陳培源　戴益剛　夏冬梅　劉俊　陳義杰　范博文　孫國(guó)平　吳正榮

摘要：對(duì)肉蓯蓉、艾葉和魚(yú)腥草3種藥材分別利用普通粉碎機(jī)與超微粉碎機(jī)常溫粉碎制得普通粉碎藥粉與超微粉碎藥粉，在掃描電子顯微鏡下觀察藥粉粉末的顯微形貌特征，并利用分光光度法或高效液相色譜法對(duì)其主要功能性成分的溶出率進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，3種藥材的超微粉與普通粉相比粒度明顯變小，且大小均勻；肉蓯蓉超微粉中的毛蕊花糖苷和松果菊苷溶出率都顯著高于普通粉，而其總黃酮溶出率低于普通粉，且差異極顯著；艾葉超微粉中總黃酮溶出率高于普通粉，且差異顯著，但揮發(fā)油含量顯著低于普通粉；與魚(yú)腥草普通粉相比，魚(yú)腥草超微粉中總黃酮、槲皮苷與金絲桃苷的溶出率均顯著提高，而魚(yú)腥草素溶出率沒(méi)有顯著性差異。與普通粉相比，3種藥材超微粉的粒度變小，且較為均一；但由于藥材本身特性不同，主要功能性成分溶出率并沒(méi)有完全增加，因此在藥物生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)根據(jù)不同的藥材性質(zhì)與現(xiàn)實(shí)需要選擇合理的粉碎方法。

關(guān)鍵詞：肉蓯蓉；艾葉；魚(yú)腥草；超微粉碎；功能性成分

中圖分類(lèi)號(hào)：R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2016）08-2039-06

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.08.030

Abstract： The ordinary powder and ultrafine powder of herba cistanches， wormwood leaves and herba houttuyniae was obtained by ordinary grinder and ultrafine grinding mill at room temperature， respectively. The microscopic morphology of the medicinal powder was observed by scanning electron microscopy， and the extraction rate of main functional components was determined by spectrophotometric or high performance liquid chromatography. For the three herbs， the particle size of ultrafine powder was obviously smaller and more uniform than of ordinary powder. For ultrafine powder of herba cistanche， the dissolution rate of verbascoside and echinacoside was significantly higher than ordinary powder， while the total flavonoid content was very significantly lower. For ultrafine powder of wormwood leaves， the dissolution rate of total flavonoids was significantly higher than ordinary powder， while the volatile oil content was significantly lower. For herba houttuyniae ultrafine powder， the dissolution content of total flavonoids， quercetin and hyperoside was significantly higher； while of houttuyfonate was not significantly changed. Due to the characteristics of different herbs， the dissolution rate of main functional components in ultrafine powder and ordinary powder was not the same， thus the grinding method in drug manufacturing practice should be chose depending on the target ingredients and properties of the herb.

Key words： herba cistanches； wormwood leaves； herba houttuyniae； ultrafine grinding ； functional component

肉蓯蓉又名金筍、地精、蓯蓉、大蕓，為列當(dāng)科（Orobanchaceae）肉蓯蓉屬（Cistanche Hoffmg. et Link）植物肉蓯蓉（C.deserticola Y.C.Ma）或管花肉蓯蓉[C. tubulosa（Schenk）Wight]的干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖，主產(chǎn)于內(nèi)蒙古、甘肅、新疆、青海?。ㄗ灾螀^(qū)）等地[1]。近年來(lái)，肉蓯蓉以其獨(dú)特的醫(yī)療、保健功效在治療疾病、保障健康中發(fā)揮著重要的作用。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為肉蓯蓉具有補(bǔ)腎陽(yáng)、益精血、潤(rùn)腸通便的作用，現(xiàn)代藥理研究證明肉蓯蓉及其有效成分具有抗疲勞、抗衰老、抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等藥理作用，因而備受人們的關(guān)注，成為醫(yī)藥領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一[2]。艾葉是菊科（Compositae）蒿屬（Artemisia L.）植物艾草（A. argyi H. Lév. & Vaniot）的干燥葉，中醫(yī)在長(zhǎng)期的實(shí)踐中認(rèn)為艾葉性味苦、溫、辛，有逐寒濕、溫經(jīng)、理氣血、止血、安胎等功效，在臨床上主要用于各類(lèi)殺蟲(chóng)止癢、出血癥、內(nèi)科、婦科等疾?。话~作為治病的藥物有二千年以上的歷史，特別是近年來(lái)對(duì)艾葉的研究逐漸深入，其應(yīng)用范圍也日益拓展。魚(yú)腥草是三白草科（Saururaceae）蕺菜屬（Houttuynia Thunb.）植物蕺菜（H. cordata Thunb.）的全草，是衛(wèi)生部確認(rèn)的“藥食兩用”資源之一，它在食品、藥品等方面都具有較大的開(kāi)發(fā)潛力；作為食品，它富含多種維生素、礦物質(zhì)、蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分，具有良好的食用價(jià)值；作為藥品，又具有抗氧化、抑制細(xì)菌、抗病毒、抗炎癥、抗腫瘤和提高免疫力等生理功效[3]。

