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水稻秧苗期耐冷種質(zhì)資源篩選

2016-11-17 05:45周新橋陳達(dá)剛李麗君劉傳光李巨昌陳友訂
農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào) 2016年10期
關(guān)鍵詞:冷性秈稻種質(zhì)

周新橋,陳達(dá)剛,李麗君,劉傳光,李巨昌,陳友訂

(1廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所,廣州510640;2廣東省水稻育種新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州510640)

水稻秧苗期耐冷種質(zhì)資源篩選

周新橋1,2,陳達(dá)剛1,2,李麗君1,劉傳光1,2,李巨昌1,陳友訂1,2

(1廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所,廣州510640;2廣東省水稻育種新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州510640)

為了發(fā)掘水稻尤其是秈稻耐冷基因資源,促進(jìn)水稻耐冷育種,以‘麗江新團(tuán)黑谷’為耐冷對(duì)照,以‘桂99’為冷敏感對(duì)照,從“廣東省水稻種質(zhì)資源庫(kù)”以及南方稻區(qū)收集的150份材料中初步篩選出18份作為本試驗(yàn)的供試材料,采取人工氣候箱低溫脅迫法(PGV-36,日均溫8.5℃),進(jìn)行水稻苗期耐冷種質(zhì)資源篩選研究。結(jié)果顯示:①秧苗期日均8.5℃的人工氣候箱低溫脅迫會(huì)導(dǎo)致水稻秧苗生長(zhǎng)發(fā)育明顯減緩受阻,隨著時(shí)間的推進(jìn),供試材料的生長(zhǎng)發(fā)育停止。②經(jīng)人工氣候箱低溫脅迫后,不論是處理3天還是6天,各供試材料幼苗死亡率差異達(dá)到極顯著水平;總體上粳稻的耐冷性強(qiáng)于秈稻。③以低溫脅迫3天和6天后各供試材料自然氣候條件下恢復(fù)生長(zhǎng)10天的幼苗死亡率為指標(biāo)評(píng)價(jià)鑒定其耐冷能力,‘粳44’耐冷性強(qiáng),8.5℃人工低溫脅迫6天后死亡率在25%以下;其次是‘苗110’、‘2-319’和‘華占’;‘源寶占’、‘苗108’耐冷能力中等,‘318’、‘R2168’和‘創(chuàng)豐1號(hào)’等12份材料耐冷性弱;耐冷性強(qiáng)的種質(zhì)中‘華占’、‘2-319’為秈稻,‘苗110’為秈粳交后代,可應(yīng)用于秈稻耐冷育種。

水稻;耐冷;種質(zhì);篩選;苗期

0 引言

水稻是僅次于小麥的世界第二大糧食作物,全世界水稻播種面積約為1.5億hm2,其中10%以上稻作面積受到低溫冷害威脅[1]。水稻歷來(lái)是中國(guó)的第一大農(nóng)作物,中國(guó)約2/3的人口以稻米為主食,水稻生產(chǎn)對(duì)中國(guó)的糧食安全舉足輕重。水稻低溫冷害,通常指水稻遭遇生育最低臨界溫度以下的低溫影響,從而導(dǎo)致水稻不能正常生長(zhǎng)發(fā)育而減產(chǎn)。近年來(lái)極端氣候頻現(xiàn),因冷害而造成的水稻減產(chǎn)損失愈演愈烈,糧食安全十分嚴(yán)峻。因此,解決水稻冷害問(wèn)題對(duì)于世界糧食安全、促進(jìn)水稻產(chǎn)區(qū)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。

有關(guān)水稻冷害,國(guó)內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了大量研究。不僅從直觀的形態(tài)上明確了水稻對(duì)冷害的響應(yīng)[2-3],有關(guān)低溫脅迫會(huì)導(dǎo)致水稻膜損傷,從而導(dǎo)致細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯變化;低溫不僅能破壞非酶防御系統(tǒng),還能破壞酶防御系統(tǒng)等的生理研究報(bào)道很多[4-7]。水稻耐冷基因定位研究如火如荼地進(jìn)行,并取得了可喜的成績(jī)[8-10]。隨著生物技術(shù)的發(fā)展,如今水稻耐冷研究已經(jīng)深入到轉(zhuǎn)錄組學(xué)以及代謝組學(xué)水平[11-12]。有關(guān)耐低溫脅迫鑒定方法、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以及預(yù)防措施研究也不少[2]。然而,解決水稻冷害最有效、最環(huán)保、最經(jīng)濟(jì)的途徑是培育和種植耐冷新品種,而耐冷品種選育的首要關(guān)鍵是耐冷種質(zhì)的挖掘與利用。雖然水稻耐冷基因報(bào)道不少,但是水稻耐冷能力是個(gè)數(shù)量性狀,受多基因控制,轉(zhuǎn)移單個(gè)基因往往只能獲得部分抗性甚至基因沉默,達(dá)不到耐冷育種的目標(biāo),而且轉(zhuǎn)基因水稻還存在生物安全性評(píng)估問(wèn)題,迄今為止未見(jiàn)有耐冷基因成功應(yīng)用于生產(chǎn)的報(bào)道。目前報(bào)道的耐冷水稻種質(zhì)多為野生稻或粳稻,其農(nóng)藝性狀較差,難以直接利用,而秈稻耐冷種質(zhì)資源則較為稀缺。

