王衛(wèi)明,邢曉雪,高慧,王玲燕,劉敏娜,樊官偉
(1.天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津 300193;2.天津中醫(yī)藥大學(xué),天津 300193)
冠心舒通膠囊的抗血小板聚集及抗動(dòng)脈收縮作用
王衛(wèi)明1,2,邢曉雪1,2,高慧1,2,王玲燕1,2,劉敏娜1,2,樊官偉1,2
(1.天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津300193;2.天津中醫(yī)藥大學(xué),天津300193)
[目的]檢測(cè)冠心舒通膠囊在治療血栓栓塞性疾病中的療效。[方法]對(duì)比冠脈舒通膠囊對(duì)二磷酸腺苷(ADP)和凝血酶誘導(dǎo)的大鼠血小板最大聚集率、抑制率;對(duì)比其對(duì)去甲腎上腺素和氯化鉀(KCl)誘導(dǎo)的大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)收縮的舒張率。[結(jié)果]冠心舒通膠囊對(duì)ADP和凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集有抑制作用;對(duì)去甲腎上腺素和KCl誘導(dǎo)的大鼠胸主動(dòng)脈收縮有舒張作用。[結(jié)論]冠心舒通膠囊對(duì)血栓栓塞性疾病有確切療效。
冠心舒通膠囊;血小板;動(dòng)脈環(huán)
目前腦部血栓栓塞性疾病包括腦梗死、腦血栓、短暫性腦缺血發(fā)作以及心臟疾病中的心絞痛、心肌梗死等,心腦血管疾病常并發(fā),針對(duì)各種機(jī)制的用藥種類繁多,多種藥物聯(lián)合應(yīng)用導(dǎo)致了胃腸反應(yīng)、肝腎損傷,導(dǎo)致了生活不便,經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)加重。這些疾病共同的病理起因是動(dòng)脈硬化,其病理機(jī)制是血管內(nèi)皮損傷收縮能力下降和血小板的激活聚集,血小板與內(nèi)皮之間的相互作用在血栓栓塞性疾病的發(fā)生中起了重要的作用[1-6]。冠心舒通膠囊是陜西咸陽(yáng)步長(zhǎng)制藥有限公司研制的治療冠心病心絞痛的中成藥,由丹參、丁香、冰片、天竺黃等組成,具有活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)、行氣止痛的作用,在臨床中對(duì)急性心肌梗死及經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入術(shù)(PCI)術(shù)后再狹窄有較好的療效[7-12]。而且對(duì)血脂異常、心絞痛、室性早搏等有效,主要不良反應(yīng)是輕微可逆的消化道反應(yīng)[13]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)冠心舒通膠囊對(duì)血小板的抗聚集作用和對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈的擴(kuò)張作用,為冠心舒通膠囊兼具保護(hù)內(nèi)皮和抗血小板聚集治療血栓栓塞性疾病提供依據(jù)。
1.1藥物與試劑冠心舒通膠囊,陜西步長(zhǎng)制藥有限公司研制提供,批號(hào)為130803;阿司匹林腸溶片,生產(chǎn)企業(yè)Bayer Health Care Manufacturing.S.r.l,進(jìn)口分裝企業(yè)拜耳醫(yī)藥保健有限公司,批號(hào)BJ18283;雙嘧達(dá)莫片,天津力生制藥股份有限公司,批號(hào)為1311010;氯化鈉(NaCl),氯化鉀(KCl),磷酸二氫鉀(KH2PO4),七水合硫酸鎂(MgSO4·7H2O),碳酸二氫鈉(NaH2CO3),葡萄糖(C6H12O6),氯化鈣(CaCl2),天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠;氯化鎂(MgCl2),去甲腎上腺素(NE),乙酰膽堿(ACH,Sigma公司);純水(美國(guó)Millipore純水系統(tǒng));檸檬酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司):檸檬酸鈉(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司):tris-base;凝血酶(Sigma公司);二磷酸腺苷(ADP,Sigma公司)。
1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠,雄性,體質(zhì)量250~300 g(北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司)。
1.3實(shí)驗(yàn)儀器Maclab AID生物記錄軟件(澳大利亞Powerlab公司),Radnoti組織器官灌流系統(tǒng)(美國(guó)Powerlab公司);多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)perkin Elmer公司);低速自動(dòng)平衡離心機(jī)(德國(guó)Thermo Fisher)。
