王芳，龔宏偉

（江陰市紅十字血站，江蘇214400）

江陰市無(wú)償獻(xiàn)血者RhD陰性血型調(diào)查

王芳，龔宏偉

（江陰市紅十字血站，江蘇214400）

目的了解江蘇省江陰市RhD陰性無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型、血清學(xué)表型和不規(guī)則抗體分布情況，建立并完善RhD陰性獻(xiàn)血者電子數(shù)據(jù)庫(kù)。方法應(yīng)用血清學(xué)方法對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者血標(biāo)本進(jìn)行RhD陰性篩查和確認(rèn)、血清學(xué)表型鑒定、不規(guī)則抗體篩選。結(jié)果江陰市無(wú)償獻(xiàn)血者18 059份標(biāo)本中共確認(rèn)RhD陰性82份，陰性率為0.45%，在ABO血型中的分布為A＞O＞B＞AB，其中檢出不規(guī)則抗體1份（1.22%）；RhD陰性表型以ccdee和Ccdee為主，依次為ccdee［51（62.20%）］、Ccdee［22（26.83%）］、CCdee［4（4.88%）］、ccdEe［3（3.66%）］、CcdEe［2（2.44%）］。結(jié)論掌握RhD陰性獻(xiàn)血者的ABO血型、血清學(xué)表型、不規(guī)則抗體分布規(guī)律，對(duì)稀有血型患者的緊急用血及降低免疫性輸血反應(yīng)，提高輸血安全具有重要意義。

ABO血型系統(tǒng)；Rh-Hr血型系統(tǒng)；表型；供血者；血型抗原；普查；不規(guī)則抗體；江蘇

1　資料與方法

1.1資料

1.1.1標(biāo)本來(lái)源江蘇省江陰市2015年1～12月18 059份無(wú)償獻(xiàn)血者乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝血液標(biāo)本。

1.1.2試劑與儀器抗-A、抗-B血型定型試劑（河北醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程中心）；（IgM+IgG）抗-D［Millipore（UK）Limited］；（IgG）抗-D、（IgM）抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e、多特異性抗人球蛋白（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司）；改良凝聚胺試劑（中山生科試劑儀器有限公司）；抗體篩選紅細(xì)胞（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司）；血型血清學(xué)專(zhuān)用離心機(jī)（日本KUBOTA KA-2200型）。

1.2方法（IgM+IgG或IgM）抗-D試劑采用微板法對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行初篩。初篩陰性者取其獻(xiàn)血標(biāo)本紅細(xì)胞50 μL加生理鹽水洗滌3次，配成2%～5%的紅細(xì)胞懸液，用不同廠家或不同批次的（IgM+IgG或IgG）抗-D試劑3～5種做間接抗球蛋白試驗(yàn)（IAT）確認(rèn)，排除變異型D和不完全D的可能，同時(shí)必須做試劑對(duì)照試驗(yàn)或直接抗球蛋白試驗(yàn)（DAT）。確認(rèn)為RhD陰性者進(jìn)一步用（IgM）抗-C、抗-c、抗-E、抗-e試劑進(jìn)行表型分型。最后使用抗體篩選細(xì)胞，采用凝聚胺法對(duì)RhD陰性標(biāo)本血清進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選。所有操作過(guò)程嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。

2　結(jié)果

2.1江陰市RhD陰性無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型分布

18059份EDTA-K2抗凝血液標(biāo)本共確認(rèn)RhD陰性82份，陰性率為0.45%，在ABO血型中的分布為A＞O＞B＞AB，檢出不規(guī)則抗體1份（1.22%）。見(jiàn)表1。

表1　江陰市RhD陰性無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型分布

2.2江陰市RhD陰性無(wú)償獻(xiàn)血者血清學(xué)表型分布

在確認(rèn)的82份RhD陰性無(wú)償獻(xiàn)血者中，其血清學(xué)表型依次為ccdee、Ccdee、CCdee、ccdEe、CcdEe。見(jiàn)表2。