根據(jù)前人的研究結(jié)果,水稻苗期耐冷性與芽期、孕穗期、開(kāi)花期的耐冷性相關(guān),可以將苗期的耐冷性鑒定結(jié)果作為生育后期耐冷性評(píng)價(jià)的重要參考指標(biāo)[13-14]。筆者自2013年起,選擇農(nóng)藝性狀好的粳稻和秈稻栽培稻為供試材料,開(kāi)展水稻秧苗期耐冷種質(zhì)資源篩選,以期獲得農(nóng)藝性狀好、易于利用的強(qiáng)耐冷水稻種質(zhì)資源,為耐冷育種提供耐冷親本。同時(shí),以耐冷新種質(zhì)為材料,發(fā)掘優(yōu)異耐冷基因(QTL),開(kāi)發(fā)與耐冷性緊密連鎖的分子標(biāo)記或者基因功能標(biāo)記研究,為耐冷分子育種提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1供試材料

以‘麗江新團(tuán)黑谷’為耐冷對(duì)照,以‘桂99’為冷敏感對(duì)照,從“廣東省水稻種質(zhì)資源庫(kù)”以及南方稻區(qū)收集的150份材料中初步篩選出田間有一定耐冷性、農(nóng)藝性狀較好的18份作為本試驗(yàn)的供試材料,列于表1。

表1 供試材料及人工氣候箱低溫脅迫處理時(shí)期(2013,廣州)

1.2試驗(yàn)方法

試驗(yàn)采取盆栽直播。泥土的處理:碎土→過(guò)篩→消毒(高壓鍋滅菌)→拌肥→稱(chēng)量土(保證每個(gè)盆的土量相同)。種子浸種24 h后發(fā)芽,每個(gè)供試材料選取發(fā)芽較好且接近一致的種子52粒播于長(zhǎng)×寬×高=56 cm×38 cm× 8 cm的塑料盆中,每行播13粒、每1個(gè)材料播4行。幼苗進(jìn)入人工氣候箱前在網(wǎng)室自然條件下生長(zhǎng)。播種期為3月25日,處理時(shí)期為播種后20天(三葉一心期,見(jiàn)表1)。低溫脅迫處理方法為人工氣候箱低溫脅迫,低溫脅迫設(shè)置:根據(jù)廣東生產(chǎn)上歷年?duì)€秧的實(shí)際情況,模擬廣東重爛秧天氣[2],采取日均溫8.5℃進(jìn)行人工低溫脅迫,人工氣候箱具體設(shè)置見(jiàn)表2。處理時(shí)間分別為3天和6天。

調(diào)查內(nèi)容:每個(gè)供試材料每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù),每個(gè)重復(fù)用記號(hào)筆標(biāo)記10株用于定株調(diào)查,調(diào)查內(nèi)容包括葉齡、株高、幼苗死亡率。進(jìn)箱當(dāng)天未入箱處理時(shí)調(diào)查1次、入箱處理3天、6天分別調(diào)查一次。幼苗死亡率調(diào)查在低溫處理3天、6天后移至原來(lái)生長(zhǎng)的網(wǎng)室條件下,讓其恢復(fù)生長(zhǎng)10天進(jìn)行。

表2 苗期低溫脅迫人工氣候箱溫、光、濕設(shè)置(2013,廣州)

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì):用EXCEL整理試驗(yàn)數(shù)據(jù),方差分析用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1自然氣候條件下各供試材料的生長(zhǎng)狀況