超微粉碎是20世紀(jì)80年代迅速發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)高新技術(shù)，其利用機(jī)械動(dòng)力或流體動(dòng)力方法將原材料加工成微米級(jí)或納米級(jí)粉末，從而使粉體粒度極細(xì)，比表面積大，表面活性高，化學(xué)反應(yīng)速度快，物理特性佳，具有獨(dú)特的光、電、磁等性能，應(yīng)用前景廣闊，發(fā)達(dá)國(guó)家超微粉碎技術(shù)己被廣泛應(yīng)用于冶金、食品、醫(yī)藥、化妝品、航空航天等領(lǐng)域[4]。學(xué)者們認(rèn)為中藥超微粉碎是指中藥的細(xì)胞級(jí)微粉碎，其中心粒徑應(yīng)在75 μm以下，細(xì)胞破壁率達(dá)90%以上，并且不改變傳統(tǒng)中藥固有的藥效學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)[5]，明顯提高粉末的均一性和藥材生物利用率，從而改善制劑的質(zhì)量。近年來(lái)，超微粉碎技術(shù)得到了中醫(yī)藥行業(yè)的普遍關(guān)注，發(fā)展十分迅速，己顯露出特有的優(yōu)勢(shì)和廣闊的發(fā)展前景。

目前關(guān)于肉蓯蓉與艾葉的超微粉碎應(yīng)用的深入研究還未見(jiàn)報(bào)道，為此，試驗(yàn)首次探討了超微粉碎技術(shù)對(duì)肉蓯蓉、艾葉的粉碎效果與主要功能性成分溶出率的影響；劉建成等[6]研究了超微粉碎技術(shù)對(duì)魚(yú)腥草中槲皮苷和金絲桃苷溶出率的影響；試驗(yàn)建立了新的可靠檢測(cè)方法對(duì)魚(yú)腥草中槲皮苷和金絲桃苷2種功效成分進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)對(duì)超微粉碎技術(shù)在3種藥材上的應(yīng)用，旨在為中藥材資源的合理開(kāi)發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器與設(shè)備 試驗(yàn)所用儀器主要有WZJ-6BI超微粉碎機(jī)（濟(jì)南倍力粉體技術(shù)工程有限公司）、JSM-6390/LV掃描電子顯微鏡（日本電子株式會(huì)社）、島津LC-10A型高效液相色譜儀（日本島津公司），PDA檢測(cè)器（日本島津公司）、721型可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海光學(xué)儀器一廠）、中藥材粉碎機(jī)（鄭州科豐儀器設(shè)備有限公司）、超聲波提取儀、揮發(fā)油測(cè)定器、0.22 μm微孔濾膜等。

1.1.2 主要藥品與試劑 肉蓯蓉、艾葉、魚(yú)腥草均購(gòu)自天馬中藥飲片科技有限公司，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)品、毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品、魚(yú)腥草素標(biāo)準(zhǔn)品、槲皮苷標(biāo)準(zhǔn)品、金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。試劑有乙醇、甲醇、NaOH、鹽酸、亞硝酸鈉、硝酸鋁、乙腈、乙酸、乙醚、無(wú)水硫酸鈉、2%香草醛硫酸、四丁基溴化鈉、二乙胺、磷酸等，都為分析純。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備

1.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液 將20.0 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（120 ℃烘至恒重）用70%乙醇溶解并定容于100 mL的容量瓶中，充分混勻制成200 μg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品液，-4 ℃下保存，備用[7]。

