姚菊霞

（定西市動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅定西　743000）

甘肅省首屆獸醫(yī)系統(tǒng)征文選登

豬四種疫苗分點同步免疫與單苗免疫的效果對比試驗

姚菊霞

（定西市動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅定西743000）

為了研究豬多苗分點同時免疫效果，探索一種切實可行的動物防疫新方法，以此提高基層動物防疫水平。本研究將口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征和豬鏈球菌4種疫苗進行不同組合試驗，即分別進行單苗、兩兩組合、三三組合、4種疫苗同時分點注射。試驗分為15組，每組20頭，用正向間接血凝試驗和ELISA方法檢測免疫抗體。結(jié)果表明：口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征和豬鏈球菌4種疫苗分點同時注射產(chǎn)生的抗體水平，與單苗注射相比，差異不顯著（P＞0.05），疫苗注射后產(chǎn)生的抗體效價相對較高且穩(wěn)定，不同疫苗間產(chǎn)生的抗體干擾和拮抗作用不明顯，且抗體合格率均在70%以上，達到了國家規(guī)定的免疫要求，因此該免疫接種方法可在實際工作中推廣應(yīng)用。

豬；疫苗；不同組合；分點注射；免疫抗體；合格率

近年來，隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，養(yǎng)豬業(yè)的規(guī)模和數(shù)量逐年增長，與此同時發(fā)生動物疫病的風險也在增加，部分地區(qū)出現(xiàn)了多種豬病的流行，且不斷有新病出現(xiàn)［1］，從流行范圍和危害程度來看，豬口蹄疫、豬瘟和豬繁殖與呼吸綜合征仍然是目前危害養(yǎng)豬業(yè)的主要動物疫病。再加上其他畜禽重大疫病的流行和人畜共患病的暴發(fā)，使得動物疫病的防控形勢異常嚴峻，也給各級畜牧部門如何做好動物防疫工作提出新的挑戰(zhàn)和要求。加強動物疫病防控，提高動物疫病防制技術(shù)水平是搞好畜牧養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)的關(guān)鍵，研究和推廣這項技術(shù)，對提高養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟效益，促進畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展有著十分重要的意義。

國家對動物疫病防控工作高度重視，實施強制免疫的動物疫苗種類較多且逐年增加，目前正用于強制免疫的豬疫苗主要有口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征等3種疫苗，采用“一畜一針，分次注射”傳統(tǒng)免疫方法，不但增加了基層獸醫(yī)工作者的工作量，加大了防疫工作難度，而且從近幾年甘肅省通渭縣免疫抗體監(jiān)測情況來看，豬口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征等疫病的免疫抗體效價較低。為了探索和創(chuàng)新動物免疫新方法，改進和提高動物防疫水平，2013～2015年，研究組在甘肅省通渭縣開展了豬O型口蹄疫苗、豬瘟苗、豬繁殖與呼吸綜合征苗、豬鏈球菌苗分組分點同時免疫試驗，從而確定4種疫苗分點同時免疫的效果。

1　材料與方法

1.1試驗動物

在甘肅省通渭縣轄區(qū)隨機選擇5個存欄量在100頭左右的養(yǎng)豬場，選取2～3月齡未經(jīng)任何疫苗免疫的健康豬300頭作為試驗豬，免疫前對試驗豬進行基礎(chǔ)抗體滴度測定，所選試驗豬豬瘟抗體檢測陰性，口蹄疫感染抗體檢測陰性，免疫抗體滴度低于1∶16。

1.2試驗疫苗

豬口蹄疫O型滅活疫苗（O/MYA98/BY/2010株），由中農(nóng)威特生物科技股份有限公司生產(chǎn)，批號為H141060J；豬瘟活疫苗（脾淋源），由山東綠都生物科技有限公司生產(chǎn)，批號為1412053；豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗（NVDC-JXA1株），由瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號為141216；豬鏈球菌病2型滅活疫苗，由上海海利生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，批號為20140609。

1.3檢測試劑

O型口蹄疫抗體檢測試劑盒，購自中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所，批號為20150511201；豬瘟抗體檢測試劑盒，購自中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所，批號為20150512202；LSI豬繁殖和呼吸綜合征抗體檢測試劑盒，購自北京天之泰生物科技有限公司，批號為5-TTVETPRA-049；豬鏈球菌抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法），購自深圳市綠詩源生物技術(shù)有限公司，批號為20150501。

1.4試驗分組

將從5個養(yǎng)豬場選取的300頭試驗豬，分別編號為1～300號，隨機分為15組，每組20頭，依次為第1組1～20號、第二組2～40號……第15組281～300號。

