李茂業(yè)，陳德鑫,2，林華峰，李世廣，潘 敬，吳圣勇

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黃綠綠僵菌懸乳劑與低劑量阿維菌素對(duì)Q型煙粉虱的聯(lián)合防治作用

李茂業(yè)1，陳德鑫1,2，林華峰1，李世廣1，潘 敬1，吳圣勇3

（1安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，合肥 230036；2中國(guó)煙草總公司青州煙草研究所，山東青島 266001；3中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所植物病蟲(chóng)害生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100193）

【目的】煙粉虱（）是重要的入侵農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)，已對(duì)眾多常規(guī)殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生了高度抗性。論文針對(duì)煙粉虱的高效治理問(wèn)題，通過(guò)室內(nèi)和田間聯(lián)合應(yīng)用昆蟲(chóng)病原真菌與化學(xué)農(nóng)藥，評(píng)價(jià)其是否對(duì)煙粉虱防治具有協(xié)同增效作用，為煙粉虱的有效防控提供新的途徑?！痉椒ā吭谇捌谠囼?yàn)已經(jīng)篩選到一株對(duì)Q型煙粉虱毒力較高的黃綠綠僵菌（）菌株Mf96基礎(chǔ)上，先于實(shí)驗(yàn)室條件下采用噴霧法，在3個(gè)濃度梯度（1.0×108、1.0×107、1.0×106個(gè)孢子/mL）的黃綠綠僵菌（Mf96）分生孢子懸乳劑中添加1.8%阿維菌素WP，分別配制成含0、15、30、45和60 μg·mL-1劑量的1.8%阿維菌素WP溶液，并噴到Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)體表，檢測(cè)其死亡率。在體視顯微鏡下記錄單位面積內(nèi)的孢子沉積數(shù)量。田間試驗(yàn)中，分別將黃綠綠僵菌Mf96菌株懸乳劑（1.0×108個(gè)孢子/mL）和1.8%阿維菌素WP（60 μg·mL-1）單用和混用后噴施于NC95煙草上，評(píng)價(jià)其對(duì)煙粉虱的防治效果。【結(jié)果】實(shí)驗(yàn)室條件下，Mf96菌株懸乳劑從第4 天到第8 天對(duì)“Q型”煙粉虱2齡若蟲(chóng)的LC50從1 376降至183個(gè)孢子/mm2。Mf96菌株與阿維菌素（60 μg·mL-1）混合作用7 d后，真菌LC50從378降至46個(gè)孢子/mm2。低劑量的阿維菌素對(duì)黃綠綠僵菌Mf96菌株的分生孢子和菌絲生長(zhǎng)沒(méi)有影響。不同濃度黃綠綠僵菌（低、中、高）孢子懸乳劑分別與不同濃度阿維菌素（0、15、30、45 和 60 μg·mL-1）復(fù)配處理后，Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)有不同僵蟲(chóng)率，其中以阿維菌素30 μg·mL-1與黃綠綠僵菌高濃度懸乳劑復(fù)配處理Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)產(chǎn)生的僵蟲(chóng)率最高，達(dá)86.8%。對(duì)照（懸乳劑基礎(chǔ)配方）和單獨(dú)噴施阿維菌素處理中未見(jiàn)到僵蟲(chóng)。田間噴施真菌孢子懸乳劑、藥劑和菌藥混劑后5 d和10 d，菌藥混用的Q型煙粉虱若蟲(chóng)蟲(chóng)口減退率均最高，分別為53.6%和85.7%；5個(gè)隨機(jī)抽查時(shí)間得到校正防效變化趨勢(shì)與蟲(chóng)口減退率趨勢(shì)一致，25 d菌藥混用的校正防效在所有處理中最高，達(dá)88.9%；5個(gè)隨機(jī)抽查時(shí)間得到的對(duì)照組蟲(chóng)口減退率均為負(fù)值。【結(jié)論】黃綠綠僵菌Mf96菌株與阿維菌素聯(lián)合在實(shí)驗(yàn)室和田間防治Q型煙粉虱均具有協(xié)同增效作用。因此，利用黃綠綠僵菌Mf96分生孢子懸乳劑與低劑量1.8%阿維菌素WP聯(lián)合防治Q型煙粉虱是一項(xiàng)新的有效措施。

