李陳雪，曲炳楠，曹　贏，楊玉赫，郭玉巖，李永吉，王　銳

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱　150040）

正交試驗(yàn)優(yōu)化青藤外敷貼的制備工藝Δ

李陳雪＊，曲炳楠，曹贏，楊玉赫，郭玉巖，李永吉，王銳#

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱150040）

目的：優(yōu)化青藤外敷貼的制備工藝。方法：以“初黏力”“持黏力”“剝離強(qiáng)度”的綜合評(píng)分為指標(biāo)，以加熱攪拌時(shí)間（A，h）、加熱溫度（B，℃）和各組分（軟化劑、空白基質(zhì)和青藤堿）加入順序（C）為影響因素，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)優(yōu)化青藤外敷貼的制備工藝并進(jìn)行驗(yàn)證；同時(shí)采用高效液相色譜法測(cè)定青藤堿含量。結(jié)果：青藤外敷貼的最優(yōu)制備工藝為先加入空白基質(zhì)與青藤堿，再加入軟化劑，80℃加熱攪拌1 h；驗(yàn)證試驗(yàn)中3批樣品綜合評(píng)分的RSD=2.09%（n=3），藥物含量平均值為6.7 mg/g，符合不低于6.0 mg/g的質(zhì)量要求。結(jié)論：優(yōu)化的青藤外敷貼制備工藝設(shè)計(jì)合理、穩(wěn)定、可行，所制敷貼黏附性較好、藥物含量合格。

青藤外敷貼；制備工藝；黏附力指標(biāo)；正交試驗(yàn)；青藤堿；含量測(cè)定；高效液相色譜法

青藤堿（Sinomenine）是從傳統(tǒng)中藥青風(fēng)藤（Sinomenii caulis）中提取的一種生物堿，其活性成分有多種藥理作用，是風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎類(lèi)疾病常用的特效治療藥物［1-2］。但由于青藤堿本身化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定、易分解，口服青藤堿類(lèi)藥物利用效率較低［3］，且需要長(zhǎng)時(shí)間服藥，故一般將其制成緩控釋制劑［4］。其中，貼劑是一種可經(jīng)過(guò)中醫(yī)穴位釋放給藥的經(jīng)皮給藥系統(tǒng)（TDDS），可促進(jìn)藥物發(fā)揮較顯著的治療效果。本試驗(yàn)以青藤堿為主藥，以聚丙烯吡咯烷酮及聚丙烯酸鈉等新型高分子材料為親水凝膠骨架貼，通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)考察并優(yōu)化青藤外敷貼的制備工藝，并對(duì)該工藝制備的青藤堿含量進(jìn)行測(cè)定，為該制劑的臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)。

1　材料

1.1儀器

DZ-3BCⅡ型真空干燥箱（浙江黃巖寧溪醫(yī)療器械有限公司）；AB265-S型分析電子天平（上海良平儀器儀表有限公司）；SB-5200D型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；DF-101Z型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（北京金紫光儀器儀表公司）；高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）；初黏力測(cè)試裝置、持黏力測(cè)試裝置及剝離強(qiáng)度測(cè)試裝置（均為自制）。

1.2藥品與試劑

青藤堿對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110774-200507，純度：98%）；青藤堿（原料藥，陜西森弗生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20140915，純度：98%）；聚丙烯酸鈉（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司）；聚乙烯吡咯烷酮（廣東南方化學(xué)玻璃公司）；卡波姆940（上海至柔化工有限公司）；聚乙二醇400（天津博迪化工股份有限公司）；甘油（天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）；甲醇為色譜純，丙二醇及其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1黏性標(biāo)準(zhǔn)的制訂

根據(jù)2015年版《中國(guó)藥典》（四部）黏附力測(cè)定法中的結(jié)果判斷為標(biāo)準(zhǔn)［5］，按“初黏力”“持黏力”“剝離強(qiáng)度”的測(cè)定方法，先制備一組供試品進(jìn)行檢測(cè)，確定樣品中各指標(biāo)符合要求的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)值為初黏力11.7 cm（以下）、持黏力4.5 min（以上）、剝離強(qiáng)度18.5 s（以上），符合以上指標(biāo)則表明貼劑性能良好。

2.2貼劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)

2.2.1初黏力的測(cè)定采用斜坡滾球測(cè)定方法［6］。將貼劑平整貼合于具有10°傾斜角的斜面板上，黏性膏體面向上。取擦拭干凈的14號(hào)不銹鋼球3個(gè)，將其從斜面板頂端自由滾下，測(cè)量鋼球在水平位置的膠粘面滾動(dòng)而產(chǎn)生的距離，以經(jīng)過(guò)距離的長(zhǎng)短表示初黏力的大小。經(jīng)測(cè)定后，在均符合黏性標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果中，鋼球滾動(dòng)的距離越短，證明初黏力越大。再根據(jù)經(jīng)過(guò)距離的長(zhǎng)短進(jìn)行評(píng)分，最高記9分，最短記1分。

