量比例為70∶30和20∶80時,對香蕉尾孢葉斑病菌的毒性比率分別為1.51和1.37,表現(xiàn)為增效作用,當(dāng)比例為90∶10、80∶20、60∶40、50∶50、40∶60、30∶70和10∶90時,均表現(xiàn)為相加作用。綜合以上結(jié)果,對荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌,分別取90∶10、80∶20、70∶30、60∶40和50∶50和70∶30、40∶60、30∶70、20∶80、10∶90各5個比例作下一步的聯(lián)合毒力驗證。

續(xù)表3 Table 3(Continued)

吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50值劑量百分比的比例RatiosofproportionofEC50betweenpyraclostrobinandmancozebinmixture荔枝霜疫霉病菌 Pe.litchii實際抑制率/%Observedinhibitionrate預(yù)期抑制率/%Expectedinhibitionrate毒性比率Toxicityratios香蕉尾孢葉斑病菌 Ps.musae實際抑制率/%Observedinhibitionrate預(yù)期抑制率/%Expectedinhibitionrate毒性比率Toxicityratios30∶7045.1555.310.8238.8834.611.1220∶8031.4454.730.5746.0433.681.3710∶9048.4554.140.8940.2432.761.230∶10053.5653.561.0031.8331.831.00

2.3 最佳配比的聯(lián)合毒力測定

根據(jù)混劑最佳配比的初步篩選結(jié)果,分別選取5個配比對荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌進行聯(lián)合毒力測定,求出各自的回歸方程和EC50。試驗結(jié)果表明(表4),隨著混劑中吡唑醚菌酯實際含量的減少，吡唑醚菌酯與代森錳鋅的5個不同比例混劑對荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌的抑制毒力依次遞減。

結(jié)合兩單劑的EC50,根據(jù)Wadley法計算吡唑醚菌酯和代森錳鋅不同比例混劑理論上的EC50(th),并與實際觀察的EC50(ob)比較,計算增效系數(shù)(SR)。由表4可知,吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50值劑量比例90∶10、80∶20、70∶30、60∶40和50∶50 5個配比混劑對荔枝霜疫霉病菌的增效系數(shù)分別為1.286 3、0.728 6、0.721 3、0.680 7和0.669 2,均介于0.5～1.5之間,表現(xiàn)為相加作用,其中比例90∶10的增效系數(shù)明顯高于其他4個配比。吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50值劑量比例40∶60、30∶70、20∶80和10∶90 4個配比混劑對香蕉尾孢葉斑病菌的增效系數(shù)分別為1.299 9、1.378 0、1.390 7和1.233 5,表現(xiàn)為相加作用,但比例為90∶10的增效系數(shù)為1.632 4,表現(xiàn)為增效作用。

表4 吡唑醚菌酯與代森錳鋅不同比例混劑對兩種病原菌的聯(lián)合毒力Table 4 Synergic toxicity of mixtures containing different ratios of pyraclostrobin and mancozeb againstPeronophythora litchii and Pseudocercospora musae

3 結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明,吡唑醚菌酯與代森錳鋅混配對荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌均具有一定的增效或相加作用。從增效系數(shù)來看,針對荔枝霜疫霉病菌,吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50值劑量比例為90∶10(實際含量比為1.35∶35)的增效系數(shù)最大,可作為最佳配比;針對香蕉尾孢葉斑病菌,吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50值劑量比例為70∶30(實際含量比為14∶33)的增效系數(shù)同樣最大,且表現(xiàn)為增效作用,但該配比混劑中吡唑醚菌酯的實際含量明顯高于40∶60、30∶70、20∶80和10∶90 4個配比;由于混配藥劑的田間藥效與室內(nèi)毒力測定結(jié)果之間還可能存在一定的差異,以及從降低農(nóng)藥使用成本和降低吡唑醚菌酯抗性風(fēng)險等方面考慮,吡唑醚菌酯與代森錳鋅以質(zhì)量比1.35∶35～8∶66進行混配較為合理。

吡唑醚菌酯殺菌譜廣,其防治對象包括由半知菌、子囊菌、擔(dān)子菌和卵菌等病原引起的植物病害,對植物還具有保健增產(chǎn)作用,已成為全球第二大殺菌劑,但由于其作用位點單一,被列為高抗性風(fēng)險藥劑[4],同時單獨使用該藥劑的成本也較高。為降低病原菌對吡唑醚菌酯產(chǎn)生抗性的風(fēng)險及其使用成本,復(fù)配用藥是有效途徑之一[12]。而代森錳鋅是一種典型的多作用位點保護性殺菌劑,與吡唑醚菌酯的作用機制不同,且其價格也相對較低,具有較好的復(fù)配利用基礎(chǔ)。本研究結(jié)果表明,吡唑醚菌酯與代森錳鋅按一定比例混配可達到增效或相加作用,以EC50計,達到相同抑菌效果所需吡唑醚菌酯的量明顯減少,藥劑選擇壓力降低,從而有利于延緩病原菌對吡唑醚菌酯產(chǎn)生抗藥性,同時也有利于農(nóng)藥使用成本的降低,但上述配方在田間的實際應(yīng)用效果還有待進一步的驗證。