1.2.2 毛蕊花糖苷和松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液 分別準(zhǔn)確稱(chēng)取毛蕊花糖苷和松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)品各2.0 mg，在10 mL容量瓶中用50%甲醇溶液定容，搖勻后用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，制成200 μg/mL的毛蕊花糖苷和松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)品液，-4 ℃下保存濾液，備用[8]。

1.2.3 魚(yú)腥草素標(biāo)準(zhǔn)品溶液 準(zhǔn)確稱(chēng)取用P2O5干燥至恒重的魚(yú)腥草素標(biāo)準(zhǔn)品8.7 mg，置于100 mL容量瓶中，用0.2 mol/L NaOH適量使之溶解，加水至刻度，搖勻。用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，制成87 μg/mL魚(yú)腥草素標(biāo)準(zhǔn)品液， -4 ℃下保存濾液，備用。

1.2.4 槲皮苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液 槲皮苷標(biāo)準(zhǔn)品在120 ℃下干燥4 h后，準(zhǔn)確稱(chēng)量1.0 mg，置于25 mL容量瓶中，加80%乙醇∶25%鹽酸=4∶1溶解并定容，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，制成40 μg/mL槲皮苷標(biāo)準(zhǔn)品液，-4 ℃下保存濾液，備用。

1.2.5 金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液 取適量金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品，使用甲醇溶解配制成1.0 mg/mL溶液，用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，制成1.0 mg/mL金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品液，-4 ℃下保存濾液，備用。

1.3 藥材普通粉與超微粉的制備與電鏡下顯微結(jié)構(gòu)觀察

分別取適量的肉蓯蓉、艾葉和魚(yú)腥草于中藥材粉碎機(jī)中粉碎，過(guò)100目篩，得到的粉體稱(chēng)為普通粉，留樣待檢；普通粉進(jìn)一步投入WZJ-6BI超微粉碎機(jī)中粉碎，過(guò)300目篩得超微粉，留樣待檢。分別取3種藥材的普通粉與超微粉各少許，鋪于掃描電子顯微鏡樣品臺(tái)上，噴金鍍膜后置電鏡下觀察不同粉體的結(jié)構(gòu)及表面形態(tài)。

1.4 藥材普通粉與超微粉中總黃酮溶出率測(cè)定

黃酮類(lèi)化合物在肉蓯蓉、艾葉和魚(yú)腥草3種藥材中含量較高，在臨床應(yīng)用中具有保護(hù)心血管系統(tǒng)、抗腫瘤、抗氧化、降血糖、抗菌、抗病毒、殺蟲(chóng)等多種藥理活性[7]，是這3種藥材的主要功能性成分之一。試驗(yàn)以蘆丁為黃酮類(lèi)化合物的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行藥材中總黃酮溶出率的測(cè)定。

1.4.1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 試驗(yàn)分別準(zhǔn)確量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，置于7個(gè)25 mL容量瓶中，加70%乙醇5 mL，充分混勻后加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻后室溫（25 ℃）下放置6 min，再加入10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻并放置6 min，再加入4% 的NaOH溶液10 mL，搖勻，用70%乙醇定容。放置15 min后，以不加蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的空白瓶為對(duì)照，利用分光光度計(jì)于λ=510 nm處測(cè)定OD值。以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)、以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，求出線性相關(guān)系數(shù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4.2 肉蓯蓉普通粉與超微粉中總黃酮溶出率測(cè)定 分別準(zhǔn)確稱(chēng)取5.0 g肉蓯蓉普通粉與超微粉，按1∶30的料液比加入70%乙醇，超聲（功率250 W，頻率35 kHz）提取30 min，浸提2次，合并濾液，準(zhǔn)確量取濾液2 mL，70%乙醇定容至50 mL，-4 ℃條件下保存，待檢。取待檢樣品，利用分光光度計(jì)于λ=510 nm處測(cè)定OD值，再利用試驗(yàn)所得標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出肉蓯蓉的總黃酮含量，總黃酮溶出率按下式計(jì)算：

溶出率=m1/m0×100% （1）

式中，m1（g）為利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出的總黃酮含量；m0（g）為稱(chēng)取樣品的質(zhì)量；溶出率（%）為溶出的總黃酮質(zhì)量與所用樣品質(zhì)量的百分比。每個(gè)樣品連續(xù)測(cè)3次，取平均值。