Q型煙粉虱；黃綠綠僵菌；阿維菌素；協(xié)同作用；田間效果

0 引言

【研究意義】煙粉虱（）是一種世界性超微型入侵農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)，其家族中B型和Q型煙粉虱危害最為嚴(yán)重[1]。在中國(guó)大部分農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，長(zhǎng)期應(yīng)用化學(xué)農(nóng)藥防治煙粉虱致使該蟲(chóng)對(duì)市場(chǎng)上常用化學(xué)殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生嚴(yán)重抗性[2]。自2000年以后，煙粉虱和其他刺吸式害蟲(chóng)已對(duì)吡蟲(chóng)啉、毒死蜱等殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生較高水平抗性，導(dǎo)致防治效果顯著降低，同時(shí)，隨著化學(xué)藥劑用量的增加，進(jìn)一步加大了對(duì)環(huán)境的污染[3]。阿維菌素是一種兼具胃毒和觸殺作用的微生物源殺蟲(chóng)劑，其作用機(jī)制為干擾神經(jīng)生理活動(dòng)，刺激釋放-氨基丁酸，而氨基丁酸對(duì)節(jié)肢動(dòng)物的神經(jīng)傳導(dǎo)有抑制作用[4]。隨著Q型煙粉虱對(duì)阿維菌素的抗性逐漸增強(qiáng)，合理使用這種殺蟲(chóng)劑是延長(zhǎng)其使用壽命的關(guān)鍵。將擊倒快的低劑量殺蟲(chóng)劑與可持續(xù)起效的昆蟲(chóng)病原真菌（白僵菌、綠僵菌等）聯(lián)合防治煙粉虱是一種新的替換防治策略?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】盡管很多昆蟲(chóng)病原真菌（蠟蚧輪枝菌、擬青霉、白僵菌、綠僵菌）對(duì)較多刺吸式害蟲(chóng)有很高的室內(nèi)毒力，但防治煙粉虱達(dá)到預(yù)期防治效果的真菌資源依然缺乏[5-7]。在20世紀(jì)90年代，大量的昆蟲(chóng)病原真菌對(duì)煙粉虱毒力被測(cè)定，但死亡率很少高于80%[8]。真菌病原物在田間受環(huán)境條件限制較大，早期的田間試驗(yàn)結(jié)果很難達(dá)到控制煙粉虱的目的[9-10]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，利用室內(nèi)生物測(cè)定法篩選一株對(duì)褐飛虱高毒力的球孢白僵菌菌株，用其油劑孢子液分別結(jié)合低劑量（0.5、1.0和2.0 μg·mL-1）吡蟲(chóng)啉共同處理褐飛虱（）時(shí)，其LC50從1 652個(gè)孢子/mm2降到503、135和26個(gè)孢子/mm2，表明菌藥混用有協(xié)同增效作用[11]。Fitzgerald[12]利用球孢白僵菌分別與低劑量噻嗪酮、吡蚜酮、啶蟲(chóng)脒、吡螨胺聯(lián)合防治草莓花象甲（）、長(zhǎng)毛草盲蝽（）和草莓釘蚜（），結(jié)果表明菌藥混用有協(xié)同增效作用，且對(duì)天敵智利小植綏螨（）和草蛉（）沒(méi)有影響。【本研究切入點(diǎn)】前期試驗(yàn)已經(jīng)篩選到兩株對(duì)Q型煙粉虱毒力較高的黃綠綠僵菌菌株Mf96和Mf82[13]。另外，通過(guò)室內(nèi)毒力測(cè)定和田間藥效試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)1.8%阿維菌素可濕性粉劑（WP）對(duì)Q型煙粉虱成蟲(chóng)、2齡若蟲(chóng)和卵毒殺效果最好。目前，黃綠綠僵菌與微生物源殺蟲(chóng)劑阿維菌素有無(wú)協(xié)同增效作用尚未見(jiàn)報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】針對(duì)已篩選對(duì)Q型煙粉虱高毒力的黃綠綠僵菌Mf96菌株，探究其與低劑量阿維菌素聯(lián)合控制Q型煙粉虱是否具有協(xié)同增效作用。

