宋揚(yáng)，李建華，藏玉婷，孫德君，孫曉峰，武嘯

（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司研發(fā)中心黑龍江哈爾濱150069）

鴨病毒性肝炎二價(jià)（1型+3型）卵黃抗體（JS株+SD株）
被動(dòng)免疫持續(xù)期研究

宋揚(yáng)，李建華，藏玉婷，孫德君，孫曉峰，武嘯

（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司研發(fā)中心黑龍江哈爾濱150069）

本實(shí)驗(yàn)取3批實(shí)驗(yàn)室試制的卵黃抗體，按0.5mL/只接種3日齡SPF雛鴨，1.0mL/只接種6日齡SPF雛鴨，分別在注射抗體后1、3、5和7d攻毒，觀察攻毒保護(hù)情況。結(jié)果顯示，3和6日齡雛鴨接種抗體后1～5d注射1型和3型鴨甲型肝炎強(qiáng)毒，攻毒保護(hù)率均在90%以上；雛鴨接種抗體后7d注射鴨甲型肝炎強(qiáng)毒的攻毒保護(hù)率僅在70%～76.7%之間，攻毒對(duì)照組90%～100%死亡，健康對(duì)照組100%健活。說明注射抗體后5d抗體仍能產(chǎn)生良好地保護(hù)作用，而7d后保護(hù)作用大幅減弱。因此，確定鴨病毒性肝炎二價(jià)（1型+3型）卵黃抗體（JS株+SD株）被動(dòng)免疫保護(hù)期為5d。

被動(dòng)免疫保護(hù)期；卵黃抗體；雛鴨

鴨病毒性肝炎 （Duck viral hepatitis，DVH）是由鴨肝炎病毒（duck hepatitis virus，DHV）引起雛鴨的一種以肝臟為主要病理變化的急性、高度致死性傳染病。目前我國(guó)主要流行1型鴨甲型肝炎病毒及“韓國(guó)新型”（即3型鴨甲型肝炎病毒），且發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢(shì)［1］。1～3周齡的雛鴨易感，發(fā)病嚴(yán)重，傳播迅速，死亡率高。雛鴨一般感染病毒后30h發(fā)病，并在2h內(nèi)死亡。早期預(yù)防對(duì)控制本病十分重要，但各種抗菌藥物對(duì)本病均無治療作用，本病的特異性防治依賴于被動(dòng)免疫和主動(dòng)免疫，為了控制該病的發(fā)生，使用卵黃抗體做緊急預(yù)防接種有較大的實(shí)踐意義。但使用卵黃抗體時(shí)，卵黃抗體在機(jī)體內(nèi)的被動(dòng)免疫期是決定卵黃抗體免疫程序的決定性因素［2，3］。為此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)制備的二價(jià)卵黃抗體進(jìn)行了抗體接種雛鴨后不同時(shí)間對(duì)與雛鴨攻毒保護(hù)相關(guān)性研究，以確定鴨肝炎二價(jià)卵黃抗體在雛鴨體內(nèi)的被動(dòng)免疫持續(xù)期。

1　材料與方法

1.1材料

1）鴨病毒性肝炎二價(jià)（1型+3型）卵黃抗體（JS株+SD株）：批號(hào)：201201、201202、201203，由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司制備。

2）檢驗(yàn)用強(qiáng)毒：1型鴨甲型肝炎病毒JS株肝組織懸液，批號(hào)：DHAV-JS-Q-01-2，病毒含量：106.50LD50/0.1mL，規(guī)格：2.0 mL/瓶；3型鴨甲型肝炎病毒SD株肝組織懸液，批號(hào)：DHAV-SD-Q-01-2，病毒含量：106.38LD50/0.1mL，規(guī)格：2.0mL/瓶，由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司分離、鑒定、保管和供應(yīng)。

3）SPF雛鴨：3、6日齡SPF雛鴨，購(gòu)自哈爾濱獸醫(yī)研究所。

4）注射器：1.0mL注射器，購(gòu)自上海達(dá)美醫(yī)用塑料廠。

1.2方法

1.2.13日齡雛鴨被動(dòng)免疫期試驗(yàn)

每批抗體頸部皮下注射3日齡SPF雛鴨80只，每只0.5mL，同時(shí)設(shè)同批3日齡SPF雛鴨80只，每只頸部皮下注射生理鹽水0.5mL作為攻毒對(duì)照；取同批次3日齡SPF雛鴨10只，不注射任何藥品作為健康對(duì)照。在抗體注射后1、3、5和7d，分別從抗體試驗(yàn)組和攻毒對(duì)照組雛鴨中隨機(jī)抽取20只，各分成兩組，每組各10只，一組注射1型鴨甲型肝炎病毒JS株肝組織懸液，每只0.5mL（含100LD50）；另一組注射3型鴨甲型肝炎病毒SD株肝組織懸液，每只0.5mL（含100LD50），各組同條件下隔離飼養(yǎng)10d，記錄結(jié)果。共計(jì)進(jìn)行3批抗體試驗(yàn)。

1.2.26日齡雛鴨被動(dòng)免疫期試驗(yàn)