2.2.2持黏力的測(cè)定［7］將一塊潔凈的不銹鋼板垂直放置，裁剪好貼劑貼于不銹鋼板表面，沿貼劑豎直方向掛一砝碼，質(zhì)量為200 g，記錄其脫落時(shí)間。在測(cè)得所有符合標(biāo)準(zhǔn)的試驗(yàn)結(jié)果中，以時(shí)間最長(zhǎng)記9分，其余的與之相比按照8～1分記錄，依次遞減。

2.2.3剝離強(qiáng)度的測(cè)定［8］取裁剪的貼劑貼合在潔凈垂直的不銹鋼板上折返180°，確保貼膏面與不銹鋼板之間充分貼合、無(wú)氣泡，再將質(zhì)量10 g的砝碼懸掛于貼劑上，與不銹鋼板平行，用秒表記錄下貼劑完全從鋼板上剝離的時(shí)間。將試驗(yàn)結(jié)果中符合標(biāo)準(zhǔn)的最長(zhǎng)完全剝離時(shí)間記9分，其他依次遞減，時(shí)間最短記1分。

2.3青藤外敷貼的組成及制備工藝

2.3.1空白基質(zhì)組成將聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸鈉、卡波姆940、丙二醇、聚乙二醇400、甘油按照8∶1∶1∶4∶0.5∶0.5的質(zhì)量比均勻混合。組成基質(zhì)的聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸鈉為親水凝膠骨架貼材料，丙二醇、甘油均有保濕作用，甘油還有防腐作用，聚乙二醇400為增塑劑［9］。

2.3.2制備工藝將70 g青藤堿（經(jīng)藥用粉碎機(jī)粉碎，過(guò)100目篩）、空白基質(zhì)及軟化劑（橄欖油）充分混勻，在一定溫度條件下加熱一定時(shí)間并不停地緩慢攪拌。將得到的膠漿用澆鑄法趁熱在模具中鋪展成不超過(guò)1.5 mm厚的凝膠貼［10］，待自然晾干后放入50℃真空干燥，直至表面固化有彈性，室溫放置，脫模。在制備的凝膠貼下層以聚氯乙烯（PVC）膜覆蓋，上層則覆蓋以醫(yī)用透明膠，貼劑在中間，表面呈凹凸不平狀。以下試驗(yàn)按照此工藝制備青藤外敷貼。

2.4樣品中青藤堿的含量測(cè)定

2.4.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取青藤堿對(duì)照品4.46 mg，置于10 ml具塞量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.446 mg/ml的對(duì)照品溶液。

2.4.2供試品溶液的制備取樣品貼片2.5 g，超聲（功率：220 W，頻率：50 Hz）30 min，用0.45μm微孔濾膜濾去雜質(zhì)，濾液轉(zhuǎn)移至10 ml具塞量瓶中定容，即為供試品溶液。

2.4.3色譜條件色譜柱為Hypersil GOLD C18（150 mm×2.1 mm，3 μm）；流動(dòng)相為水-乙腈-乙二胺（70∶30∶0.25），流速為0.3 ml/min；進(jìn)樣體積為10μl；檢測(cè)波長(zhǎng)為262 nm；柱溫為室溫。

2.4.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及定量限試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液1、2、5、7、8 ml置于10 ml量瓶中，以甲醇溶液稀釋定容，得質(zhì)量濃度為0.044 6、0.089 2、0.223 0、0.312 2、0.356 8 mg/ml的系列對(duì)照品溶液，經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣，以對(duì)照品質(zhì)量濃度（c）及對(duì)應(yīng)的峰面積（A）為橫、縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程為A=6 291.5c-782.07（R2=0.999 8）。結(jié)果表明，青藤堿檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.044 6～0.356 8 mg/ml。同時(shí)計(jì)算得定量限為0.044 6 mg/ml。

2.4.5專(zhuān)屬性試驗(yàn)取未加青藤堿的空白基質(zhì)樣品，按照“2.4.2”項(xiàng)下方法制備成溶液，同供試品溶液分別進(jìn)樣，結(jié)果顯示空白基質(zhì)對(duì)青藤堿含量測(cè)定無(wú)干擾。

2.4.6精密度試驗(yàn)吸取質(zhì)量濃度為2.5 mg/ml的青藤堿對(duì)照液10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算峰面積的RSD為1.53%，結(jié)果表明儀器精密度良好（n=5）。

2.4.7穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品溶液10μl，分別在放置0、2、4、6、8 h后測(cè)定峰面積，計(jì)算青藤堿含量。結(jié)果，含量的RSD為1.82%（n=5），表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.8回收率試驗(yàn)取已知含量為6.23 mg/g的樣品2.5 g，共5份，精密稱(chēng)取一定量青藤堿對(duì)照品加入到樣品中，同“2.4.2”項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣分析，計(jì)算青藤堿含量及回收率，結(jié)果平均回收率為100.25%（RSD=1.27%，n=5）。

