汪登如，曹景鋒，謝麗君，閆曉霞，嚴(yán)玉霖

（1.昆明愛(ài)美森寵物醫(yī)院，云南 昆明 650224；2.公安部昆明警犬基地，云南 昆明 650201；3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650201）

犬骨髓干細(xì)胞對(duì)犬白細(xì)胞減少癥的治療效果觀察

汪登如1，曹景鋒2，謝麗君3，閆曉霞3，嚴(yán)玉霖3

（1.昆明愛(ài)美森寵物醫(yī)院，云南 昆明 650224；2.公安部昆明警犬基地，云南 昆明 650201；3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650201）

犬白細(xì)胞減少癥是犬臨床中常見(jiàn)的危害較大的疾病。白細(xì)胞可分為粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，其中粒細(xì)胞分為嗜酸性、嗜堿性、嗜中性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞分為T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞。白細(xì)胞的主要功能是承擔(dān)動(dòng)物機(jī)體的免疫任務(wù)，白細(xì)胞減少（白細(xì)胞總數(shù)＜6×103μL）就可使機(jī)體免疫功能下降。引起犬白細(xì)胞減少癥的主要原因是病毒性感染（如犬細(xì)小病毒和犬瘟熱病毒）和藥物原因（如抗生素、抗病毒藥和解熱鎮(zhèn)痛藥等）［1］。犬發(fā)生白細(xì)胞減少癥時(shí)，臨床表現(xiàn)可見(jiàn)精神不振，全身無(wú)力，患病毒性腸炎時(shí)可見(jiàn)病犬流涎，體溫升高，食欲廢絕，惡心嘔吐，部分病例可見(jiàn)肺部或泌尿系統(tǒng)感染；發(fā)展為急性粒細(xì)胞缺乏時(shí)，死亡率可高達(dá)80%，常因迅速發(fā)生敗血癥或膿毒血癥而突然死亡［2］。

骨髓干細(xì)胞主要包括造血干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞，其中造血干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞，在體內(nèi)外具有很強(qiáng)的增殖能力和多向分化潛能［3-4］。造血干細(xì)胞可以用于造血和免疫功能重建，已在臨床上用于血液腫瘤根治、實(shí)體瘤輔助治療以及遺傳性疾病、免疫異常癥、難治性感染等多種類型的疾病治療；間充質(zhì)干細(xì)胞在適宜刺激下能在體內(nèi)外分化為脂肪、軟骨、骨、肌腱、肝、腎、神經(jīng)、皮膚、肌肉等十余種成熟細(xì)胞和組織［5］。目前骨髓干細(xì)胞在臨床疾病治療中的應(yīng)用顯示出巨大的科學(xué)意義和實(shí)用價(jià)值。雖然骨髓干細(xì)胞在人類再生醫(yī)學(xué)的研究和應(yīng)有中發(fā)揮著巨大的作用，但在犬類疾病的治療中尚無(wú)相關(guān)報(bào)道，本文就犬骨髓干細(xì)胞對(duì)犬白細(xì)胞減少癥的臨床治療效果進(jìn)行探討，為犬骨髓干細(xì)胞的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。

1　材料與方法

1.1犬骨髓干細(xì)胞由北京京蒙科寵生物科技有限公司提供，商品名為普優(yōu)特。

1.2臨床病例的選擇選擇2014年10月至2015年12月來(lái)昆明愛(ài)美森寵物醫(yī)院就診的患犬，由犬細(xì)小病毒感染繼發(fā)白細(xì)胞減少或缺乏病例10例，其中3例發(fā)展至白細(xì)胞無(wú)法檢出；由藥物原因引起的白細(xì)胞減少癥5例。

1.3干細(xì)胞治療方法治療劑量：中小型犬用量每次106～107個(gè)，大型犬每次用量為108～109個(gè)。治療方法：對(duì)于犬細(xì)小病毒感染的病例按常規(guī)的抗病毒和補(bǔ)液進(jìn)行治療后，將犬骨髓干細(xì)胞用注射用生理鹽水稀釋，通過(guò)靜脈移植（注射）于患犬體內(nèi)，每天1次，連續(xù)3次；由藥物原因引起的白細(xì)胞減少癥時(shí)立即停止使用藥物，注射用生理鹽水稀釋，靜脈注射，每天1次，連續(xù)兩次。

1.4臨床治療效果觀察觀察治療后的精神狀態(tài)、體溫、食欲，臨床癥狀和血象指標(biāo)。

2　結(jié)果

2.1干細(xì)胞治療由細(xì)小病毒導(dǎo)致白細(xì)胞減少癥的病例犬細(xì)小病毒感染病例：就診時(shí)患犬精神沉郁，鼻鏡干燥，口腔黏膜蒼白，心律不齊，腸音消失，腹部觸診疼痛性呻吟，反復(fù)嘔吐，排血便，個(gè)別患犬體溫升高至39.6℃～40.5℃，用膠體金試紙條檢測(cè)細(xì)小病毒抗原陽(yáng)性。病例按常規(guī)的抗病毒和補(bǔ)液進(jìn)行治療的同時(shí)，靜脈移植犬骨髓干細(xì)胞，治療當(dāng)天患犬精神有所好轉(zhuǎn)，第2天白細(xì)胞數(shù)量上升，第3天恢復(fù)至正常，結(jié)合犬細(xì)小病毒感染的常規(guī)治療，迅速治愈，療程短，效果好，且無(wú)任何不良反應(yīng)。典型病例如表1所示。