每批抗體頸部皮下注射6日齡SPF雛鴨80只，每只1.0mL，同時(shí)設(shè)同批6日齡SPF雛鴨80只，每只頸部皮下注射生理鹽水1.0mL作為攻毒對(duì)照；取同批次6日齡SPF雛鴨10只，不注射任何藥品作為健康對(duì)照。在抗體注射后

1、3、5和7d，分別從抗體試驗(yàn)組和攻毒對(duì)照組鴨中隨機(jī)抽取20只，各分成兩組，每組10只，一組注射1型鴨甲型肝炎病毒JS株肝組織懸液，每只0.5mL（含100LD50）；另一組注射3型鴨甲型肝炎病毒SD株肝組織懸液，每只0.5mL（含100LD50），各組同條件下隔離飼養(yǎng)10d，記錄結(jié)果。共計(jì)進(jìn)行3批抗體試驗(yàn)。

2　結(jié)果

不同日齡SPF雛鴨注射抗體后不同時(shí)間攻擊鴨甲型肝炎強(qiáng)毒，攻毒后觀察10d，測(cè)定抗體被動(dòng)免疫期，結(jié)果（見表1～6）。

從表3～6結(jié)果可以看出，3批卵黃抗體注射的3和6日齡SPF雛鴨，注射后1～5d鴨甲型肝炎病毒攻毒保護(hù)率分別為96.7%～100%和100%，攻毒對(duì)照組雛鴨100%死亡；注射后7d，3和6日齡SPF雛鴨的攻毒保護(hù)率分別為73.3%和70%～76.7%，攻毒對(duì)照組雛鴨90%～100%死亡，健康對(duì)照組100%健活。

表1　1型鴨病毒性肝炎抗體預(yù)防持續(xù)時(shí)間測(cè)定結(jié)果

3　討論與結(jié)論

雛鴨注射卵黃抗體后，抗體在體內(nèi)能持續(xù)存在一段時(shí)間，并產(chǎn)生被動(dòng)免疫保護(hù)作用［2］。雛鴨注射抗體后，持續(xù)數(shù)天，間隔不同時(shí)間注射鴨甲型肝炎強(qiáng)毒，結(jié)果3和6日齡雛鴨接種抗體后1～5d注射鴨甲型肝炎強(qiáng)毒的攻毒保護(hù)率均在90%以上；接種抗體后7d注射鴨甲型肝炎強(qiáng)毒的攻毒保護(hù)率僅在70%～76.7%之間，攻毒對(duì)照組90%～100%死亡，健康對(duì)照組100%健活。說明注射抗體后5d抗體仍能產(chǎn)生良好地保護(hù)作用，而7d后保護(hù)作用大幅減弱。因此確定鴨病毒性肝炎二價(jià)（1型+3型）卵黃抗體（JS株+SD株）被動(dòng)免疫保護(hù)期為5d?！觯ň庉嫞黑w曉松）

表2　3型鴨病毒性肝炎抗體預(yù)防持續(xù)時(shí)間測(cè)定結(jié)果

［1］ 范書才，李虹，袁率珍，等.新型鴨肝炎病毒的分離鑒定［J］.中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2009，10: 770-775.

［2］ 殷震，劉景華主編.動(dòng)物病毒學(xué)二版［M］.北京:科學(xué)出版社，1997:294，328，335.

［3］ 白文彬，于康震主編.動(dòng)物傳染病診斷學(xué)［M］.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2002: 144-145

The Passive Immunity Duration Research ofDuck ViralHepatitis Bivalent（Type1+Type3）Yolk Antibody（Strain JS+Strain SD）

Song Yang，Li Jian-hua，Zang Yu-ting，Sun De-jun，Sun Xiao-feng，W u Xiao
（Harbin pharmaceuticalgroup bio-vaccine Co.，Ltd.，Harbin HeiLongjiang 150069）

Three sample of yolk antibodymade in laboratory was inoculated 3-day-old and 6-day-old SPF duckswith 0.5mL and 1.0mL respectively.After the injection of1357 days，the duckswere injected virulent viruses.The resultsshowed that the1 typeand 3 type ofduck hepatitis virus protection ratewas above 90%after 1～5 days injected 3-day-old and 6-day-old SPF ducks.After 7 days，virulent viruses attack protection rate wasonly between 70%～76.7%.The virus controlgroup was90%～100%death and healthy controlgroup was 100%healthy living.Theantibody could produce Good protection after5 daysofnjection and weak dramatically after 7 daysof injection.Therefore，determine the duck viralhepatitisbivalent（1+3）yolk antibody（JSseedlings）+SD passive immunity protection is5 days.

Passive Immunization ofProtection；Yolk Antibodies；Ducklings

表3　3日齡雛鴨3批抗體1型鴨病毒性肝炎預(yù)防持續(xù)時(shí)間統(tǒng)計(jì)結(jié)果

表4　6日齡雛鴨3批抗體1型鴨病毒性肝炎預(yù)防持續(xù)時(shí)間統(tǒng)計(jì)結(jié)果

表5　3日齡雛鴨3批抗體3型鴨病毒性肝炎預(yù)防持續(xù)時(shí)間統(tǒng)計(jì)結(jié)果

表6　6日齡雛鴨3批抗體3型鴨病毒性肝炎預(yù)防持續(xù)時(shí)間統(tǒng)計(jì)結(jié)果

10.3969/j.issn.1008-4754.2016.9.048