表2　江陰市RhD陰性無(wú)償獻(xiàn)血者血清學(xué)表型分布

3　討論

江陰市獻(xiàn)血人群RhD陰性比例為0.45%（82/1 8059），RhD陰性血型占人群中的比例符合我國(guó)漢族人群RhD陰性為0.2%～0.5%［4］的比例，其中表型依次為ccdee（62.20%）、Ccdee（26.83%）、CCdee（4.88%）、ccdEe（3.66%）、CcdEe（2.44%），以ccdee和Ccdee為主，與朱海峰等［5］和潘海平等［6］的報(bào)道一致。本次調(diào)查未檢出ccdEE、CcdEE、CCdEe表型。82份RhD陰性獻(xiàn)血者的ABO血型分布為：A型26份（31.71%），B型19份（23.17%），O型21份（25.61%），AB型16份（19.51%），基本符合江浙、皖、閩（華東型）地區(qū)普通人群中ABO血型（A型占30.0%，B型占25.3%，O型占38.1%，AB型占6.6%）的分布規(guī)律，AB型RhD陰性血所占比例相對(duì)較高。

Rh血型是因最初在恒河猴和多數(shù)人體內(nèi)的紅細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)存在的抗原物質(zhì)而得名，國(guó)際輸血協(xié)會(huì)將其命名為RH，004。其基因位于第1對(duì)染色體，包括RHD和RHCE 2個(gè)結(jié)構(gòu)基因，RHD和RHCE基因緊密連鎖，結(jié)構(gòu)基本一致，均主要由10個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子組成，第1～7個(gè)外顯子各自編碼50～60個(gè)氨基酸，而第8～10個(gè)外顯子編碼余下的58個(gè)氨基酸。目前，Rh血型系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)的等位基因已有280多個(gè)，主要具有臨床意義的抗原有D、C、E、c、e。Rh抗原有很強(qiáng)的免疫原性，其抗原強(qiáng)弱順序依次為D＞E＞C＞c＞e［7］，均顯示劑量效應(yīng)。Rh血型抗原只存在于紅細(xì)胞膜上，不存在于其他組織細(xì)胞膜及體液、分泌液中。隨著基因分子技術(shù)的不斷發(fā)展，其越來(lái)越多的運(yùn)用到Rh血型表型分子中，但血清學(xué)分型技術(shù)具有簡(jiǎn)便、快速、不需要特殊儀器設(shè)備等特點(diǎn)，目前仍起著舉足輕重、不可替代的作用。

本次調(diào)查主要針對(duì)健康RhD陰性獻(xiàn)血者，血清中檢測(cè)出不規(guī)則抗體1例。隨著現(xiàn)代輸血技術(shù)的發(fā)展，由ABO血型不相容引起的急性溶血性輸血反應(yīng)已顯著減少。近年研究表明，不規(guī)則抗體是引起遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的主要原因［8］，且不規(guī)則抗體以Rh血型系統(tǒng)產(chǎn)生的居多。Rh血型抗體最初是從一名發(fā)生嚴(yán)重新生兒溶血病和溶血性輸血反應(yīng)的產(chǎn)婦血液中發(fā)現(xiàn)的。天然產(chǎn)生Rh抗體者極少，即IgM類(lèi)抗體少見(jiàn)，有時(shí)也可見(jiàn)到IgM類(lèi)抗-E等抗體。Rh抗體主要通過(guò)免疫途徑產(chǎn)生，如妊娠、輸血等產(chǎn)生，絕大多數(shù)是IgG類(lèi)，Rh抗體在體內(nèi)可持續(xù)存在數(shù)年，如果再次接觸該抗原，再次免疫應(yīng)答可使抗體迅速產(chǎn)生并在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到高峰，該抗體最適反應(yīng)溫度是37℃。雖然D抗原免疫原性最強(qiáng)，但抗-D抗體檢出頻率并不高，這是因?yàn)楝F(xiàn)已對(duì)Rh陰性個(gè)體輸注Rh陰性血液。目前臨床上抗-E抗體是最常見(jiàn)的抗體，其次為抗-c抗體［9］，有些Rh抗體常一起發(fā)生，如抗-D和抗-C、抗-C和抗-e、抗-E和抗-c等常共存于同一血清內(nèi)。Rh血型不合可引起嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)和新生兒溶血病［10］，甚至威脅患者生命。所以，對(duì)RhD陰性獻(xiàn)血者進(jìn)行不規(guī)則抗體檢測(cè)對(duì)安全輸血有著極其重要的意義。