1.4.3 艾葉普通粉與超微粉中總黃酮溶出率測(cè)定 分別準(zhǔn)確稱(chēng)取5.0 g 艾葉普通粉與超微粉，按1∶40的料液比加入70%乙醇，室溫（25 ℃）浸提40 min，超聲（功率250 W，頻率35 kHz）提取15 min，過(guò)濾。準(zhǔn)確量取濾液1 mL，70%乙醇定容至10 mL，-4 ℃條件下保存，待檢。取待檢樣品，利用分光光度計(jì)于λ=510 nm處測(cè)定樣品的OD值，再利用試驗(yàn)所得標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出艾葉的總黃酮含量，總黃酮溶出率按式（1）計(jì)算。

1.4.4 魚(yú)腥草普通粉與超微粉中總黃酮溶出率測(cè)定 分別準(zhǔn)確稱(chēng)取5.0 g魚(yú)腥草普通粉與超微粉，按1∶25的料液比加入70 %乙醇，超聲（功率600 W，頻率35 kHz）提取40 min，過(guò)濾，準(zhǔn)確量取濾液1 mL，70%乙醇定容至50 mL，-4 ℃條件下保存，待檢。取待檢樣品，用分光光度計(jì)于λ=510 nm處測(cè)定樣品的OD值，再利用試驗(yàn)所得標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出魚(yú)腥草的總黃酮含量，總黃酮溶出率按式（1）計(jì)算。

1.5 肉蓯蓉藥材普通粉與超微粉中毛蕊花糖苷和松果菊苷溶出率測(cè)定

以松果菊苷和毛蕊花糖苷為代表的苯乙醇苷類(lèi)化合物是肉蓯蓉中主要的活性成分，具有增強(qiáng)免疫力與記憶力、抗衰老、保護(hù)心腦血管系統(tǒng)等多種功能[2]，測(cè)定二者的溶出率對(duì)肉蓯蓉藥材質(zhì)量控制至關(guān)重要，試驗(yàn)以HPLC法測(cè)定2種物質(zhì)的溶出率。

分別準(zhǔn)確稱(chēng)取肉蓯蓉普通粉與超微粉樣品各1.0 g置于100 mL棕色容量瓶中，準(zhǔn)確加入50% 甲醇50 mL，密封搖勻后稱(chēng)重，浸泡30 min，超聲處理（功率250 W，頻率35 kHz）40 min，待冷卻后再稱(chēng)重；加50%甲醇補(bǔ)足減失量，混勻后靜置[8]，取上清液用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，取適量樣品為供試品溶液，待測(cè)。

分別準(zhǔn)確吸取毛蕊花糖苷和松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液與供試品溶液各10 μL，在以下色譜條件下測(cè)定供試品中毛蕊花糖苷和松果菊苷的濃度，色譜柱為Kromasil 100-5C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相是甲醇∶乙腈∶1 %乙酸=15∶10∶75（體積分?jǐn)?shù)），流速0.6 mL/min，紫外線檢測(cè)波長(zhǎng)為334 nm，柱溫28 ℃。普通粉與超微粉每個(gè)樣品連續(xù)測(cè)3次，計(jì)算二者的溶出率，求平均溶出率。

1.6 艾葉普通粉與超微粉的總揮發(fā)油溶出率測(cè)定

從艾葉中提取的揮發(fā)油具有抑菌、平喘、鎮(zhèn)咳、抗過(guò)敏、護(hù)肝利膽、促進(jìn)消化以及激活補(bǔ)體等作用[9]，而且是艾葉起抑菌作用的最主要成分，因此揮發(fā)油是艾葉的主要功能性成分，測(cè)定其含量對(duì)于有效開(kāi)發(fā)艾葉資源具有重要意義[10]。

1.6.1 艾葉總揮發(fā)油對(duì)照品液制備 試驗(yàn)用水蒸氣蒸餾法[8]測(cè)定艾葉的總揮發(fā)油溶出率。取艾葉普通粉300 g，均分為3份，分別置于3個(gè)1 000 mL 蒸餾瓶中，加水800 mL，加沸石，連接揮發(fā)油測(cè)定器，置電熱套中加熱，等溶液沸騰到第一滴液體滴下時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，提取4 h，可見(jiàn)揮發(fā)油提取器液面上層有綠色揮發(fā)油析出，收集、合并總揮發(fā)油于小燒杯中，加無(wú)水硫酸鈉2 g脫水，傾入5 mL 量瓶中得總揮發(fā)油，備用。準(zhǔn)確稱(chēng)取總揮發(fā)油52 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇定容搖勻，即得濃度為1.04 mg/mL的對(duì)照品液。