1.5免疫方法

按照表1所示，進行1～4種疫苗注射。單苗和2種疫苗免疫的注射部位為左右頸部；3種疫苗和4種疫苗同時分點免疫的注射部位為頸部左右和臀部左右各注射一針。對藍耳病相關(guān)組，30 d采血后進行二次免疫。注射時嚴格消毒，規(guī)范操作。免疫劑量：口蹄疫疫苗2 ml/頭、豬瘟活疫苗2 ml/頭、藍耳病滅活疫苗2 ml/頭、豬鏈球菌苗2 ml/頭。

表1　試驗豬疫苗注射分組

1.6臨床不良反應(yīng)觀察

所有試驗豬在免疫注射后臨床觀察1～10 d，主要觀察豬的精神和采食狀況、體溫是否正常和是否有其他嚴重不良反應(yīng)等。

1.7免疫抗體檢測

分別于免疫后15 d、30 d、45 d和60 d，經(jīng)前腔靜脈采血，分離血清，用于抗體檢測。

1.7.1 O型口蹄疫抗體檢測采用正向間接血凝試驗，具體操作參照試劑盒說明書進行。判定標準：抗體效價≥1∶32，抗體陽性；抗體效價＜1∶32，抗體陰性。1.7.2豬瘟抗體檢測采用正向間接血凝試驗，具體操作參照試劑盒說明書進行。判定標準：抗體效價≥1∶32，抗體陽性；抗體效價＜1∶32，抗體陰性。

1.7.3豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測采用間接ELISA方法，具體操作參照試劑盒說明書進行。判定標準：IRPC值＞20.0為抗體陽性；IRPC值≤20.0為抗體陰性。

1.7.4豬鏈球菌病抗體檢測采用ELISA方法，具體操作參照試劑盒說明書進行。判定標準：S/P值≥0.2為抗體陽性；S/P值＜0.2為抗體陰性。

1.8數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

將檢測數(shù)據(jù)按疫苗種類分類統(tǒng)計，口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征和豬鏈球菌病均以抗體陽性率表示，并應(yīng)用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)中單因素隨機分組方法進行方差分析［2］。

2　結(jié)果與分析

2.1臨床觀察

除個別豬只在疫苗注射后24 h內(nèi)出現(xiàn)精神沉郁、體溫升高、慢草不食、飲水少量等現(xiàn)象外，未見其他不良反應(yīng)。出現(xiàn)副反應(yīng)癥狀的主要是口蹄疫疫苗注射組，且與試驗豬的個體情況相關(guān)，個體弱小、營養(yǎng)狀況及體質(zhì)差的反應(yīng)較重；其他組未見明顯臨床癥狀。兩兩組合組、3種疫苗組合組、4種疫苗組合組與單苗注射組間未見明顯差異，平均副反應(yīng)率在10%以下。有臨床癥狀的豬只在48 h內(nèi)陸續(xù)全部恢復正常，未出現(xiàn)過敏死亡情況。

2.2不同免疫組口蹄疫抗體產(chǎn)生情況

從圖1可以看出，除第5組和第13組外其他組試驗于15 d時抗體水平均達到最高值，且維持時間較長，第60 d時仍維持高水平穩(wěn)定態(tài)勢，抗體陽性率均在70%以上。與其他組相比，第1組抗體水平較低，下降較快；第5、6、7、11、12組總體較穩(wěn)定；且第1組與第15組之間差異顯著（P＜0.05），除第1組外其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

2.3不同免疫組豬瘟抗體產(chǎn)生情況

從圖2中可以看出，第8組、14組、15組在15 d時抗體達到最高值，其他各組試驗抗體均于30 d時達到最高值；各組試驗抗體合格率于15 d均已達到了國家規(guī)定70%的免疫要求，且維持時間較長；所有試驗組于60 d時抗體水平均有所下降，但仍大于70%。方差分析顯示，第15組與其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

圖1　口蹄疫抗體檢測結(jié)果

圖2　豬瘟抗體檢測結(jié)果

2.4不同免疫組豬繁殖與呼吸綜合征抗體產(chǎn)生情況

從圖3中可以看出，注射豬繁殖與呼吸綜合征疫苗的8個組在免疫后15 d、30 d內(nèi)的抗體陽性率都為0；二免后45 d檢測時，各組抗體陽性率在75%以上，除第10組和第11組外均達到了峰值，60 d時抗體水平仍保持較高水平穩(wěn)定態(tài)勢。方差分析顯示，第15組與其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

