楊秦雁　李　博

陜西省中醫(yī)醫(yī)院藥劑科 (西安 710002)

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飛天蜈蚣七不同提取物的藥效學(xué)研究

楊秦雁李博

陜西省中醫(yī)醫(yī)院藥劑科 (西安 710002)

目的：研究比較飛天蜈蚣七不同極性部位提取物的抗炎、鎮(zhèn)痛、抗疲勞和耐缺氧的活性。方法：分別采用二甲苯所致耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)、角叉菜膠所致小鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)、小鼠扭體法、熱板法、負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)和常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)對(duì)其抗炎、鎮(zhèn)痛、抗疲勞、和耐缺氧活性進(jìn)行研究。結(jié)果：飛天蜈蚣七提取物乙醇部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位均表現(xiàn)出不同程度的抗炎、鎮(zhèn)痛、抗疲勞作用，尤其以正丁醇部位活性最為顯著，而其各部位的耐缺氧活性均不高。結(jié)論：飛天蜈蚣七不同極性部位提取物均具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗疲勞作用，其中正丁醇部位活性最強(qiáng)。

主題詞中藥制劑實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物@飛天蜈蚣

ABSTRACT

Objective: To study the anti-inflammation, analgesia, anti-fatigue and anti-hypoxia activity of the different extracts from Aralia chinensis L.Methods: The pharmacological actions of anti-inflammation and analgesic were observed by xylene-induced ear swelling in mice, carrageenan-induced paw swelling in mice, acetic acid- induced writhing test and the hot-plate test in mice. Meanwhile, the anti-fatigue and anti-hypoxia effects were investigated by the load bearing swimming test and the hypoxia tolerance test respectively. Results: The ethanol extraction, ethyl acetate extraction and n-butanol extraction of Aralia chinensis L. all had anti-inflammation, analgesia and anti-fatigue effects. The n-butanol extraction had the most significant effect.The anti-hypoxia activity of all the different extracts was weak. Conclusion: The different extracts from Aralia chinensis L. all showed the anti-inflammation, analgesia and anti-fatigue effects. And the n-butanol extract had stronger activity.

飛天蜈蚣七為五加科植物楤木的根皮，分布于陜西、河北、山東、浙江、江西等地, 在陜西主要分布于秦嶺、巴山各個(gè)山區(qū),主治風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急慢性肝炎、跌打損傷、癰腫等[1-2]。目前已有文獻(xiàn)報(bào)道飛天蜈蚣七具有抗肝纖維化作用，但其它藥理活性有待進(jìn)一步研究[3-4]。本研究旨在進(jìn)一步對(duì)飛天蜈蚣七不同極性部位提取物進(jìn)行藥理研究，探討各部位的藥理活性差異，篩選飛天蜈蚣七的主要活性部位，為飛天蜈蚣七藥材的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1材料1.1動(dòng)物昆明種小鼠，體重20±2g，雌雄兼用，購(gòu)于第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)為陜動(dòng)準(zhǔn)字第01號(hào)。

1.2儀器旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申勝生物技術(shù)有限公司)；AY220 電子分析天平(日本島津分析儀器公司)；HH-4數(shù)顯恒溫?zé)岚逅″?國(guó)華電器有限公司)；8mm打孔器。

1.3實(shí)驗(yàn)試藥飛天蜈蚣七藥材采自秦巴山區(qū)、角叉菜膠、阿司匹林腸溶片、十全大補(bǔ)丸、二甲苯、冰醋酸。

2方法2.1樣品制備取飛天蜈蚣七藥材，粉碎，過3號(hào)篩，用75 %乙醇冷浸提取，回收溶劑，得乙醇粗提取物，即乙醇部位；然后依次用石油醚、乙酯乙酯、正丁醇進(jìn)行索氏提取，將各部分提取液減壓濃縮，回收溶劑，得到飛天蜈蚣七各極性部位提取物，分別為石油醚部位、乙酯乙酯部位、正丁醇部位。臨用前將各提取部位密封置冰箱中冷藏，灌胃前用1%吐溫-80溶液混懸均勻。