1 材料與方法

煙粉虱生物測(cè)定試驗(yàn)在安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院完成；田間試驗(yàn)在安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草與玉米研究所試驗(yàn)田完成。

1.1 供試?yán)ハx(chóng)

供試Q型煙粉虱蟲(chóng)源為2012年5月采自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院青州煙草研究所（山東省青島市）試驗(yàn)田內(nèi)的烤煙型煙草K326植株上，通過(guò)mtDNA COI基因序列測(cè)序方法，鑒定其種型為Q型，并在安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院智能人工氣候室內(nèi)（溫度（25±1）℃、光周期L﹕D= 16 h﹕8 h），利用2—3片展開(kāi)葉的煙草幼苗上（品種為NC95，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院青州煙草研究所提供）飼養(yǎng)繁殖2代以上，選擇2齡若蟲(chóng)作為供試蟲(chóng)源。

1.2 供試菌株及分生孢子的制備

供試的黃綠綠僵菌Mf96菌株保存于安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)蟲(chóng)生真菌研究中心（安徽省微生物防治省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室）菌種庫(kù)。菌種以干燥分生孢子粉與滅菌后的白沙混合保存于-70℃超低溫冰箱中。

利用熟糙米、花生殼等材料按比例配制成的培養(yǎng)基固相發(fā)酵生產(chǎn)Mf96分生孢子。先將供試菌株接種于含150 mL SDY液體培養(yǎng)基的300 mL錐形瓶里，置于（25±1）℃的光照搖床培養(yǎng)箱中（L﹕D= 12 h﹕12 h）培養(yǎng)3 d，作為發(fā)酵種子液，然后將其接種到有發(fā)酵培養(yǎng)基的有孔不銹鋼托盤(pán)中（長(zhǎng)×寬×高=50 cm×40 cm×5 cm），置于（25±1）℃的光照培養(yǎng)箱中（L﹕D=12 h﹕12 h）培養(yǎng)10 d，菌絲體充分產(chǎn)孢后，利用真空冷凍干燥器在（30±1）℃條件下對(duì)其干燥24 h，再利用收孢器收獲分生孢子粉（高孢粉），并進(jìn)一步利用真空干燥器干燥使?jié)穸刃∮?%，保存于4℃冰箱，用于所有生測(cè)試驗(yàn)的分生孢子萌發(fā)率均大于90%。

1.3 供試菌株和阿維菌素對(duì)Q型煙粉虱若蟲(chóng)的生物測(cè)定

應(yīng)用1.1方法準(zhǔn)備供試Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)，按照林華峰等[14]的方法將Mf96菌株分生孢子粉配置成1.0×108、1.0×107、1.0×106個(gè)孢子/mL濃度的懸乳劑各10 mL。同時(shí)，向每種濃度的孢子懸乳劑中添加1.8%阿維菌素WP（廣西桂林集琦生化有限公司生產(chǎn)），分別配制成含0、15、30、45和60 μg·mL-1劑量的1.8%阿維菌素WP的混合溶液各10 mL。試驗(yàn)共15個(gè)組合。利用手動(dòng)噴霧器對(duì)分別有30—40頭Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)的煙草葉片均勻噴施混合溶液，用懸乳劑基礎(chǔ)配方（載體油、乳化劑和無(wú)菌水）作為對(duì)照。為了準(zhǔn)確評(píng)估阿維菌素對(duì)Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)的致死效果，其濃度150、300 μg·mL-1的溶液各10 mL也分別用于生測(cè)試驗(yàn)。噴施時(shí)放置4塊蓋玻片（20 mm×20 mm）收集孢子，隨機(jī)鏡檢5個(gè)視野并計(jì)數(shù)孢子數(shù)，以確定每mm2煙粉虱實(shí)際接收的孢子數(shù)。每個(gè)處理重復(fù)4次。噴霧后，將處理后的煙草置于（25±1）℃、RH 90%的光照培養(yǎng)箱中（L﹕D=12 h﹕12 h）。每日鏡檢并記錄被Mf96菌株感染死亡的2齡若蟲(chóng)數(shù)，計(jì)算累積死亡率，在尼康NK-300型立體解剖鏡下連續(xù)觀察7 d。