圖3　豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測結(jié)果

2.5不同免疫組豬鏈球菌抗體產(chǎn)生情況

從圖4中可以看出，每組試驗動物在15 d時已產(chǎn)生較高水平的抗體，30～45 d抗體達到最高值，60 d時抗體水平仍維持較高水平，均達到國家規(guī)定免疫要求70%。方差分析顯示，第15組與其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

圖4　豬鏈球菌病抗體檢測結(jié)果

3　討論

豬O型口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬鏈球菌4種疫苗兩兩組合、三三組合、或4種疫苗同時分點注射，平均副反應(yīng)率在10%以下，與單苗注射組相比，臨床癥狀差異不顯著。各種組合組試驗動物出現(xiàn)精神沉郁、慢草不食、體溫變化等一般免疫副反應(yīng)的比例最高約為10%，有發(fā)病臨床癥狀的比例為1%，和傳統(tǒng)免疫相比，并未增加免疫副反應(yīng)。出現(xiàn)副反應(yīng)癥狀的豬只與試驗動物的個體情況相關(guān)，個體弱小、營養(yǎng)狀況及體質(zhì)差的反應(yīng)較重。出現(xiàn)一般副反應(yīng)的豬只，在48 h內(nèi)很快自行恢復，未出現(xiàn)死亡等嚴重副反應(yīng)。

第15組口蹄疫免疫抗體水平高于第1組，維持時間較長且穩(wěn)定，表明口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬鏈球菌病疫苗同時分點免疫組產(chǎn)生的口蹄疫抗體水平要優(yōu)于單苗免疫組［3，4］。豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬鏈球菌病疫苗產(chǎn)生的抗體效價均較高，在抗體產(chǎn)生的整個時期，單苗注射組和4種疫苗同時注射組在抗體達到最高值時抗體合格率均能達到或超過國家規(guī)定的免疫標準70%以上，且維持時間也較長。從本次試驗結(jié)果看出，一畜2苗、3苗、4苗分點同時注射，對抗體不會產(chǎn)生拮抗作用，反而在一定程度上還有促進協(xié)同作用［5，7］。

從本次試驗看出，口蹄疫疫苗產(chǎn)生的抗體穩(wěn)定均勻；豬瘟疫苗產(chǎn)生抗體峰值的時間較遲，一般在免疫后4周左右；豬藍耳病疫苗一次免疫的效果不佳，因此，在以后的防疫工作中，需進行2次加強免疫工作。

口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征和豬鏈球菌苗分點同時免疫對4種抗體的產(chǎn)生沒有顯著影響，沒有增加免疫副反應(yīng)，通過綜合分析，可在實際工作中推廣應(yīng)用“豬一畜多苗多點同時聯(lián)合注射”免疫操作程序。

本次試驗試驗規(guī)模較大，抗體監(jiān)測時間較短，對分點免疫注射后抗體消長規(guī)律未能進行深入跟蹤檢測，需在以后的工作中繼續(xù)深入研究。

［1］崔尚金.2005年我國豬病流行現(xiàn)狀及特點［J］.豬業(yè)科學，2006，（1）：34-35.

［2］唐啟義.實用統(tǒng)計分析及其DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)［M］.北京：科學出版社，2002.

［3］楊慧，封林，黎強，等.口蹄疫和豬瘟疫苗同時免疫注射豬的試驗效果［J］.四川畜牧獸醫(yī)，2008，35（10）：29-31.

［4］華樹明.豬口蹄疫、豬瘟、高致病性藍耳病分點免疫注射效果觀察［J］.獸醫(yī)導刊，2008，（4）：23-24.

［5］沈艷麗，蔡金山，趙志剛，等.豬多種疫苗分點同時注射的免疫抗體檢測試驗［J］.山東畜牧獸醫(yī)，2011，32（1）：9-10.

［6］馬睿麟，蔡金山，沈艷麗，等.豬瘟、口蹄疫、豬繁殖與呼吸綜合征等多種疫苗免疫試驗［J］.畜牧與獸醫(yī)，2010，42（10）：79-82.

［7］張長龍，嚴寶英，賈文孝，等.豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病疫苗有效免疫試驗初探［J］.中國畜牧獸醫(yī)文摘，2009，30（7）：28-29.

［本文獲甘肅省首屆獸醫(yī)系統(tǒng)征文比賽一等獎］

（編輯：趙鵬飛）

S858.28

A

1006-799X（2016）15-0003-03

姚菊霞（1986-），女，甘肅定西人，獸醫(yī)師，主要從事動物疫病防治技術(shù)研究推廣工作。