2.2抗炎活性考察2.2.1對(duì)二甲苯所致小鼠耳郭腫脹的影響[5]：選取昆明種小鼠 140 只，雌雄各半，隨機(jī)分成 14組，每組10 只?？瞻讓?duì)照組給予1%吐溫-80溶液，陽(yáng)性對(duì)照組給予阿司匹林(0.2g/kg)，給藥組分別為乙醇部位組、石油醚部位組、乙酸乙酯部位組、正丁醇部位組，給藥劑量分別設(shè)高、中、低劑量組(4、2、1g/kg生藥)。口服灌胃給藥，1次/d，連續(xù)給藥7d，末次給藥后，于小鼠右耳涂抹0.5ml/只二甲苯致炎，左耳不涂，1h后頸椎脫臼法處死小鼠，剪下左右兩耳，用直徑8mm打孔器在相同位置打下耳片，稱量，計(jì)算不同給藥組的腫脹度及腫脹抑制率。

2.2.2對(duì)角叉菜膠所致小鼠足趾腫脹的影響：取昆明種小鼠，分組及給藥同“2.2.1”，連續(xù)灌胃給藥7d，末次給藥后1h，于各小鼠右后足皮下注射1%角叉菜膠0.05 ml/只，5h后于同一位置剪下左右兩足，稱量，腫脹度即為右足質(zhì)量減去左足質(zhì)量，并計(jì)算腫脹抑制率。

2.3鎮(zhèn)痛活性考察2.3.1小鼠熱板鎮(zhèn)痛試驗(yàn)[6]：取雌性小鼠，水浴溫度調(diào)節(jié)為(55±0. 5)℃，記錄小鼠足底接觸熱板至出現(xiàn)舔后足反應(yīng)的時(shí)間即為小鼠痛閾值，選取痛閾值在5～30s小鼠140只。分組、給藥方法和劑量同“2.2.1”，連續(xù)灌胃給藥7d，分別于給藥前及末次給藥1h后分別測(cè)定小鼠痛閾值，痛閾值超過60s者按60s計(jì)算，并計(jì)算痛閾提高率。

2.3.2醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響：選取小鼠140只，分組及給藥同“2.2.1”，末次給藥1h后，于各小鼠腹腔注射0.6% 醋酸溶液0.2ml/10g，觀察并記錄注射醋酸溶液后20min內(nèi)小鼠出現(xiàn)扭體(伸展后肢、臀部抬高、腹部?jī)?nèi)凹、蠕行)的次數(shù)，并計(jì)算給藥組的扭體抑制率。

2.4抗疲勞能力考察負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)選取昆明種小鼠，分組、給藥方法和劑量同“2.2.1”，陽(yáng)性對(duì)照組給予十全大補(bǔ)丸(2g/kg)，末次給藥1h后，開始負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)。將小鼠體重的10%鉛塊綁至背部，負(fù)重游泳，放入水溫30℃左右的水浴鍋中游泳，當(dāng)小鼠沉入水中6s不能浮出水面時(shí)，即為體力耗竭時(shí)間。比較給給藥組的體力耗竭時(shí)間，通過計(jì)算游泳力竭時(shí)間延長(zhǎng)率來評(píng)估其抗疲勞能力。

2.5耐缺氧能力考察常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)選取昆明種小鼠，分組、給藥方法和劑量同“2.2.1”，陽(yáng)性對(duì)照組給予十全大補(bǔ)丸(2g/kg)。末次給藥1 h后，將小鼠放入密閉瓶?jī)?nèi)，瓶?jī)?nèi)裝有10g鈉石灰，加蓋瓶塞。記錄放入小鼠至小鼠因缺氧而死亡的時(shí)間，并計(jì)算耐缺氧存活時(shí)間延長(zhǎng)率。