1.6.2 艾葉總揮發(fā)油對(duì)照品液線性回歸方程 分別量取對(duì)照品液0.25、0.50、0.75、1.00、1.50 mL，都置于10 mL容量瓶中，加甲醇5 mL，再加顯色劑2%香草醛硫酸溶液0.5 mL，加甲醇至刻度，搖勻，顯色30 min，以甲醇為空白，于λ=546 nm處測(cè)定OD值。以揮發(fā)油濃度為橫坐標(biāo)，以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，求出線性相關(guān)系數(shù)，計(jì)算線性回歸方程。

1.6.3 艾葉普通粉與超微粉中總揮發(fā)油溶出率測(cè)定 準(zhǔn)確稱(chēng)定艾葉普通粉與超微粉樣品各5 g，置于250 mL蒸餾瓶中，加水100 mL，電熱套上蒸餾至揮發(fā)油不再增加為止，揮發(fā)油測(cè)定器中蒸餾液用乙醚萃取3次，每次使用乙醚10 mL，合并萃取液。室溫下靜置2 h，使乙醚自然揮去，殘留物加甲醇溶解并定容至10 mL，搖勻，即得供試品液。準(zhǔn)確量取供試品液1.0 mL，置于10 mL 容量瓶中，加甲醇5 mL，再加顯色劑2%香草醛硫酸溶液0.5 mL，再用甲醇定容搖勻，顯色30 min，以甲醇為空白，于λ=546 nm處測(cè)定OD值，按1.6.2回歸方程計(jì)算出揮發(fā)油的含量，再計(jì)算溶出率。普通粉與超微粉每個(gè)樣品連續(xù)測(cè)3次，求平均溶出率。

1.7 魚(yú)腥草普通粉與超微粉中魚(yú)腥草素、槲皮苷和金絲桃苷溶出率測(cè)定

魚(yú)腥草鮮草含揮發(fā)油約0.05%，主要成分為魚(yú)腥草素（癸酰乙醛），是其抗菌與抗病毒的主要活性成分[11]。魚(yú)腥草含有的槲皮苷和金絲桃苷2種黃酮類(lèi)化合物對(duì)機(jī)體早期的炎癥及其導(dǎo)致的毛細(xì)血管通透性增高、滲出及腫脹等癥狀均有顯著的抑制作用[12]，對(duì)于心腦血管系統(tǒng)正常功能的維持也有較強(qiáng)的輔助作用。魚(yú)腥草素、槲皮苷、金絲桃苷3種活性成分溶出率測(cè)定對(duì)于魚(yú)腥草藥材品質(zhì)鑒定至關(guān)重要。

1.7.1 魚(yú)腥草普通粉與超微粉中魚(yú)腥草素的提取及溶出率測(cè)定 ①繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別準(zhǔn)確量取魚(yú)腥草標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋?zhuān)ㄈ?，搖勻。在以下色譜條件下測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品溶液峰面積，色譜條件為色譜柱Kromasil 100-5C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相是乙腈∶0.01 mol/L四丁基溴化鈉∶二乙胺=30∶40∶0.028（體積分?jǐn)?shù)），流速1.0 mL/min，紫外線檢測(cè)波長(zhǎng)為283 nm，柱溫28 ℃。以標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，求出線性相關(guān)系數(shù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。②供試品液制備。準(zhǔn)確稱(chēng)取普通粉與超微粉樣品各2.0 g，置于100 mL 容量瓶中，用0.2 mol/L NaOH溶液溶解定容，搖勻，超聲（功率250 W，頻率30 kHz）處理30 min，待冷卻后過(guò)濾。準(zhǔn)確量取濾液1 mL置于5 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾，濾液為供試品，備用。③魚(yú)腥草素溶出率測(cè)定。分別準(zhǔn)確吸取魚(yú)腥草素標(biāo)準(zhǔn)品液與供試品液各10 μL，在以上所述色譜條件下測(cè)定供試品中的魚(yú)腥草素濃度，并計(jì)算溶出率。普通粉與超微粉每個(gè)樣品連續(xù)測(cè)3次，求平均溶出率。