1.4 田間試驗(yàn)

1.4.1 試驗(yàn)地點(diǎn)及概況 試驗(yàn)設(shè)在安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草與玉米研究所試驗(yàn)田（合肥市），煙田土壤中等肥力水平，土質(zhì)為砂壤土。所選田塊地勢(shì)較平坦，排灌方便。2015年2月30日播種，煙草品種為NC95（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所提供），基本苗2 250—2 700株/hm2，按常規(guī)進(jìn)行管理。各小區(qū)栽培管理?xiàng)l件一致，煙草長(zhǎng)勢(shì)基本一致。

1.4.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及實(shí)施方法 供試藥劑為黃綠綠僵菌Mf96菌株懸乳劑（1.0×108個(gè)孢子/mL）和1.8%阿維菌素WP（60 μg·mL-1）。試驗(yàn)前選取Q型煙粉虱危害程度一致的田塊，并劃分小區(qū)，小區(qū)面積100 m2。2種藥劑的單用和混用（在1.0×108個(gè)孢子/mL的黃綠綠僵菌（Mf96）分生孢子懸乳劑中添加1.8%阿維菌素WP，配制成含60 μg·mL-1劑量的1.8%阿維菌素WP溶液），空白對(duì)照只噴清水，共4個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，共12個(gè)小區(qū)，隨機(jī)區(qū)組排列，小區(qū)間有3.0 m寬的保護(hù)行。

1.4.3 施藥時(shí)間及施藥方法 于2015年5月30日下午進(jìn)行田間施藥，煙草當(dāng)時(shí)正值旺長(zhǎng)期，也是Q型煙粉虱卵孵化高峰期。施藥時(shí)采用WBDY-16L型電動(dòng)擔(dān)架式噴霧器，噴孔口徑1.0 mm。用水量750 kg·hm-2，小區(qū)內(nèi)均勻噴霧，藥液主要噴在煙草葉片背面。施藥時(shí)天氣多云，施藥時(shí)間下午16：00—18：00，氣溫25—30℃，相對(duì)濕度70%—80%，風(fēng)力3級(jí)。藥后72 h內(nèi)未有降雨。

1.4.4 調(diào)查及統(tǒng)計(jì)方法 施藥前，采用5點(diǎn)式取樣法，每點(diǎn)2株煙草，每株查3片葉片背面，每小區(qū)共調(diào)查10株煙草，確定Q型煙粉虱若蟲(chóng)蟲(chóng)口基數(shù)。施藥后第5、10、15、20和25天，按同樣的方法調(diào)查，蟲(chóng)口減退率和校正防效計(jì)算公式如下：

蟲(chóng)口減退率（%）= [(處理前活蟲(chóng)數(shù)-處理后活蟲(chóng)數(shù))/處理前活蟲(chóng)數(shù)]×100；

校正防效（%）= [(處理區(qū)蟲(chóng)口減退率-對(duì)照區(qū)蟲(chóng)口減退率)/(1-對(duì)照區(qū)蟲(chóng)口減退率)]×100。

1.5 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)記錄和分析參照林華峰等[14]方法，用每天觀察的平均活蟲(chóng)與死蟲(chóng)數(shù)計(jì)算各處理的死亡率，并以Abbott公式計(jì)算校正死亡率。

校正死亡率（%）= [(處理組死亡率-對(duì)照組死亡率)/(1-對(duì)照組死亡率) ]×100。

致死中濃度（LC50）和致死中時(shí)（LT50）等處理間各統(tǒng)計(jì)量通過(guò)方差分析和鄧肯式新復(fù)極差法檢測(cè)差異顯著性。

采用時(shí)間-劑量-死亡率模型[15]（簡(jiǎn)稱TDM模型）對(duì)Mf96菌株懸乳劑的毒力測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行模擬分析。該方法是將時(shí)間和劑量的效應(yīng)集中到一個(gè)模型中，可考察時(shí)間、劑量效應(yīng)的相互作用，從而體現(xiàn)出毒力測(cè)定數(shù)據(jù)的客觀性和完整性。