1.4實(shí)驗(yàn)方法將ADP誘導(dǎo)的血小板聚集分為5 mg/L雙嘧達(dá)莫片組、模型組、1.5 g/L冠心舒通膠囊組、1.25 g/L冠心舒通膠囊組、1.0 g/L冠心舒通膠囊組;將凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集分為20 g/L阿司匹林腸溶片組、模型組、1.5 g/L冠心舒通膠囊組、1.25 g/L冠心舒通膠囊組、1.0 g/L冠心舒通膠囊組、0.75 g/L冠心舒通膠囊組、0.5 g/L冠心舒通膠囊組。
1.4.1血小板聚集實(shí)驗(yàn)
1.4.1.1復(fù)方枸櫞酸鈉(ACD)溶液的配置檸檬酸38 mmol/L,檸檬酸鈉75 mmol/L,葡萄糖124 mmol/L。1.4.1.2血小板緩沖溶液的配置NaCl 130 mmol/L,檸檬酸鈉10 mmol/L,碳酸氫鈉(NaHCO3)9 mmol/L,葡萄糖6 mmol/L,MgCl20.9 mmol/L,磷酸二氫鉀0.81 mmol/L,Tris-base10 mmol/L。
1.4.1.3實(shí)驗(yàn)方法腹主動(dòng)脈取血與ACD溶液混勻離心用緩沖溶液提取血小板,調(diào)節(jié)血小板混懸液使其A值在1.1~0.88之間,加入各濃度藥物及雙嘧達(dá)莫片混懸液或各濃度藥物及腸溶阿司匹林混懸液,模型組加入緩沖溶液,37℃孵育30 min,各組同時(shí)加入ADP或凝血酶,迅速在酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm的A值每次間隔45 s連續(xù)檢測(cè)30 min。根據(jù)各時(shí)間點(diǎn)的A值計(jì)算血小板聚集率,觀察對(duì)比各藥物在30min內(nèi)聚集率的變化趨勢(shì)、比較各藥物的最大聚集率。血小板聚集率的計(jì)算公式為:血小板聚集率=起點(diǎn)A值-各時(shí)間點(diǎn)A值/起點(diǎn)A值×100%。通過(guò)各藥物最大聚集率與模型組比較計(jì)算藥物對(duì)聚集的抑制率,血小板抑制率的計(jì)算公式為:模型組最大聚集率-各藥物組最大聚集率/模型組最大聚集率×100%。
1.4.2動(dòng)脈環(huán)舒張實(shí)驗(yàn)
1.4.2.1Krebs試液的配置NaCl 118 mmol/L,氯化鉀(KCl)4.7mmol/L,硫酸鎂(MgSO4)1.2 mmol/L,KH2PO41.2 mmol/L,NaHCO325 mmol/L,CaCl21.3 mmol/L,d-glucose 10 mmol/L。
1.4.2.2實(shí)驗(yàn)方法分離剪取胸主動(dòng)脈,剪成3~4mm的血管環(huán)將處理好的動(dòng)脈環(huán)一端固定于洗浴槽,另一端連接張力換能器,固定好后調(diào)整動(dòng)脈環(huán)張力至0.5 g,置于不斷充入95%氧氣(O2)和5%二氧化碳(CO2)混合氣體的10 mL的37℃Krebs試液中持續(xù)15 min。然后換液,逐步調(diào)節(jié)動(dòng)脈環(huán)張力到2.0 g,此過(guò)程不小于90 min,待穩(wěn)定后正式實(shí)驗(yàn)。加入NE(終濃度10-6mol/L)刺激血管收縮8 min,然后加入ACH(終濃度為10-5mol/L)作用8 min,證明血管內(nèi)皮是否存在,換液,加入10mL的Krebs試液,平衡到2.0g(15min)。血管的舒張幅度≥80%證明內(nèi)皮完整為納入標(biāo)準(zhǔn),血管的舒張幅度=(加入NE后動(dòng)脈環(huán)張力-加入ACH后動(dòng)脈環(huán)張力)/(加入NE后動(dòng)脈環(huán)張力-動(dòng)脈環(huán)基礎(chǔ)張力)×100%。加入NE(終濃度10-6mol/L)或高鉀母液(使其終濃度達(dá)到60 mmol/L)刺激血管收縮平穩(wěn)后觀察3 min,然后加入冠脈疏通膠囊混懸液,依次各觀察3 min與空白組對(duì)比舒張率。舒張率的計(jì)算方法:(加藥物后最大血管張力-基礎(chǔ)張力)/(加NE或KCl后最大張力-基礎(chǔ)張力)×100%。
采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,血小板最大聚集率和血小板抑制率組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較若方差齊采用LSD法,若方差不齊采用Dunnett’s T3法,動(dòng)脈環(huán)舒張率組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3.1冠心舒通膠囊對(duì)血小板聚集的影響
3.1.1冠心舒通膠囊對(duì)血小板聚集的影響數(shù)據(jù)匯總ADP為血小板聚集的弱激活劑,雙嘧達(dá)莫片能夠有效抑制其誘導(dǎo)的血小板聚集,凝血酶是血小板聚集的強(qiáng)效激活劑,在本實(shí)驗(yàn)中能夠使血小板最大聚集率接近80%,阿司匹林腸溶片能夠有效抑制其聚集,而冠心舒通膠囊對(duì)兩者誘導(dǎo)的血小板聚集皆具有療效,見(jiàn)表1。
表1 冠心舒通膠囊對(duì)血小板最大聚集率及抑制率影響的對(duì)比(±s)%
表1 冠心舒通膠囊對(duì)血小板最大聚集率及抑制率影響的對(duì)比(±s)%
注:與模型組比較,*P<0.05;與20 mg/L阿司匹林腸溶片相比,#P<0.05。