1.7.2 魚(yú)腥草普通粉與超微粉中槲皮苷的提取及溶出率測(cè)定 ①繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別取槲皮苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋?zhuān)ㄈ?，搖勻。根據(jù)以下色譜條件測(cè)峰面積，色譜條件為色譜柱Kromasil 100-5C18（4.6 mm×250 mm，5μm），流動(dòng)相是甲醇∶0.4%磷酸=45∶55（體積分?jǐn)?shù)），流速1.0 mL/min，紫外線檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm，柱溫28 ℃。以標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，求出線性相關(guān)系數(shù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。②供試品液制備。分別準(zhǔn)確稱(chēng)取魚(yú)腥草普通粉與超微粉各2.0 g，置于錐形瓶中，使用80%乙醇+25%鹽酸（4∶1）溶解，定容至50.0 mL，浸泡20 min，超聲（功率250 W，頻率30 kHz）提取45 min，待冷卻后過(guò)濾。再用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，保存濾液備用。③魚(yú)腥草槲皮苷溶出率測(cè)定。取適量濾液樣品，在以上所述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，并根據(jù)其所得標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算槲皮苷的溶出率，普通粉與超微粉每個(gè)樣品連續(xù)測(cè)3次，求平均溶出率。

1.7.3 魚(yú)腥草普通粉與超微粉中金絲桃苷的提取及溶出率測(cè)定 ①繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別取金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋?zhuān)ㄈ?，搖勻。根據(jù)以下色譜條件測(cè)峰面積，色譜條件為色譜柱Kromasil 100-5C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相是乙腈∶0.1%磷酸=14∶86（體積分?jǐn)?shù)），流速1.0 mL/min，紫外線檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm，柱溫40 ℃。以標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，求出線性相關(guān)系數(shù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。②供試品液制備。分別準(zhǔn)確稱(chēng)取魚(yú)腥草普通粉與超微粉各0.4 g，置于50 mL 容量瓶中，加甲醇30 mL，超聲（功率250 W，頻率30 kHz）處理30 min，冷卻至室溫，加甲醇至刻度，過(guò)濾，用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，保存濾液備用。③魚(yú)腥草金絲桃苷溶出率測(cè)定。取適量濾液樣品，在以上所述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，并根據(jù)其所得標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算金絲桃苷的溶出率，普通粉與超微粉每個(gè)樣品連續(xù)測(cè)3次，求平均溶出率。

1.8 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析采用Microsoft Office Excel 2003和SAS 9.1軟件處理，利用LSD法檢驗(yàn)差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 掃描電鏡下的顯微結(jié)構(gòu)

肉蓯蓉的普通粉與超微粉在掃描電鏡下的顯微結(jié)構(gòu)分別見(jiàn)圖1、圖2，艾葉的普通粉與超微粉在掃描電鏡下的顯微結(jié)構(gòu)分別見(jiàn)圖3、圖4，魚(yú)腥草的普通粉與超微粉在掃描電鏡下的顯微結(jié)構(gòu)分別見(jiàn)圖5、圖6。從圖1、圖3、圖5可見(jiàn)，3種藥材的普通粉顆粒大小形狀不規(guī)則，粒徑極不均一；從圖2、圖4、圖6可見(jiàn)，3種藥材的超微粉顆粒大小均勻，粒度明顯變小，已很難觀察到明顯的原藥材特征，組織粉碎率明顯提高。

2.2 肉蓯蓉普通粉與超微粉主要功能性成分的體外溶出率

肉蓯蓉普通粉與超微粉主要功能性成分的體外溶出率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。從表1可見(jiàn)，肉蓯蓉超微粉中的毛蕊花糖苷和松果菊苷的溶出率比肉蓯蓉普通粉分別提高了100%和19%，差異都顯著（P<0.05）；但超微粉中的總黃酮溶出率低于普通粉，只有普通粉的43%，兩者差異極顯著（P<0.01）。

2.3 艾葉普通粉與超微粉主要功能性成分的體外溶出率

艾葉普通粉與超微粉主要功能性成分的體外溶出率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可見(jiàn)，艾葉超微粉中的總黃酮溶出率高于艾葉普通粉，前者比后者增加約45%，差異顯著（P<0.05）；但超微粉的揮發(fā)油溶出率大大低于普通粉，不到普通粉溶出率的30%，差異也顯著（P<0.05）。