早春的低溫、陰雨是影響水稻秧苗生長(zhǎng)、高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的重要限制因素之一[15]。由于試驗(yàn)場(chǎng)所與廣州氣象站(23o08′N(xiāo),113o19′E,海拔11.3 m)空中直線距離不到1 km,本試驗(yàn)采用廣州氣象站的氣象因素記錄作為本研究的氣象資料。對(duì)照廣州氣象站本試驗(yàn)期間的氣象資料,本試驗(yàn)期間氣候條件適宜水稻生長(zhǎng)[16]。因此,本試驗(yàn)中的低溫脅迫僅為人工氣候箱處理的單一效應(yīng),不存在自然災(zāi)害天氣引起的疊加效應(yīng)。

2.2各供試材料植株形態(tài)對(duì)低溫脅迫的響應(yīng)

水稻的整個(gè)生育期都會(huì)受到低溫脅迫的影響,不同生育時(shí)期對(duì)低溫脅迫的響應(yīng)不同。營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期發(fā)生的低溫脅迫,導(dǎo)致水稻生長(zhǎng)緩慢并受阻,葉片變黃、變白,分蘗減少[2]。秧苗期水稻地上部的發(fā)育進(jìn)程主要反應(yīng)在主莖葉片數(shù)和株高的增長(zhǎng)上。研究結(jié)果顯示:①水稻秧苗經(jīng)人工低溫脅迫后,各供試材料的生長(zhǎng)發(fā)育明顯減緩受阻,無(wú)論是低溫脅迫3天還是6天,各供試材料的主莖葉片數(shù)、株高與進(jìn)箱當(dāng)天差異不顯著。②對(duì)心葉高而言,無(wú)論是入箱低溫脅迫3天與進(jìn)箱當(dāng)天相比(F=6.5794>F0.01=2.394),還是低溫脅迫6天與3天相比(F=4.363>F0.01=2.394),各供試材料心葉高增長(zhǎng)差異均達(dá)到極顯著水平。③進(jìn)而對(duì)不同低溫處理時(shí)間各供試材料心葉高增長(zhǎng)量進(jìn)行最小顯著差法(LSD)多重比較,結(jié)果列于表3。由表3可知,‘麗江新團(tuán)黑谷’、‘粳44’、‘苗110’、‘2-319’、‘華占’等材料在低溫脅迫3天或6天,心葉高均增長(zhǎng)明顯,尤其是低溫脅迫6天后,其心葉高增長(zhǎng)量與對(duì)照‘桂99’達(dá)顯著或極顯著水平;‘粳44’在日均溫8.5℃的人工低溫脅迫下其生長(zhǎng)勢(shì)與強(qiáng)耐冷對(duì)照‘麗江新團(tuán)黑谷’相當(dāng)。

2.3低溫脅迫對(duì)供試材料幼苗死亡率的影響及苗期耐冷種質(zhì)資源篩選

表4所列為各供試材料8.5℃人工低溫脅迫3天、6天后移至自然氣候條件下恢復(fù)生長(zhǎng)10天的幼苗死亡率。方差分析結(jié)果顯示:①經(jīng)人工氣候箱低溫脅迫后,不論是處理3天還是6天,各供試材料幼苗死亡率差異達(dá)到極顯著水平。②所有供試材料中,對(duì)照‘麗江新團(tuán)黑谷’耐冷性最強(qiáng),8.5℃人工低溫脅迫6天后幼苗死亡率僅14.43%;其次是‘粳44’,8.5℃人工低溫脅迫6天后死亡率僅23.37%;秈稻‘2-319’、‘華占’和秈粳交后代品種‘苗110’耐冷性也較強(qiáng),8.5℃人工低溫脅迫3天后死亡率在30%以下。

3 討論與結(jié)論

3.1耐冷種質(zhì)資源篩選進(jìn)展

人工氣候箱低溫脅迫會(huì)導(dǎo)致水稻秧苗生長(zhǎng)發(fā)育明顯減緩受阻;總體來(lái)說(shuō),粳稻的耐低溫脅迫能力強(qiáng)于秈稻,這與前人的研究報(bào)道一致[17,18]。然而,中國(guó)南方稻區(qū)以秈稻為主,秈稻耐冷育種進(jìn)展緩慢,其主要瓶頸是缺乏秈稻耐冷種質(zhì)資源。特別近年來(lái),極端氣候頻現(xiàn),水稻冷害問(wèn)題尤為突出。培育耐冷品種是解決冷害最直接有效的方法,然而耐冷種質(zhì)資源是耐冷種質(zhì)創(chuàng)制和新品種培育的基礎(chǔ)。