[1] 彭埃天,李鑫,劉景梅,等.10%氰霜唑懸浮劑對荔枝霜疫霉毒力測定與防治試驗[J].植物保護,2007,33(6):137-140.

[2] 彭埃天,宋曉兵,凌金鋒,等.粵西荔枝主要病害化學(xué)防治試驗研究[M]∥周明國.中國植物病害化學(xué)防治研究:第8卷.北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社,2012:158-164.

[3] 彭埃天,劉景梅,宋曉兵,等.25%凱潤乳油對香蕉葉斑病的毒力測定及防治試驗[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2007(2):62-64.

[4] 楊麗娟,柏亞羅.甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑——吡唑醚菌酯[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2012,11(4):46-50.

[5] 趙建江,張小風(fēng),王文橋,等.氟硅唑與代森錳鋅混配對梨黑星病菌的聯(lián)合毒力及田間防效[J].植物保護,2014,40(3):195-198.

[6] 農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所.NY/T 1156.2-2006 農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗準(zhǔn)則 殺菌劑 第2部分:抑制病原真菌菌絲生長試驗平皿法[S].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2006:1-3.

[7] 農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所.NY/T 1156.19-2013 農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗準(zhǔn)則 殺菌劑 第19部分:抑制水稻稻曲病菌試驗 菌絲干重法[S].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2013:1-2.

[8] 陳福良,鄭斐能,王儀.農(nóng)藥混配室內(nèi)毒力測定的一種實驗技術(shù)[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理,1997(4):30-31.

[9] 吳仁鋒,劉述朝.阿維菌素與高效氯氰菊酯對小菜蛾毒力最佳配比的篩選[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2004(1):54-56.

[10]農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所.NY/T 1156.6-2006 農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗準(zhǔn)則 殺菌劑 第6部分:混配的聯(lián)合作用測定[S].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2006:1-3.

[11]唐啟義.DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng):實驗設(shè)計、統(tǒng)計分析及數(shù)據(jù)挖掘[M].第2版.北京:科學(xué)出版社,2010:369-371.

[12]柏亞羅,萬紅梅.甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的抗性剖析[J].農(nóng)藥,2009,48(2):88-95.

(責(zé)任編輯：楊明麗)

Synergic toxicity of pyraclostrobin and mancozeb againstPeronophythoralitchiiandPseudocercosporamusae

Ling Jinfeng1,2, Zhou Juan1, Peng Aitian1, Song Xiaobing1, Cheng Baoping1, Chen Xia1

(1. Plant Protection Research Institute, Guangdong Academy of Agricultural Sciences, Key Laboratory of High Technology for Plant Protection of Guangdong Province, Guangzhou 510640,China; 2. College of Agriculture, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China)

In order to clarify the synergistic toxicity of pyraclostrobin and mancozeb againstPeronophythoralitchiiandPseudocercosporamusae, which cause litchi downy blight and banana yellow sigatoka, respectively, the toxicity of pyraclostrobin, mancozeb and their mixtures at different ratios againstPe.litchiiandPs.musaewas determined by mycelial growth rate test and mycelial dry weight methods. The results showed that the mixture at the mass ratio of 1.35∶35 exhibited an additive effect onPe.litchii, with a synergistic ratio of 1.286 3. The mixtures with mass ratio of 8∶66, 6∶77 and 4∶88 also exhibited additive effects onPs.musae, with a synergistic ratio of 1.299 9, 1.378 0 and 1.390 7, respectively. Considering the economic benefit of the two fungicide mixtures and reduction in the resistance risk of pathogens to pyraclostrobin, the mass ratios between 1.35∶35 and 8∶66 are considered to be the best for pyraclostrobin and mancozeb mixture.

pyraclostrobin; mancozeb;Peronophythoralitchii;Pseudocercosporamusae; synergic toxicity

2015-10-12

2016-02-25

國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-33-07)；廣東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(粵財教[2014]371號)

S 482.2+99

B

10.3969/j.issn.0529-1542.2016.05.046

* 通信作者 E-mail: pengait@163.com