所有計(jì)算與模擬過(guò)程均使用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件完成。

2 結(jié)果

2.1 黃綠綠僵菌與低劑量阿維菌素聯(lián)合應(yīng)用對(duì)Q型煙粉虱若蟲(chóng)的室內(nèi)效果

2.1.1 Mf96菌株不同濃度懸乳劑在Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)體表的孢子數(shù) 黃綠綠僵菌Mf96菌株分生孢子梯度懸乳劑1.0×108、1.0×107、1.0×106個(gè)孢子/mL在Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)體表的孢子數(shù)分別為46（41—47）、251（239—268）和1 073（1 043—1 109）個(gè)孢子/mm2。處理間蟲(chóng)體沉積的孢子數(shù)存在顯著性差異（2, 42=1 936.2，＜0.01），但不論是孢子液?jiǎn)为?dú)處理還是與阿維菌素混配處理內(nèi)，蟲(chóng)體沉積的孢子數(shù)差異不顯著（3, 56=2.1，=0.33）。

2.1.2 生物測(cè)定中的時(shí)間-劑量-死亡率趨勢(shì) Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)累計(jì)死亡率隨孢子濃度或阿維菌素濃度增加和天數(shù)的增加而增大（圖1）。所有生測(cè)試驗(yàn)中時(shí)間-劑量-死亡率數(shù)據(jù)經(jīng)時(shí)間-劑量-死亡率模型生成參數(shù)估計(jì)值與模型非常匹配（＞0.15，同質(zhì)性測(cè)檢適合度非常好）。生測(cè)結(jié)果表明，第4天到第8天菌株懸乳液對(duì)Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)的LC50（95%置信區(qū)間）從1 376（741—2 293）降到183（138—262）個(gè)孢子/mm2。低劑量阿維菌素和菌株復(fù)配液處理的LC50（95%置信區(qū)間）出現(xiàn)迅速下降的現(xiàn)象，例如，含60 μg·mL-1阿維菌素的孢子液，在相同時(shí)段，LC50（95%置信區(qū)間）由107（63—175）降到25（11—55）個(gè)孢子/mm2（圖2）。復(fù)配液中含≤30 μg·mL-1阿維菌素處理LC50（95%置信區(qū)間）的趨勢(shì)圖部分重疊，所以不能顯著降低菌株孢子液的LC50。

a：噴施不同濃度黃綠綠僵菌Mf96孢子懸乳劑Sprays gradient conidial concentrations of emulsifiable formulation M. flavoviride；b—e：每種濃度Mf96孢子懸乳劑分別與15、30、45和60 μg·mL-1阿維菌素復(fù)配噴霧（A15至A60） Fungal sprays containing 15, 30, 45 and 60 μg·mL-1 abamectin (A15 to A60), respectively；f：?jiǎn)为?dú)噴含量為150、300 μg·mL-1的阿維菌素Abamectin sprays at 150 and 300 μg·mL-1 (A150 and A300)。真菌濃度梯度為低、中和高（個(gè)孢子/mm2），C為對(duì)照；誤差線為試驗(yàn)重復(fù)4次得到，圖中括號(hào)內(nèi)為每處理Q型煙粉虱若蟲(chóng)總數(shù)Symbols denoted low, median and high concentrations of fungal sprays (number of conidia/mm2) and blank control (C). Error bars: SEM from four replicates (with the total number of treated nymphs of B. tabaci Q biotype given in parentheses)

圖2 不同濃度黃綠綠僵菌孢子懸乳劑與不同濃度1.8%阿維菌素WP復(fù)配處理Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)的對(duì)數(shù)致死中濃度

2.1.3 菌藥聯(lián)合應(yīng)用對(duì)僵蟲(chóng)率的影響 不同濃度黃綠綠僵菌（1.0×108、1.0×107、1.0×106個(gè)孢子/mL）孢子懸乳劑分別與不同濃度阿維菌素（15、30、45 和60 μg·mL-1）復(fù)配處理后，Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)有不同僵蟲(chóng)率，其中以阿維菌素30 μg·mL-1與黃綠綠僵菌懸乳劑復(fù)配處理Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)產(chǎn)生的僵蟲(chóng)率最高，達(dá)86.8%（圖3）。加入低劑量阿維菌素的不同濃度孢子懸乳劑產(chǎn)生的僵蟲(chóng)率差異顯著。同時(shí)，在對(duì)照（懸乳劑基礎(chǔ)配方）和單獨(dú)噴施阿維菌素處理中未見(jiàn)僵蟲(chóng)。