表3 低溫脅迫處理后各供試材料心葉高增長(zhǎng)情況

表4 低溫脅迫后各供試材料幼苗死亡率%

續(xù)表4

本研究采取人工氣候箱低溫脅迫法(日均溫8.5℃),以低溫脅迫后的幼苗死亡率為主要指標(biāo),輔以供試材料植株形態(tài)對(duì)低溫脅迫的響應(yīng)結(jié)果,篩選出耐冷粳稻材料1個(gè)(‘粳44’),耐冷秈稻材料2個(gè)(‘華占’、‘2-319’),耐冷秈粳交后代品種1個(gè)(‘苗110’)。這不僅豐富了粳稻耐冷種質(zhì)資源,而且填補(bǔ)了秈稻耐冷資源的空缺,為秈稻耐冷育種和水稻冷害基礎(chǔ)理論研究提供了堅(jiān)實(shí)的物質(zhì)支撐。

3.2水稻苗期耐冷鑒定方法及評(píng)價(jià)

目前有關(guān)水稻耐冷性鑒定的方法主要有兩種,一是利用自然低溫條件進(jìn)行鑒定,如分期播種,異地、垂直帶播種,冷水灌溉等;二是人工氣候法,如人工氣候箱低溫脅迫。利用自然低溫條件進(jìn)行鑒定簡(jiǎn)單易行,但自然狀態(tài)下是否發(fā)生低溫或當(dāng)?shù)蜏匕l(fā)生時(shí)的強(qiáng)度、持續(xù)時(shí)間均無(wú)法人為控制,試驗(yàn)條件很難控制,無(wú)法重復(fù),所得數(shù)據(jù)材料精確度較差。雖然人工氣候箱使用成本大,但人工氣候箱低溫脅迫可以彌補(bǔ)自然低溫鑒定這一局限,鑒定結(jié)果重復(fù)可靠[2]。本研究采用人工氣候法,嚴(yán)格控制溫度、濕度和光強(qiáng),進(jìn)行水稻耐冷種質(zhì)資源篩選,結(jié)果精確可靠。

有關(guān)水稻苗期耐冷評(píng)價(jià)指標(biāo)很多,生理指標(biāo)如葉綠素含量,根系活力,過(guò)氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化物酶(POD)等酶活性變化,丙二醛(MDA)含量變化、電解質(zhì)滲透率等等,形態(tài)指標(biāo)有葉片的萎蔫程度、幼苗死亡率、低溫處理后的苗高、苗重,以及葉片卷枯程度及失綠程度等。生理指標(biāo)測(cè)定繁瑣,重復(fù)性差;眾多形態(tài)指標(biāo)中,幼苗死亡率鑒定水稻苗期耐冷性不僅直觀,而且度量簡(jiǎn)單、精確客觀[19]。

3.3耐冷種質(zhì)資源的利用

本試驗(yàn)篩選出的苗期耐冷種質(zhì)‘苗110’是秈粳交后代,其農(nóng)藝性狀表現(xiàn)秈稻的特點(diǎn),又遺傳了粳稻的耐冷特點(diǎn),這種秈粳雜交的方法創(chuàng)制耐冷材料,為秈稻耐冷種質(zhì)創(chuàng)制展示了一條非常有前景的途徑。

本研究篩選到耐冷秈稻品種‘華占’,是近年來(lái)中國(guó)新選育的優(yōu)良秈型三系恢復(fù)系。該恢復(fù)系不僅恢復(fù)力和一般配合力好,而且株型挺拔、米質(zhì)優(yōu)、高抗稻瘟病、適應(yīng)性廣,目前為止已有大批由其配制的雜交稻組合在生產(chǎn)上應(yīng)用。本研究結(jié)果顯示華占具有強(qiáng)耐冷性,這可能也是決定‘華占’配制的雜交稻組合具有適應(yīng)性廣特點(diǎn)的重要因素之一。因此,在遺傳育種中,對(duì)耐冷種質(zhì)的培育與應(yīng)用具有重要意義。另一方面,用‘華占’、‘2-319’、‘苗110’、‘麗江新團(tuán)黑谷’和‘粳44’等耐冷種質(zhì)進(jìn)行耐冷遺傳分析及基因鑒定研究,為探尋粳稻和秈稻耐冷機(jī)制,并通過(guò)分子標(biāo)記輔助育種手段將耐冷基因轉(zhuǎn)到水稻優(yōu)良品種中,培育秈型耐冷水稻新品種提供了非常好的種質(zhì)資源。