冰凍紅細(xì)胞又稱(chēng)冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞，是采用甘油作為冰凍保護(hù)劑深低溫保存，紅細(xì)胞代謝速度取決于保存溫度，把保存溫度降至使紅細(xì)胞代謝率達(dá)到幾乎停止時(shí)，紅細(xì)胞代謝消耗少，從而可避免代謝毒性產(chǎn)物的積累，達(dá)到延長(zhǎng)紅細(xì)胞保存期的目的［11］。但血液在零度以下會(huì)結(jié)冰，在細(xì)胞內(nèi)外形成冰晶，破壞細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞外滲透壓升高，促進(jìn)細(xì)胞脫水，最終引起細(xì)胞的解體死亡。所以，必須在冰凍過(guò)程中加甘油等防凍劑，冰凍后根據(jù)臨床需要再進(jìn)行解凍、洗滌去甘油處理，是長(zhǎng)期保存紅細(xì)胞的一種理想方法。采供血機(jī)構(gòu)主要運(yùn)用于RhD陰性紅細(xì)胞的保存，保存期可長(zhǎng)達(dá)10年。本血站主張采集之日起7 d內(nèi)的RhD陰性紅細(xì)胞加甘油保護(hù)劑-65℃以下冰凍保存，調(diào)節(jié)了江陰地區(qū)RhD陰性稀有血型血液供求的不平衡，為需要RhD陰性稀有血型輸血的患者提供了方便，保證了緊急狀況下RhD陰性稀有血液的供應(yīng)。

本血站對(duì)RhD陰性獻(xiàn)血者開(kāi)展了C、c、E、e抗原檢測(cè)，并通過(guò)計(jì)算機(jī)系統(tǒng)給每位RhD陰性獻(xiàn)血者建立了一個(gè)完整的Rh血型電子檔案。每年召開(kāi)稀有血型座談會(huì)，節(jié)假日和生日通過(guò)平臺(tái)自動(dòng)發(fā)送祝福，隨時(shí)更新RhD陰性志愿者名單庫(kù)，很好地保留了RhD陰性獻(xiàn)血者。國(guó)外許多國(guó)家開(kāi)展了為長(zhǎng)期輸血者進(jìn)行Rh配型服務(wù)。作者認(rèn)為，配型Rh輸血在目前經(jīng)驗(yàn)積累階段，最好篩選CcEe完全同型的供者血液［12］。當(dāng)前，國(guó)家并未要求對(duì)獻(xiàn)血者和患者進(jìn)行Rh血型分型，在《血站技術(shù)操作規(guī)程（2012版）》和2000年衛(wèi)生部《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》中，均僅要求檢查RhD血型，判為RhD陽(yáng)性或陰性，未規(guī)定檢測(cè)RhCcEe抗原。在臨床輸血時(shí)，這使供血者和受血者RhCcEe抗原不合發(fā)生免疫反應(yīng)而產(chǎn)生同種抗體，導(dǎo)致患者日后輸血面臨更大的風(fēng)險(xiǎn)。所以，對(duì)需要長(zhǎng)期、反復(fù)多次輸血的患者，如各種白血病、自身免疫性溶血性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血等患者，有必要進(jìn)行Rh血型分型，選擇Rh表型同型輸注。Rh配型輸血還可以結(jié)合其他血型抗原，預(yù)防不規(guī)則抗體的產(chǎn)生，減少輸血風(fēng)險(xiǎn)，保證臨床輸血安全。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2016.20.034［1］。Rh血型系統(tǒng)非常復(fù)雜，且所含有的抗原數(shù)目最多，共50個(gè)［2］，但臨床上最主要、最常見(jiàn)的是C、c、D、E、e 5種抗原，其中免疫原性最強(qiáng)的是D抗原。醫(yī)學(xué)上通常將紅細(xì)胞膜上含有D抗原者稱(chēng)為RhD陽(yáng)性，而紅細(xì)胞膜上缺乏D抗原者則稱(chēng)為RhD陰性［3］。RhD陰性血型通常被稱(chēng)為稀有血型，Rh抗原一般都顯示劑量效應(yīng)，純合子的抗原性要強(qiáng)于雜合子。為進(jìn)一步完善RhD陰性獻(xiàn)血者檔案，作者就江陰地區(qū)RhD陰性無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型、血清學(xué)表型和不規(guī)則抗體情況進(jìn)行了調(diào)查分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

B

1009-5519（2016）20-3190-02 Rh血型系統(tǒng)是人類(lèi)紅細(xì)胞血型系統(tǒng)中最為復(fù)雜且最具多態(tài)性的系統(tǒng)，在臨床輸血中其重要性?xún)H次于ABO血型系統(tǒng)

（2016-06-23）