2.2犬骨髓干細(xì)胞對(duì)犬白細(xì)胞減少癥的治愈率

用犬骨髓干細(xì)胞治療犬細(xì)小病毒感染繼發(fā)白細(xì)胞減少或缺乏病例10例，其中3例發(fā)展至白細(xì)胞無(wú)法檢出，1例死亡（患病5 d后入院），故應(yīng)用犬骨髓干細(xì)胞治療由犬細(xì)小病毒引起的白細(xì)胞減少或缺乏癥的治愈率為90%；全部治愈由藥物原因引起的白細(xì)胞減少癥5例，治愈率為100%。對(duì)治愈出院后的患犬進(jìn)行跟蹤隨訪，14只治愈犬均存活，沒(méi)有復(fù)發(fā)病現(xiàn)象，健康狀態(tài)良好。

表1　犬骨髓干細(xì)胞治療犬細(xì)小病毒病時(shí)的血象變化

3　討論

干細(xì)胞治療技術(shù)作為一種新型的疾病治療手段，克服了臨床常規(guī)治療的局限性，為人類和動(dòng)物疾病的治療打開(kāi)了全新的思路，以成體干細(xì)胞移植為代表的細(xì)胞療法在生長(zhǎng)發(fā)育、免疫治療、組織修復(fù)、基因治療、造血支持療法等領(lǐng)域中得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用。成體干細(xì)胞在生理狀態(tài)下完成組織的更新，在病理狀態(tài)下實(shí)現(xiàn)對(duì)組織的修復(fù)，后一過(guò)程包括動(dòng)員、歸巢、分化3個(gè)環(huán)節(jié)。其可能的作用機(jī)制如下［6］：（1）自分化作用：干細(xì)胞作為新興的種子細(xì)胞是一種具有多向分化潛能的細(xì)胞。受損器官或成年個(gè)體組織損傷的機(jī)體，能發(fā)出特異的信號(hào)，將干細(xì)胞招募到受損部位并發(fā)揮修復(fù)功能；（2）旁分泌作用：干細(xì)胞能夠分泌大量細(xì)胞因子，以間充質(zhì)干細(xì)胞為例，其分泌因子在功能上主要可分為免疫調(diào)節(jié)、抗細(xì)胞凋亡、血管發(fā)生、支持干/祖細(xì)胞的增殖與分化、化學(xué)趨化、抗瘢痕六大類。它們通過(guò)自分化或旁分泌的方式，改善機(jī)體局部微環(huán)境，促進(jìn)內(nèi)源性干細(xì)胞向傷口部位的遷移和分化，挽救瀕臨凋亡的細(xì)胞，從而達(dá)到修復(fù)組織和治療疾病的目的［7］。

犬細(xì)小病毒（CPV）是1977年美國(guó)Eugster從患出血性腸炎病犬糞便中新發(fā)現(xiàn)的一種小DNA病毒，可使犬發(fā)生嚴(yán)重的出血性腸炎綜合征或/和心肌炎，發(fā)病率為50%～100%，死亡率10%～50%，是對(duì)養(yǎng)犬業(yè)危害極大的疫病之一［8］。目前臨床中主要以抗病毒治療輔助補(bǔ)液治療為主，如不及時(shí)就診，表現(xiàn)為白細(xì)胞減少，貧血，呼吸困難，脫水，最終導(dǎo)致急性衰竭而死亡。我們對(duì)患犬進(jìn)行常規(guī)治療的同時(shí)，利用體外分離培養(yǎng)的骨髓干細(xì)胞進(jìn)行靜脈移植，取得了令人滿意的治愈率。從血象指標(biāo)的快速恢復(fù)和臨床癥狀的減輕進(jìn)行評(píng)估，本文中應(yīng)用犬骨髓干細(xì)胞治療犬細(xì)小病毒感染導(dǎo)致白細(xì)胞減少或缺乏癥的治愈率為90%，治療由藥物原因引起的白細(xì)胞減少癥的治愈率為100%，治愈時(shí)間短，能夠快速提高患犬的生活質(zhì)量。結(jié)果表明，骨髓干細(xì)胞有很強(qiáng)的可塑性，可通過(guò)靜脈注射進(jìn)入血液循環(huán)，隨血液循環(huán)分布全身各組織。在體內(nèi)的血液中造血微環(huán)境的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)作用下，骨髓干細(xì)胞分化成白細(xì)胞，紅細(xì)胞，淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，恢復(fù)血象，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。另外損傷的組織可釋放干細(xì)胞趨化因子，隨血液循環(huán)到組織中的骨髓干細(xì)胞被招募到受損組織，在特定微環(huán)境中誘導(dǎo)分化為功能細(xì)胞和參與腸道黏膜組織、心肌組織和肝臟組織等損傷組織的修復(fù)，從而達(dá)到治愈的目的。

在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家的寵物醫(yī)院，犬干細(xì)胞在老年犬的保健和疾病治療等方面已經(jīng)得到較為廣泛地應(yīng)用。本文利用犬骨髓干細(xì)胞成功治愈犬白細(xì)胞減少癥在國(guó)內(nèi)尚屬首次，安全有效可行，為國(guó)內(nèi)開(kāi)展犬干細(xì)胞在犬類疾病治療的研究與應(yīng)用奠定了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)，提供了可靠的技術(shù)支撐，具有重要的科學(xué)意義和巨大臨床應(yīng)用價(jià)值。相信在不遠(yuǎn)的將來(lái)，犬干細(xì)胞的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用將對(duì)犬病保健和治療領(lǐng)域帶來(lái)巨大的變革，犬類的健康將會(huì)得到極大的促進(jìn)和提高。

志謝：感謝美國(guó)堪薩斯州立大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院提供技術(shù)支持與熱心幫助。

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S858.292

B

0529-6005（2016）09-0077-02

2015-06-18

汪登如（1975-），男，獸醫(yī)師，碩士，從事小動(dòng)物疾病臨床工作，E-mail：19772002@qq.com

嚴(yán)玉霖，E-mail：yanyulin333@163.com