3.4結(jié)論

秧苗期日均8.5℃的人工氣候箱低溫脅迫會(huì)導(dǎo)致水稻秧苗生長(zhǎng)發(fā)育明顯減緩受阻,各供試材料對(duì)低溫脅迫的響應(yīng)差異達(dá)極顯著水平。就心葉高而言,無(wú)論是入箱低溫脅迫3天與進(jìn)箱當(dāng)天相比(F=6.5794>F0.01=2.394),還是低溫脅迫6天與3天相比(F=4.363>F0.01=2.394),各供試材料心葉高增長(zhǎng)差異均達(dá)極顯著水平。經(jīng)人工氣候箱低溫脅迫后,不論是處理3天還是6天,各供試材料幼苗死亡率差異達(dá)極顯著水平;總體上粳稻的耐冷性強(qiáng)于秈稻。以低溫脅迫3天和6天后各供試材料自然氣候條件下恢復(fù)生長(zhǎng)10天的幼苗死亡率為指標(biāo)評(píng)價(jià)鑒定其耐冷能力,‘粳44’耐冷性強(qiáng),8.5℃人工低溫脅迫6天后死亡率在25%以下;其次是‘苗110’、‘2-319’和‘華占’;‘源寶占’、‘苗108’耐冷能力中等,‘318’、‘R2168’、‘創(chuàng)豐1號(hào)’、‘耐寒2號(hào)’、‘R55’、‘金昌B’、‘湘中秈3號(hào)’、‘R308’、‘穗1225’、‘2-358’、‘合美占’、‘創(chuàng)香5號(hào)’、‘桂99’等耐冷性弱;其中‘華占’、‘2-319’為秈稻,‘苗110’為秈粳交后代,可應(yīng)用于秈稻耐冷育種。

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Selection of Rice Resources Resistant to Cold at Seedling Stage

Zhou Xinqiao1,2,Chen Dagang1,2,Li Lijun1,Liu Chuanguang1,2,Li Juchang1,Chen Youding1,2

(1Rice Research Institute,Guangdong Academy of Agricultural Sciences,Guangzhou 510640,Guangdong,China;2Guangdong Key Laboratory of New Technology in Rice Breeding,Guangzhou 510640,Guangdong,China)

For exploring cold tolerant gene resource in rice,especially in indica rice,to promote cold tolerant rice breeding,18 germplasms,which were selected from 150 accessions collected from"rice germplasm repository of Guangdong Province"and the rice region in southern China,were used in the cold resistant rice germplasm screening test at the seedling stage.‘Lijiangxintuanheigu’was employed as cold-tolerant control and‘Gui 99’was employed as cold-sensitive control in the test.The test for screening cold tolerant germplasms was carried out in phytotron by low temperature stress(PGV-36,the mean daily temperature 8.5℃)method.The results showed that:(1)the growth and development of the tested materials slowed significantly under the low temperature stress,even stopped as the treatment went on;(2)under low temperature stress for 3 d or 6 d,the death rate of the tested materials was different significantly but the cold tolerance of japonica rice on the whole was better than that of the indica rice;(3)the death rate of the tested materials,which continued to grow 10 days under the natural environment after 3d or 6d low temperature stress,was employed as the evaluation index of cold tolerance,the cold tolerance of‘Jing 44’was the strongest,as its death rate was less than 25%after 8.5℃low temperature stress for 6 days,the second was‘Miao 110’,‘2-319’and‘Huazhan’,the cold tolerance of‘Yuanbaozhan’and‘Miao 108’was medium,but that of the other 12 germplasms such as‘318’,‘R2168’and‘Chuangfeng 1’,etc was weak.In the cold

tolerant germplasms,‘Huazhan’and‘2-319’was indica rice,‘Miao 110’was derived from the cross of indica and japonica,they all could be applied to cold tolerance breeding in indica rice.

Rice;Cold Tolerance;Germplasm;Screening;Seedling Stage

S511

A論文編號(hào):cjas16040023

廣東省主體科研機(jī)構(gòu)創(chuàng)新能力建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)“水稻生理生態(tài)與栽培研究平臺(tái)建設(shè)”(粵科規(guī)財(cái)字[2014]208號(hào))。

周新橋,女,1976年出生,湖南安化人,助理研究員,碩士,研究方向?yàn)樗旧鷳B(tài)育種。通信地址:510640廣州市天河區(qū)五山街道金穎東一街3號(hào)廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所,Tel:020-87596275,E-mail:13428860986@139.com。

陳友訂,男,1962年出生,廣東饒平人,研究員,博士,主要從事水稻遺傳育種研究。通信地址:510640廣州市天河區(qū)五山街道金穎東一街3號(hào)廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所,Tel:020-87596275,E-mail:chenyoud@21cn.com。

2016-04-20,

2016-06-21。

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