ADP凝血酶最大聚集率抑制率最大聚集率抑制率5 mg/L雙嘧達(dá)莫片26.45±0.33*19.73±0.62--20 mg/L阿司匹林腸溶片--14.35±0.02*81.90±0.39模型組32.96±0.15-79.32±1.58-1.5 g/L冠心舒通膠囊27.43±3.6816.40±6.904.16±1.57*84.78±1.89#1.25 g/L冠心舒通膠囊25.49±0.60*22.67±1.543.13±0.35*96.04±0.53#1 g/L冠心舒通膠囊34.12±0.14-12.83±3.39*83.86±4.06 0.75 g/L冠心舒通膠囊--22.77±4.11*71.37±4.67 0.5 g/L冠心舒通膠囊--55.19±11.07*30.63±12.71組別
3.1.2冠心舒通膠囊對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的影響冠心舒通膠囊(1.25 g/L和1.5 g/L)和5 mg/L雙嘧達(dá)莫片對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集率有降低的趨勢(shì),1.25 g/L冠心舒通膠囊對(duì)血小板聚集率的降低與模型組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),見(jiàn)圖1。冠心舒通膠囊(1.25 g/L和1.5 g/L)與5 mg/L雙嘧達(dá)莫片對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,見(jiàn)圖2。
圖1 冠心舒通膠囊對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板最大聚集率的影響
圖2 冠心舒通膠囊對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集抑制率的影響
3.1.3冠心舒通膠囊對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集的影響冠心舒通膠囊對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制作用具有劑量相關(guān)性,顯著降低了凝血酶誘導(dǎo)的血小板最大的聚集率,與模型組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),見(jiàn)圖3。冠心舒通膠囊對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制率亦呈劑量相關(guān)性,且冠心舒通膠囊(1.25 g/L和1.5 g/L)與20 mg/L阿司匹林腸溶片相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),見(jiàn)圖4。
圖3 冠心舒通膠囊對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的血小板最大聚集率的影響
圖4 冠心舒通膠囊對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集抑制率的影響
3.2冠心舒通膠囊對(duì)動(dòng)脈收縮的抑制作用
3.2.1冠心舒通膠囊對(duì)NE誘導(dǎo)的胸主動(dòng)脈收縮的影響冠心舒通膠囊對(duì)NE誘導(dǎo)的胸主動(dòng)脈收縮具有抑制作用,在1.5、3.0、4.5 g/L濃度范圍依次增強(qiáng),與空白組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),見(jiàn)圖5。
3.2.2冠心舒通膠囊對(duì)氯化鉀誘導(dǎo)的胸主動(dòng)脈收縮的影響冠心舒通膠囊對(duì)氯化鉀誘導(dǎo)的胸主動(dòng)脈收縮具有抑制作用,在0.75、1.5、3.0 g/L劑量范圍內(nèi)呈劑量依賴關(guān)系,與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),見(jiàn)圖6。
圖5 冠心舒通膠囊對(duì)NE導(dǎo)致的大鼠胸主動(dòng)脈收縮的影響
圖6 冠心舒通膠囊對(duì)KCl導(dǎo)致的大鼠胸主動(dòng)脈收縮的影響
冠心舒通膠囊中的廣棗含有黃銅、酚酸等25種化合物,具有改善血液流變、抑制血小板聚集的作用[14]。丹參素可明顯改善血管收縮舒張功能損傷[15]。還能夠改善局部微循環(huán)障礙[16]。冠心舒通膠囊及其組方中的丹參、冰片、天竺黃均能抑制AngⅡ引起的心肌細(xì)胞和動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的作用[17],而且冠心舒通膠囊也能夠抑制晚期糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)的血管平滑肌增值[18],從而抑制心和血管的慢性舒縮功能失調(diào)。丁香具有散寒止痛,溫中降逆的功效,能夠佐制丹參、冰片、天竺黃的寒涼之性,以防因寒而凝滯,有相反相成之意。