圖3 不同濃度黃綠綠僵菌孢子懸乳劑分別與不同濃度1.8%阿維菌素WP復(fù)配處理Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)的僵蟲(chóng)率

2.2 黃綠綠僵菌與低劑量阿維菌素聯(lián)合應(yīng)用對(duì)Q型煙粉虱的田間防治效果

由表1可以看出，田間噴施真菌的孢子懸乳劑、藥劑和菌藥混劑后5 d和10 d，菌藥混用的Q型煙粉虱若蟲(chóng)蟲(chóng)口減退率均最高，分別為53.6%和85.7%，其次是阿維菌素單用，且大于Mf96菌株單用；15、20和25 d，菌藥混用的Q型煙粉虱若蟲(chóng)蟲(chóng)口減退率仍然均最高，分別為78.6%、82.1%和84.6%，其次是阿維菌素單用，且均大于Mf96菌株單用；同時(shí)，5個(gè)隨機(jī)抽查時(shí)間得到校正防效變化趨勢(shì)與蟲(chóng)口減退率變化趨勢(shì)一致，菌藥混用25 d的Q型煙粉虱若蟲(chóng)校正防效在所有處理中最高，達(dá)88.9%；5個(gè)隨機(jī)抽查時(shí)間得到的對(duì)照蟲(chóng)口減退率均為負(fù)值。

表1 真菌的孢子懸乳劑、藥劑和菌藥混劑防治煙田Q型煙粉虱若蟲(chóng)的小區(qū)試驗(yàn)

同列數(shù)據(jù)后不同字母表示經(jīng)Duncan多重比較后差異顯著（＜0.05）Different lowercases followed the values in the same column indicated significant differences according to Duncan’s multiple range test (＜0.05)。DR：蟲(chóng)口減退率Decrease rate (%)；CE：校正防效Corrected control effect (%)；A：Abamectin (60 μg·mL-1)

3 討論

通過(guò)室內(nèi)生物測(cè)定和田間試驗(yàn)，黃綠綠僵菌Mf96菌株表現(xiàn)出對(duì)靶標(biāo)害蟲(chóng)有較高毒力。Filho等[16]研究發(fā)現(xiàn)球孢白僵菌在室內(nèi)和田間均對(duì)蚜蟲(chóng)具有較高的毒力，并將該菌株研制成為微生物農(nóng)藥；蒲蟄龍等[17]通過(guò)室內(nèi)生測(cè)和林間試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)了對(duì)傳播松材線蟲(chóng)病原的松墨天牛（）具有較高毒力的白僵菌菌株，將該菌株研制成為微生物農(nóng)藥，利用無(wú)紡布成功將其控制在經(jīng)濟(jì)允許水平之下。本研究中，黃綠綠僵菌Mf96菌株室內(nèi)以1.0×108個(gè)孢子/mL 的孢子液接種到Q型煙粉虱2齡若蟲(chóng)體表上，累計(jì)校正死亡率達(dá)89.5%，LT50為3.65 d。田間以1.0×108個(gè)孢子/mL的懸乳劑噴施，對(duì)Q型煙粉虱若蟲(chóng)的防效為61.3%，說(shuō)明該菌株具有開(kāi)發(fā)成微生物農(nóng)藥的潛力。