2.4 魚(yú)腥草普通粉與超微粉主要功能性成分的體外溶出率

魚(yú)腥草普通粉與超微粉主要功能性成分的體外溶出率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可見(jiàn)，魚(yú)腥草超微粉中的總黃酮、槲皮苷與金絲桃苷溶出率均高于普通粉，分別比普通粉提高了214.08%、33.33%、16.13%，差異均顯著（P<0.05），其中總黃酮溶出率差異極顯著（P<0.01）；而普通粉與超微粉中的魚(yú)腥草素溶出率差不多，差異不顯著（P>0.05）。

3 討論

3.1 總黃酮測(cè)定標(biāo)示物的選定

黃酮類(lèi)化合物泛指2個(gè)具有酚羥基的苯環(huán)（A環(huán)與B環(huán)）通過(guò)中央3個(gè)碳原子相互連結(jié)而成的一系列化合物，其基本母核為2-苯基色原酮?？傸S酮有很強(qiáng)的紫外線吸收能力，紫外線檢測(cè)器對(duì)這2個(gè)共軛體系的測(cè)定結(jié)果是具有非常明顯的吸收；而蘆丁可以充分滿足這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)共軛體系結(jié)構(gòu)，所以用黃酮中最有代表性的蘆丁作為共軛體系結(jié)構(gòu)的標(biāo)示物，即總黃酮測(cè)定標(biāo)示物選用蘆丁是非常合適的。

3.2 肉蓯蓉、艾葉和魚(yú)腥草3種藥材溶出率改變的原因

超微粉碎技術(shù)可以減小粉末粒度，增大其表面積，有利于中藥材肉蓯蓉有效成分毛蕊花糖苷和松果菊苷的溶出；但其超微粉總黃酮測(cè)定值極顯著低于普通，可能是因?yàn)榭傸S酮中的某些成分分解或流失造成的，其內(nèi)在因素有待考察。對(duì)于此類(lèi)藥材粉碎要根據(jù)其功效需要選擇合適的方法。

對(duì)艾葉進(jìn)行超微粉碎有利于黃酮類(lèi)化合物的溶出，但超微粉碎之后揮發(fā)油測(cè)定值低于普通粉，由于超微粉碎增大了細(xì)胞破壁率，使得本身?yè)]發(fā)性較強(qiáng)的揮發(fā)油向外界擴(kuò)散得更快，造成其流失。因此在對(duì)此類(lèi)揮發(fā)性較強(qiáng)的藥材是否進(jìn)行超微粉碎要從實(shí)際需要出發(fā)；若進(jìn)行超微粉碎，粉碎之后一定要注意選擇適宜的貯存條件，降低揮發(fā)量，以保證品質(zhì)。

試驗(yàn)中魚(yú)腥草超微粉碎后金絲桃苷溶出率提高了16.13%，槲皮苷溶出率提高了33.33%，低于劉建成等[6]對(duì)魚(yú)腥草超微粉碎后金絲桃苷溶出率提高34.45%、槲皮苷溶出率提高40.21%的結(jié)果，可能與魚(yú)腥草飲片品種、產(chǎn)地及粉碎工藝有關(guān)；但與魚(yú)腥草普通粉相比，魚(yú)腥草超微粉中總黃酮、槲皮苷與金絲桃苷的溶出率均顯著或極顯著提高，而魚(yú)腥草素溶出率沒(méi)有顯著性差異，這與劉建成等[6]的報(bào)道是一致的?？梢哉J(rèn)為魚(yú)腥草的超微粉碎有利于魚(yú)腥草中主要有效成分的溶出，對(duì)于此類(lèi)功效成分物質(zhì)穩(wěn)定的藥材適宜選擇超微粉碎方法。

試驗(yàn)結(jié)果表明，與普通粉碎藥粉相比，超微粉碎藥粉的粒度變小，且較為均一，但由于藥材本身特性不同，主要功能性成分溶出率并沒(méi)有完全增加，因此在藥材開(kāi)發(fā)的生產(chǎn)實(shí)踐中，應(yīng)根據(jù)不同的藥材性質(zhì)與現(xiàn)實(shí)需要選擇合理的粉碎方法。

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