邊亞麗

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不同碳源對(duì)番茄早疫病菌絲生長(zhǎng)的影響

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本研究通過(guò)對(duì)番茄早疫病病害組織的分生孢子的鑒定，可知該病由半知菌亞門(mén)真菌茄鏈格孢菌侵染所致形成的番茄早疫病。在病菌的碳源試驗(yàn)中，番茄早疫病菌對(duì)不同碳源的選擇性比較敏感，如果采用液體培養(yǎng)選用的碳源以葡萄糖，乳糖和甘油為好，對(duì)其它形態(tài)的碳源的利用效率則較低。

番茄早疫病 病原鑒定 碳源試驗(yàn)

一、材料與方法

1．材料

（1）材料的來(lái)源。大棚采集的番茄的受害的枝葉、果實(shí)。

（2）培養(yǎng)基。馬鈴薯的固體和液體培養(yǎng)基。

（3）供試碳源。單糖類(lèi)∶葡萄糖；雙糖類(lèi)∶蔗糖、乳糖；多糖類(lèi)∶可溶性淀粉；醇類(lèi)∶甘油。

（4）儀器設(shè)備。LRHS-250B恒溫恒濕培養(yǎng)箱HZS-H水浴振蕩器；101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱；280—輕便手提式壓力蒸汽消毒器。

2．試驗(yàn)方法

（1）病原的鑒定及分離純化。從新鮮、具典型癥狀病斑上挑取病組織壓片鏡檢，觀察其分生孢子、分生孢子梗形狀、色澤并測(cè)量其大小。同時(shí)將病斑在25℃下保濕48h后作同樣檢查.參照邵力平、沈瑞祥、張素軒的《真菌分類(lèi)學(xué)》有關(guān)專(zhuān)著，進(jìn)行描述和鑒定。在番茄早疫病的新鮮病葉上，選擇典型的單個(gè)病斑，用剪刀從病斑邊緣（病健交界處）剪取邊長(zhǎng)4～5毫米病組織。將病組織進(jìn)行常規(guī)組織分離純化。待菌落直徑長(zhǎng)至5～6厘米時(shí)，方可用。

（2）不同碳源對(duì)菌絲的影響。

固體培養(yǎng)：以PA做基本培養(yǎng)基CK，各種碳源均以20克/升量分別加入，配成各種碳源培養(yǎng)基。病菌在PDA平板上（直徑9厘米）培養(yǎng)，3天后待菌落直徑長(zhǎng)至5～6厘米，從邊緣打?。ㄖ睆?.6厘米）的菌片，分別移植于各種碳源培養(yǎng)基平板中央。每處理重復(fù)3次。每個(gè)過(guò)程都要在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室操作，恒溫24℃培養(yǎng)。每天記錄菌落擴(kuò)展情況，每隔1天測(cè)量菌落徑，調(diào)查菌落顏色。7天繪制菌絲生長(zhǎng)速度曲線，進(jìn)行比較。

液體培養(yǎng)：以馬鈴薯液作為基本培養(yǎng)基，分別加入20克/升的上述各種碳源，配制成不同碳源培養(yǎng)液。應(yīng)用試管盛裝培養(yǎng)液培養(yǎng)，各培養(yǎng)基均加10毫升，滅菌待冷卻后在無(wú)菌超凈工作臺(tái)上分別移植1個(gè)已培養(yǎng)好的菌片（直徑0.6厘米）放入試管中，24℃下恒溫震蕩培養(yǎng)，每處理重復(fù)3次。80轉(zhuǎn)/分鐘震蕩培養(yǎng)7天后，過(guò)濾烘干測(cè)量菌絲干重。

二、結(jié)果與分析

1．病原的鑒定及分離純化

通過(guò)對(duì)番茄病害組織的分生孢子的鑒定，參照《真菌分類(lèi)學(xué)》等著作，可知該病由半知菌亞門(mén)真菌茄鏈格孢菌侵染所致形成的番茄早疫病。

在馬鈴薯培養(yǎng)基上培養(yǎng)的番茄早疫病病菌，觀察其菌落形態(tài)和特征，從菌落顏色，菌落的生長(zhǎng)速度等經(jīng)過(guò)7天的培養(yǎng)均表現(xiàn)出明顯的差異性。