昆蟲(chóng)病原真菌與低劑量阿維菌素聯(lián)合防治煙粉虱是一種新的替代防治方法。生物測(cè)定試驗(yàn)可以說(shuō)明濃度和時(shí)間效應(yīng)及兩者內(nèi)在關(guān)系，時(shí)間-劑量-死亡率模型能明確菌株和藥劑單用與復(fù)配使用效果的優(yōu)劣。Jin等[18]分別應(yīng)用不同濃度未配置劑型的孢子液的綠僵菌Ma456菌株防治褐飛虱3齡若蟲(chóng)，時(shí)間-劑量-死亡率模型的第7天和第10天的LC50由731、284個(gè)孢子/mm2分別降至386、199個(gè)孢子/mm2。同時(shí)，得出金龜子綠僵菌與噻嗪酮復(fù)配不影響昆蟲(chóng)病原真菌對(duì)靶標(biāo)昆蟲(chóng)的毒力效果；Feng等[11]應(yīng)用時(shí)間-劑量-死亡率模型分析球孢白僵菌與吡蟲(chóng)啉復(fù)配防治褐飛虱的效果，結(jié)果表明兩者之間具有協(xié)同增效作用；Zou等[19]將玫煙色擬青霉與4種化學(xué)藥劑螺蟲(chóng)乙酯（SPI）、啶蟲(chóng)脒（ACE）、吡蟲(chóng)啉（IMI）和噻蟲(chóng)嗪（THI）分別混配防治溫室白粉虱，結(jié)果表明混配后的玫煙色擬青霉孢子對(duì)白粉虱的毒力明顯增高，表現(xiàn)出菌藥之間的協(xié)同增效作用。本試驗(yàn)中，通過(guò)該模型分析表明，復(fù)配液中含30—60 μg·mL-11.8%阿維菌素WP能顯著提高M(jìn)f96菌株的殺蟲(chóng)效果或加速其殺蟲(chóng)速度。因此，在田間可以應(yīng)用60 μg·mL-11.8%阿維菌素WP與Mf96菌株分生孢子懸乳劑復(fù)配防治Q型煙粉虱。

昆蟲(chóng)病原真菌不但可以侵染致死煙粉虱成蟲(chóng)、若蟲(chóng)和卵，還具有顯著降低雌成蟲(chóng)繁殖能力的潛力。Jin等[20]利用綠僵菌Ma456菌株侵染褐飛虱雌成蟲(chóng)發(fā)現(xiàn)被侵染雌成蟲(chóng)的繁殖力顯著低于對(duì)照處理，同時(shí)發(fā)現(xiàn)被侵染雌成蟲(chóng)產(chǎn)下卵的孵化率比對(duì)照處理降低36%；Li等[21-22]研究黃綠綠僵菌Mf82防治褐飛虱成蟲(chóng)，發(fā)現(xiàn)該菌株對(duì)雌成蟲(chóng)的毒力大于雄蟲(chóng)，且被侵染的成蟲(chóng)產(chǎn)下的卵仍然能被其侵染，表明黃綠綠僵菌對(duì)寄主昆蟲(chóng)種群具有持續(xù)控制能力。本研究結(jié)果也表明菌藥混用對(duì)煙粉虱的種群控制具有較長(zhǎng)的持效期。

化學(xué)農(nóng)藥與昆蟲(chóng)病原真菌混用時(shí)，前者的用量比率較為重要。首先考慮的因素是化學(xué)農(nóng)藥的濃度不能大于對(duì)靶標(biāo)害蟲(chóng)的亞致死濃度。如果兩者混配使用過(guò)程中化學(xué)農(nóng)藥的量過(guò)大，結(jié)果無(wú)法顯示昆蟲(chóng)病原真菌對(duì)靶標(biāo)害蟲(chóng)的控制作用[23]。菌藥混用聯(lián)合防治靶標(biāo)害蟲(chóng)，藥劑的使用濃度應(yīng)對(duì)環(huán)境中的天敵不能產(chǎn)生影響[24]。在100 g·kg-1吡蟲(chóng)啉WP商品標(biāo)簽上，建議防治假眼小綠葉蟬（）等刺吸式害蟲(chóng)用量為300 g·hm-2。已有研究表明，向含1.0×1010個(gè)孢子/mL 的1 L溶液中加入30 g吡蟲(chóng)啉藥劑并稀釋1 000倍，田間噴霧防治葉蟬等刺吸式害蟲(chóng)的效果最好[25]。本研究中1.8%阿維菌素WP商品標(biāo)簽上，建議防治粉虱、蚜蟲(chóng)等刺吸式害蟲(chóng)用量為2 000 g·hm-2，田間試驗(yàn)采用60 μg·mL-11.8%阿維菌素WP與黃綠綠僵菌Mf96混配防治Q型煙粉虱，防治效果達(dá)88.9%，可有效控制煙粉虱的種群。