3結(jié)果3.1抗炎活性飛天蜈蚣七各極性部位提取物均表現(xiàn)出不同強(qiáng)度的抗炎作用。其中以正丁醇部位作用最為明顯，其高劑量組抑制率達(dá)到了68.4%，接近于阿司匹林組水平77.3%，低劑量組抑制率也達(dá)到35.6%；乙醇部位和乙酸乙酯部位的抗炎作用也較為明顯；石油醚部位抗炎效果不明顯。與空白對(duì)照組比較，正丁醇部位各劑量組對(duì)二甲苯所致的耳廓腫脹均有顯著的抑制作用(P<0.01)，且存在一定的量效關(guān)系。飛天蜈蚣七各極性部位對(duì)角叉菜膠致小鼠足腫脹均有一定的抑制作用，正丁醇部位抑制作用最顯著，而石油醚部位幾乎沒有抗炎作用。其中當(dāng)給藥劑量為4g/kg時(shí)，正丁醇部位的作用最強(qiáng)，達(dá)到57.3%，乙醇部位次之，為50.1%，乙酸乙酯部位也有一定抗炎作用(37%)，與空白對(duì)照組相比，顯著抑制小鼠足趾腫脹程度(P<0.05)，且呈現(xiàn)量依賴性。見表1。

表1　對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠所致小鼠足趾腫脹的影響(n=10)

3.2鎮(zhèn)痛活性從表2可見，熱板試驗(yàn)表明飛天蜈蚣七不同極性部位提取物對(duì)醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)均有一定的抑制作用，而正丁醇部位抑制作用最強(qiáng)，高劑量組扭體反應(yīng)抑制率達(dá)到60.1%，阿司匹林組為79.1%；正丁醇部位各劑量組與空白對(duì)照組相比，扭體次數(shù)顯著減小(P<0.05)，且有一定的量效關(guān)系；乙醇部位和乙酸乙酯部位對(duì)小鼠扭體也有一定的抑制，但不如正丁醇部位，而石油醚部位作用并不明顯。從表2可見，飛天蜈蚣七正丁醇部位提取物能顯著減少醋酸所致的小鼠扭體次數(shù)，有明顯的鎮(zhèn)痛作用。正丁醇部位高劑量組對(duì)痛閾的提高率最大，達(dá)到62.9%，接近于陽(yáng)性對(duì)照組阿司匹林(66.9%)的鎮(zhèn)痛效果；而且乙醇部位和乙酸乙酯部位的高劑量組對(duì)痛閾的提高率分別達(dá)到53.5%和44.2%，而石油醚部位對(duì)小鼠痛閾沒有明顯影響。

表2　對(duì)扭體法和熱板法小鼠疼痛的影響(n=10)

3.3抗疲勞能力由表3可知，正丁醇部位和乙酸乙酯部位高劑量組小鼠游泳時(shí)間有一定延長(zhǎng)，明顯低于陽(yáng)性對(duì)照組；而其他給藥組均沒有明顯延長(zhǎng)小鼠力竭游泳時(shí)間。飛天蜈蚣七正丁醇部位具有一定的抗疲勞作用，但抗疲勞能力不強(qiáng)。

3.4耐缺氧能力如表3所示，十全大補(bǔ)丸組能顯著延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間(P<0.05)，延長(zhǎng)率可達(dá)到31.7%。而其它給藥組對(duì)小鼠常壓耐缺氧能力均沒有顯著影響，正丁醇部位的延長(zhǎng)率能達(dá)到9.2%，存活時(shí)間延長(zhǎng)率不高，且規(guī)律性不強(qiáng)。表明飛天蜈蚣七不同極性部位提取物不能提高小鼠的耐缺氧能力。

表3　抗疲勞和耐缺氧能力考察結(jié)果(n=10)