ADP和凝血酶等是血小板激活后釋放的物質(zhì),它們能夠進(jìn)一步激活血小板。雙嘧達(dá)莫片能夠抑制磷酸二酯酶活性,激活腺苷酸環(huán)化酶,增加血小板內(nèi)cAMP含量,對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集有抑制作用。阿司匹林能夠抑制環(huán)氧合酶-1的活性,從而抑制血小板血栓素A2的合成發(fā)揮抗血小板聚集作用。雙嘧達(dá)莫的擴(kuò)血管作用可能導(dǎo)致頭痛、暈厥甚至誘發(fā)心絞痛等不良反應(yīng),而且雙嘧達(dá)莫緩釋片同阿司匹林合用預(yù)防中風(fēng)再發(fā)與單用沒(méi)有差異、大出血風(fēng)險(xiǎn)稍高[19]。阿司匹林不良反應(yīng)時(shí)有報(bào)道,如胃腸道反應(yīng)及黏膜損傷、阿司匹林哮喘、過(guò)敏反應(yīng)、瑞氏綜合征、水楊酸反應(yīng),另外還有大皰性表皮松解型藥疹、血液系統(tǒng)反應(yīng)、中毒性低血糖、聽(tīng)力損害、肝臟毒性、腎損害、心臟毒性、誘發(fā)癲癇、習(xí)慣性和成癮性、眩暈、鼻炎、涎腺腫大等特殊不良反應(yīng)[20]。即使采用小劑量和制成腸溶片也增加上消化道出血的風(fēng)險(xiǎn)[21]。并且阿司匹林抵抗現(xiàn)象影響了其療效,多項(xiàng)臨床試驗(yàn)證實(shí)與臨床事件相關(guān)[22]。本實(shí)驗(yàn)中冠心舒通膠囊抑制ADP、凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集在一定劑量范圍內(nèi)與雙嘧達(dá)莫片或阿司匹林腸溶片療效相當(dāng)或強(qiáng)于兩者。目前冠心舒通膠囊沒(méi)有此兩藥類似的不良反應(yīng)報(bào)道。至于冠心舒通膠囊在1.5 g/L濃度時(shí)效果無(wú)劑量相關(guān)性與其濃度過(guò)高對(duì)血小板的聚集有物理刺激有關(guān)。
本實(shí)驗(yàn)中去甲腎上腺素通過(guò)激活大鼠胸主動(dòng)脈的α受體而起到收縮作用的。而KCl是通過(guò)誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞超極化,鈣離子(Ca2+)通道開(kāi)放,細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流,增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度,收縮血管。冠心舒通膠囊對(duì)此兩者誘導(dǎo)的大鼠胸主動(dòng)脈收縮都具有拮抗作用。
本研究針對(duì)血栓栓塞性疾病發(fā)生的血小板激活和血管舒縮功能障礙兩個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié),通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)冠心舒通膠囊能夠抑制血小板的抗聚集作用和擴(kuò)展胸主動(dòng)脈,為臨床上冠心舒通膠囊治療血栓栓塞性疾病提供了依據(jù)。
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Anti-platelet aggregation and anti-atrial contractile effect of Guanxinshutong capsule
WANG Wei-ming1,2,XING Xiao-xue1,2,GAO Hui1,2,WANG Ling-yan1,2,LIU Min-na1,2,F(xiàn)AN Guan-wei1,2
(1.Research Centre of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China;2.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300100,China)
[Objective]Our explicit objective was to study the function of Guanxinshutong capsule in the treatment of thromboembolic disease.[Methods]We determined the maximal aggregation ratio of Adenosine diphosphate(ADP)and Thrombin-induced platelet aggregation and inhibition rate.We further determined the diastolic ratio and KCl norepinephrine-induced contraction of rat aortic ring.[Results]We found that Guanxinshutong capsule had a potential inhibitory effect on platelet aggregation stimulated by ADP and Thrombin. Furthermore,it was found that Guanxinshutong could inhibit both noradrenaline and KCl-induced contraction of aortic ring and the consequent platelet aggregation.[Conclusion]Guanxinshutong capsule has a definite therapeutic effect against thromboembolic disease.
Guanxinshutong capsule;platelet;aortic ring
R285.5
A
1673-9043(2016)02-0104-05
10.11656/j.issn.1673-9043.2016.02.09
王衛(wèi)明(1978-),男,碩士研究生,研究方向?yàn)橹兴幮难芩幚碜饔醚芯俊?/p>
樊官偉,E-mail:fgw1005@hotmail.com。
(2015-12-15)