4 結(jié)論

黃綠綠僵菌Mf96與阿維菌素聯(lián)合防治Q型煙粉虱具有協(xié)同增效作用，并且低劑量1.8%阿維菌素WP對(duì)Mf96菌株生長(zhǎng)的影響較小。因此，黃綠綠僵菌Mf96分生孢子懸乳劑與低劑量1.8%阿維菌素WP聯(lián)合利用是一項(xiàng)新的防治Q型煙粉虱有效措施。

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（責(zé)任編輯 岳梅）

Integration of Emulsifiable Formulationwith Low-Rate Abamectin for Control ofQ Biotype

LI Mao-ye1, CHEN De-xin1,2, LIN Hua-feng1, LI Shi-guang1, PAN Jing1, WU Sheng-yong3

(1School of Plant Protection, Anhui Agricultural University, Hefei 230036;2Qingzhou Tobacco Research Institute, China National Tobacco Corporation, Qingdao 266001, Shandong;3State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193)

【Objective】, an important invasion insect pest in agriculture, has displayed a high resistance to many conventional pesticides. The objective of this study is to evaluate the synergistic effect of joint application of entomopathogenic fungi and chemical pesticides againstin laboratory and field, and to provide a new approach for effective control of. 【Method】Based on the previous study that a highly virulent ofstrain (Mf96) was screened for control ofQ biotype, three gradient emulsifiable formulation of Mf96 (1.0×108, 1.0×107, 1.0×106conidia/mL), which were combined with five low doses of abamectin EC (0, 15, 30, 45 and 60 μg·mL-1) were separately sprayed to the body surface of 2ndinstar nymphs ofQ biotype in laboratory, and the mortalities were tested. The number of conidia deposited on the unit surface was counted under stereomicroscope. Single agent and their equal volume mixture of the suspension emulsion of Mf96 strain (1.0×108conidia/mL) and 1.8% abamectin WP (60 μg·mL-1) were separately sprayed to controlQ biotype on tobacco in the field, and the control efficacies were evaluated. 【Result】 LC50of Mf96 against 2nd instar nymphs ofQ biotype decreased from 1 376 to 183 conidia/mm2during 4th to 8th day. After 7 days, LC50of the fungus combined with abamectin (60 μg·mL-1) decreased from 378 to 46 conidia/mm2. Abamectin had no significant effect on the fungal outgrowths and infection to 2nd instar nymphs ofQ biotype at the low spray rates. The mixture suspension of different concentrations of fungus (low, medial and high) with abamectin (15, 30, 45 and 60 μg·mL-1) resulted in different rates of mycotized cadavers, and high concentration of fungal mixture suspension with 30 μg·mL-1of abamectin caused 86.8% mortality of. No cadavers were observed in untreated control and single abamectin spray. Fungal conidia suspension emulsion, abamectin and their mixture were separately sprayed in the field, and the decline rates in nymphae ofQbiotype population was the highest (53.6% and 85.7%) when the mixture was sprayed after 5 d and 10 d. Meanwhile, the changing trends of corrected control efficacies and population decline rate ofQ biotype were similar at 5 random checks, the corrected control efficacy of the mixture was the highest (88.9%) after 25 d. The population decline rateofQ biotype in untreated control was negative value.【Conclusion】The combined ofwith abamectin showed synergistic interaction, with additive effects on Q biotype. Therefore, it is an effective approach to controlby combiningwith abamectin at low spray rate.

Q biotype;; abamectin; synergistic effects; field control efficacy

2016-02-02；接受日期：2016-04-22

安徽省自然科學(xué)基金（1408085QC52）、中國(guó)煙草總公司科技重點(diǎn)項(xiàng)目（110201202003）、國(guó)家煙草行業(yè)煙草病蟲(chóng)害監(jiān)測(cè)與綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目（IPM-201411）、安徽省高校自然科學(xué)基金（03087060）

李茂業(yè)，E-mail：sj412bq@163.com。陳德鑫，E-mail：cdxycs@gmail.com。李茂業(yè)和陳德鑫為同等貢獻(xiàn)作者。通信作者吳圣勇，E-mail：sywu@ippcaas.cn