曾　艷，喬月，孫　陽，崔　越，楊紅育

（長春生物制品研究所有限責(zé)任公司，吉林 長春 130062）

不同種家兔用于生物制品熱原檢查的比較研究

曾艷，喬月，孫陽，崔越，楊紅育?

（長春生物制品研究所有限責(zé)任公司，吉林 長春 130062）

目的：選擇符合生物制品熱原檢查要求的家兔。方法：按照《中國藥典》三部（2015年版）中規(guī)定的熱原檢查法進(jìn)行：取灰兔和白兔，用同一劑量（3mL/kg）的抗狂犬病血清和破傷風(fēng)抗毒素及氯化鈉注射液（10mL/kg），分別注入家兔體內(nèi)，每隔30min測量家兔體溫1次，連續(xù)測量6次，以6次體溫最高1次減去正常體溫即為該家兔升高溫度，以升高溫度或升高溫度的總和判定結(jié)果。結(jié)果：灰兔和白兔注射抗狂犬病血清，體溫檢測結(jié)果兩者之間相同，無明顯差別。但3批試驗(yàn)中，均有1批判為不合格，2批判為復(fù)試?；彝煤桶淄米⑸淦苽L(fēng)抗毒素及氯化鈉注射液，兩者檢測結(jié)果也相同，無明顯差別，且全部試驗(yàn)均判為合格。結(jié)論：灰兔和白兔在生物制品熱原檢查中均可使用。

熱原檢查；生物制品；家兔

家兔熱原檢查法是目前世界許多國家藥典規(guī)定的熱原檢查的法定方法?！吨袊幍洹芬?guī)定的熱原檢查法是將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品所含熱原的限度是否符合規(guī)定的一種方法。

影響家兔熱原檢查法檢查結(jié)果的因素除家兔飼養(yǎng)環(huán)境、試驗(yàn)環(huán)境及試驗(yàn)控制外，家兔的來源、品種和質(zhì)量對熱原檢查結(jié)果也有很大影響。為了選擇符合生物制品熱原檢查要求的家兔，本文選取我公司飼養(yǎng)的普通級青紫蘭家兔（簡稱灰兔，以下同），和普通級日本大耳白家兔（簡稱白兔，以下同）。按中國藥典規(guī)定的熱原檢查法，對我公司生產(chǎn)的抗狂犬病血清，破傷風(fēng)抗毒素及氯化鈉注射液進(jìn)行了熱原檢查的比較研究，結(jié)果報(bào)道如下：

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)用家兔

灰兔和白兔均由我公司動物室提供，生產(chǎn)許可證編號：SCXK（吉）2008-0009使用許可證編號：SYXK（吉）2008～0009。健康合格，無孕雌兔，體重1.7～2.5kg，用同一飼料飼養(yǎng)。在檢查供試品前7日預(yù)測體溫，進(jìn)行挑選，挑選條件與檢查供試品時(shí)相同，僅不注射供試品，每隔30min測量體溫1次，連測8次，選8次體溫均在38.0～39.8℃，且最高與最低溫差不超過0.5℃者用于本試驗(yàn)熱原檢測。

1.2供試樣品

供試樣品均由我公司生產(chǎn)：抗狂犬病血清（半成品）批號：20070809、20070810、20071119，破傷風(fēng)抗毒素批號：20100818-1、20100816-1、S201201-1，氯化鈉注射液批號：1111150203、1010170209、1105050101。

1.3試驗(yàn)器具

供試驗(yàn)的所有器具均經(jīng)過250℃至少30min或180℃至少2h干烤、滅菌、除熱原。

1.4正常體溫檢測

試驗(yàn)家兔禁食2h以上，開始測定正常體溫，共測2次，每次間隔30min，以兩側(cè)體溫平均值作為該兔的正常體溫或稱基礎(chǔ)體溫。

1.5熱原檢查試驗(yàn)

正常體溫檢測后15min內(nèi)，每種供試品各取家兔3只，用同一劑量注入家兔體內(nèi)，每隔30min測量體溫1次，連測6次，以6次體溫最高1次減去正常體溫即為家兔體溫升高溫度。以升高溫度或升高溫度總和測定結(jié)果。