4結(jié)論本研究結(jié)果表明，飛天蜈蚣七不同極性部位提取物均有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛和抗疲勞的療效，其中正丁醇部位的活性最強(qiáng)，接近于陽(yáng)性對(duì)照組的效能，與空白對(duì)照組相比，具有顯著性差異(P<0.05)，且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性；而對(duì)小鼠常壓耐缺氧能力均沒有顯著影響，存活時(shí)間延長(zhǎng)率不高，且規(guī)律性不強(qiáng)。

飛天蜈蚣七根皮中富含的楤木皂苷A、銀蓮花苷、楤木皂苷D、竹節(jié)人參皂苷Ib等，均屬于三萜皂苷類化合物，而三萜皂苷類化合物具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、殺菌、降膽固醇等功效。由于正丁醇部位富含三萜皂苷成分，故推測(cè)飛天蜈蚣七正丁醇部位的抗炎、鎮(zhèn)痛和抗疲勞的活性與三萜皂苷成分密切相關(guān)。此外，飛天蜈蚣七藥材先經(jīng)過乙醇提取，其中含有包括三萜皂苷、膽堿、揮發(fā)油等在內(nèi)的大量有機(jī)成分，因此也表現(xiàn)出一定的抗炎鎮(zhèn)痛活性，但活性不如正丁醇部位。本研究?jī)H對(duì)飛天蜈蚣七不同部位提取物的抗炎、鎮(zhèn)痛和抗疲勞等的活性進(jìn)行了研究，而對(duì)正丁醇部位的化學(xué)成分并未進(jìn)行詳細(xì)研究，接下來本課題組也將對(duì)飛天蜈蚣七正丁醇部位進(jìn)行提取分離，從而得到飛天蜈蚣七的三萜皂苷類化學(xué)成分，進(jìn)而確定飛天蜈蚣七生物活性的有效成分。有研究表明，當(dāng)機(jī)體組織發(fā)生炎癥后，組織細(xì)胞會(huì)生成并釋放多種炎癥介質(zhì)，比如白細(xì)胞介素-1，腫瘤壞死因子，前列腺素2、組胺等，從而產(chǎn)生炎癥反應(yīng)；鎮(zhèn)痛作用包括中樞鎮(zhèn)痛作用和外周鎮(zhèn)痛作用，外周鎮(zhèn)痛作用與炎癥因子密切相關(guān)；抗疲勞作用主要通過提高體內(nèi)抗氧化酶SOD的水平，加強(qiáng)機(jī)體清除自由基、抗氧化作用，從而達(dá)到抗疲勞效果。本研究結(jié)果顯示飛天蜈蚣七正丁醇部位有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛和抗疲勞的療效，而關(guān)于該部位抗炎、鎮(zhèn)痛及抗疲勞活性的作用機(jī)理尚需進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，飛天蜈蚣七不同極性部位提取物均有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛和抗疲勞的療效，其中正丁醇部位的活性最強(qiáng)，乙醇部位次之，石油醚部位活性不明顯,而對(duì)小鼠常壓耐缺氧能力并沒有顯著影響。說明飛天蜈蚣七正丁醇部位是其活性有效部位，而對(duì)正丁醇部位化學(xué)成分并未進(jìn)行詳細(xì)研究，本課題組也將進(jìn)一步對(duì)飛天蜈蚣七正丁醇部位進(jìn)行提取分離，以期確定飛天蜈蚣七生物活性的有效成分，從而深入研究其抗炎、鎮(zhèn)痛和抗疲勞的作用機(jī)理，為飛天蜈蚣七藥材質(zhì)量控制、臨床合理用藥和綜合開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

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(收稿2016-04-21；修回2016-05-30)

Comparative studies on pharmacodynamics effects of different extracts from Aralia Chinensis L

Department of Pharmacy, The Shaanxi Province Hospital of Traditional

Chinese Medicine (Xi’an 710002)Yang Qinyan Li Bo

Chinese materia medica preparationAnimal experimentation @ Aralia Chinensis L.

R258.6

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.073