圖1 不同碳源培養(yǎng)基固體培養(yǎng)8天后所形成的病菌形態(tài)特征圖

圖2 不同碳源對(duì)病菌生長(zhǎng)影響

2.不同碳源對(duì)菌絲的影響

（1）固體培養(yǎng)。由表1可以看出，病菌經(jīng)過(guò)在不同碳源培養(yǎng)基7天的培養(yǎng)，可知對(duì)單糖中的葡萄糖利用較好。對(duì)二糖中的蔗糖也都能很好的利用，而對(duì)二糖中的乳糖利用相對(duì)較差。在醇類(lèi)中，對(duì)甘油的利用也較好。但對(duì)多糖中的可溶性淀粉利用較為不好。從圖1可以看出，菌落的顏色在病菌較易擴(kuò)展、菌落直徑較大時(shí)，菌落顏色較深；反之，則菌落顏色較淺。

表1 不同固體碳源培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

從圖2生長(zhǎng)趨勢(shì)曲線來(lái)看，在蔗糖、乳糖和可溶性淀粉的培養(yǎng)基上病菌前6天基本為勻速生長(zhǎng)，而從第6天到第8天生長(zhǎng)速度明顯下降，尤其是可溶性淀粉的培養(yǎng)基幾乎不在生長(zhǎng)。在葡萄糖的培養(yǎng)基上前4天生長(zhǎng)速度較快，第4天到第6天相對(duì)緩慢，后來(lái)較為平緩。在甘油上的培養(yǎng)基前6天呈加速上升趨勢(shì)，但第6天到第8天生長(zhǎng)速度相對(duì)減慢。從整體來(lái)看，病菌對(duì)葡萄糖和蔗糖的利用最好，對(duì)可溶性淀粉的利用最差，菌落擴(kuò)展最慢。

（2）液體培養(yǎng)。由表2可以看出，病菌對(duì)碳源的利用，以乳糖和葡萄糖為好，其次為甘油，對(duì)蔗糖的利用也較好；病菌對(duì)其它可溶性淀粉的利用則很差，菌絲體生長(zhǎng)較慢，干重很低。在馬鈴薯汁中加入醇類(lèi)碳源，病菌不但不能利用該碳源，而且限制了病菌的生長(zhǎng)，其機(jī)理還有待于進(jìn)一步研究。

表2 病菌在不同碳源培養(yǎng)液中的菌絲生長(zhǎng)量

三、結(jié)論與討論

在病菌的碳源試驗(yàn)中，番茄早疫病菌對(duì)各種碳源營(yíng)養(yǎng)具有明顯的選擇作用。在固體培養(yǎng)中，病菌對(duì)碳源的利用以葡萄糖和蔗糖的培養(yǎng)基長(zhǎng)勢(shì)為最好，其次為乳糖和甘油，可溶性淀粉的培養(yǎng)基長(zhǎng)勢(shì)不如對(duì)照。在液體培養(yǎng)中，病菌對(duì)碳源的利用以乳糖為最好，其次為葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)的病菌，而病菌對(duì)蔗糖和甘油的利用比其它碳源則利差，菌絲體長(zhǎng)勢(shì)較慢，干重較低。

在試驗(yàn)中，有一個(gè)值得注意的現(xiàn)象是病菌的直線生長(zhǎng)速度同菌絲體干重生長(zhǎng)速度并無(wú)正相關(guān)。Harry. Hudson1986指出，用線性生長(zhǎng)測(cè)定菌落生長(zhǎng)速度具有很大的局限性，在低營(yíng)養(yǎng)的基質(zhì)中，菌落直線生長(zhǎng)可能很快，但由于菌落稀疏而實(shí)際生長(zhǎng)量卻很小，相反在高營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)中生長(zhǎng)的菌落，其直線生長(zhǎng)速率可能不快，但實(shí)際生長(zhǎng)量卻較大。在這種情況下，我們認(rèn)為應(yīng)采用液體培養(yǎng)為主。本研究表明番茄早疫病菌對(duì)不同碳源的選擇性比較敏感，如果采用液體培養(yǎng)選用的碳源以葡萄糖，乳糖和甘油為好，對(duì)其它形態(tài)的碳源的利用效率則較低。本研究中病菌菌絲直線生長(zhǎng)速度和干重生長(zhǎng)速度所表現(xiàn)出的顯著差異，以及在固態(tài)培養(yǎng)中加入可溶性淀粉，菌絲生長(zhǎng)速度還不及對(duì)照的現(xiàn)象，值得進(jìn)一步研究探討。