1.6結(jié)果判定

按《中國藥典》進(jìn)行：3只家兔中，體溫升高均低于0.6℃，并且3只家兔體溫升高總和不超過1.4℃判為合格。3只家兔中，有1只體溫升高達(dá)0.6℃或0.6℃以上，或3只家兔升溫總和超過1.4℃判為復(fù)試。3只兔中，有2只體溫升高0.6℃或0.6℃以上，或3只兔升溫總和為1.8℃或超過1.8℃判為不合格。

2　結(jié)果

2.1灰兔白兔注射抗狂犬病血清檢測結(jié)果

灰兔和白兔各取3只，并用同一批抗狂犬病血清，相同劑量3mg/kg，分別注入家兔體內(nèi)，按同樣方法連續(xù)對三批抗狂犬病血清進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果見表1。

表1　三批抗狂犬病血清檢測結(jié)果

從表1可見，灰兔和白兔用三批抗狂犬病血清注射后，體溫檢測結(jié)果相同，無明顯差別。在3批試驗(yàn)中，均有1批判為不合格，2批判為復(fù)試，均未達(dá)到判定合格的標(biāo)準(zhǔn)。

2.2灰兔白兔注射破傷風(fēng)抗毒素檢測結(jié)果

灰兔白兔按上述方法，分別注射三批破傷風(fēng)抗毒素（3mL/kg），體溫檢測結(jié)果如表2。

表2　三批破傷風(fēng)抗毒素的檢測結(jié)果

表2結(jié)果表明，灰兔和白兔用破傷風(fēng)抗毒素注射后，體溫檢測結(jié)果兩者相同，無明顯差別，且全部試驗(yàn)均達(dá)到了合格標(biāo)準(zhǔn)。

2.3灰兔白兔注射氧化鈉注射夜檢測結(jié)果

灰兔白兔分別注射三批氯化鈉注射液（10mL/kg），體溫檢測結(jié)果如表3。表3結(jié)果表明，灰兔和白兔用氯化鈉注射后，體溫檢測結(jié)果兩者也相同，無明顯差別，且全部試驗(yàn)均達(dá)到了合格標(biāo)準(zhǔn)。

表3　三批氯化鈉注射液檢測結(jié)果

3　討論

用我公司飼養(yǎng)的灰兔和白兔，對我公司生產(chǎn)的抗狂犬病血清（半成品）進(jìn)行了熱原檢測，檢測結(jié)果兩種家兔相同，無明顯差別，但在3批檢測中均有1批試驗(yàn)判為不合格，2批判為復(fù)試，均未達(dá)到《中國藥典》規(guī)定的合格標(biāo)準(zhǔn)，其原因可能是本試驗(yàn)采用的抗狂犬病血清是半成品，成份復(fù)雜或與家兔個(gè)體差異有關(guān)。

家兔熱原檢查法是世界許多國家檢查熱原的法定方法，也是我國生物制品熱原檢查的常規(guī)手段。家兔是生物制品檢查熱原和效價(jià)測定等常用的動物，但家兔來源、品種、質(zhì)量直接影響檢查和測定的結(jié)果。

本文采用我公司飼養(yǎng)的灰兔和白兔，對我所生產(chǎn)的抗狂犬病血清，破傷風(fēng)抗毒素及氯化鈉注射液三種生物制品進(jìn)行了熱原的檢測，檢測結(jié)果表明，使用白兔灰兔檢測結(jié)果相同，均無明顯差別，提示這兩種家兔在生物制品熱原檢測中均可使用。

［1］董培智，等.現(xiàn)行版中、美、英、歐、日五部藥典中熱原檢查法比較［J］.中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2010，02：135-138.

［2］Chinese pharmacopoeia commission（chpc），Chinese pharmacopoeia （volume III）［S］.Beijing；Chinese Medical Science and Technology press，2005：Appendix 77-78.

［3］國家藥典委員會編，中華人民共和國藥典2015年版三部通則1142熱原檢查法：153-154北京，中國醫(yī)藥科技出版社.

［4］徐長金.影響家兔法檢查熱原的諸因素［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，1985，08：29-30+48.

［5］朱社敏，等.熱原用兔敏感性檢查方法的探討［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2010，10：931-936.

［6］Charles river laboratories in viro pyrogen test instruction sheet. ［ER］.Endosafe tiems 2002，June，9（2）.

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.09.012

曾艷（1963～），醫(yī)學(xué)生物學(xué)工程師，主要從事生物制品熱原檢定工作