2.5正交試驗(yàn)優(yōu)化處方

經(jīng)預(yù)試驗(yàn)，確定以“初黏力”“持黏力”“剝離強(qiáng)度”為客觀指標(biāo)，確定加熱攪拌時(shí)間（A，h）、加熱溫度（B，℃）和各組分（軟化劑、空白基質(zhì)和青藤堿）加入順序（C）為主要影響因素，采用L9（34）正交表設(shè)計(jì)試驗(yàn)［11］。3個(gè)指標(biāo)的綜合評(píng)分即為各指標(biāo)評(píng)分的總和［12］。因素與水平見(jiàn)表1；正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見(jiàn)表2；方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。

表1　因素與水平Tab 1　Factors and levels

表2　正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Tab 2　Orthogonal test design and results

表3　方差分析結(jié)果Tab 3　Variance analysis results

由試驗(yàn)結(jié)果可知，各因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響大小為C＞B＞A，其中加入順序（C）影響顯著，為主要因素。故由此確定最優(yōu)工藝為A1B3C3，即加熱攪拌時(shí)間1 h、加熱溫度80℃，加入順序?yàn)椋瞻谆|(zhì)+青藤堿）+軟化劑。

2.6驗(yàn)證試驗(yàn)

按最優(yōu)工藝重復(fù)制備青藤外敷貼3批，即取空白基質(zhì)加入青藤堿，再加入適量軟化劑，在溫度80℃的條件下緩慢攪拌1 h。所制青藤外敷貼中的藥物含量應(yīng)不低于6.0 mg/g，綜合評(píng)分應(yīng)不低于22分。結(jié)果綜合評(píng)分平均值為23.33分（RSD= 2.09%，n=3），表明該工藝制備的青藤外敷貼穩(wěn)定合理、黏附性較好、可重復(fù)使用，符合貼劑對(duì)黏貼性能的要求。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4　驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果Tab 4　Result of verification test

3　討論

藥物制成TDDS使用可以直接通過(guò)皮膚發(fā)揮藥效，具有給藥速度可控、持續(xù)，用藥部位位于體表等特點(diǎn)，且副作用小［13-14］，故目前越來(lái)越多地應(yīng)用于中醫(yī)臨床。在中藥穴位給藥過(guò)程中，使用凝膠骨架型貼片，更具有療效快、止痛作用強(qiáng)、成癮性小等優(yōu)點(diǎn)［15］，是中藥TDDS研究的一種新的有益探索。本試驗(yàn)研制的青藤堿外敷貼有較好的黏附性，且制備工藝設(shè)計(jì)合理、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可控，因此具有良好的臨床療效和開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。同時(shí)本文的試驗(yàn)方法可以作為易揮發(fā)中藥有效成分TDDS的研發(fā)參考。

本文主要以貼劑的黏性為指標(biāo)，包括“初黏力”“持黏力”“剝離強(qiáng)度”3種指標(biāo)，考察用于治療關(guān)節(jié)炎的青藤堿外敷貼的最優(yōu)制備工藝。但該貼劑的其他質(zhì)量控制項(xiàng)目尚未建立，故其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚待完善。在后續(xù)的研究中，將進(jìn)一步考察其釋藥情況及相關(guān)機(jī)制，再結(jié)合藥物滲透量及釋放度等指標(biāo)繼續(xù)深入研究其制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

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（編輯：劉萍）

Preparation Technology Optimization of Sinomenine Topical Paste by Orthogonal Test

LI Chenxue，QU Bingnan，CAO Ying，YANG Yuhe，GUO Yuyan，LI Yongji，WANG Rui
（College of Pharmacy，Heilongjiang University of TCM，Harbin 150040，China）

OBJECTIVE：To optimize the preparation technology of Sinomenine topical paste.METHODS：Using“initial viscous force”，“holding viscous force”and“peeling strength”as index，heating and stirring time（A，h），heating temperature （B，℃）and the sequence of adding composition（softening agent，blank matrix and sinomenine）（C）as influential factors，the preparation technology of Sinomenine topical paste was optimized by orthogonal test and verified.At the same time，the content of sinomenine was determined by HPLC method.RESULTS：The optimal preparation technology of Sinomenine topical pasta was as follows as adding blank matrix and sinomenine，and then adding softening agent，heating at 80℃，stirring for 1 h.In verification test，RSD of comprehensive score for 3 batches of samples were 2.09%（n=3）；average contents of samples were 6.7 mg/g，which was in line with the requirement of≥6.0 mg/g.CONCLUSIONS：The optimal preparation technology of Sinomenine topical pasta is reasonable，stable and feasible.The paste shows good adhesiveness and is qualified in content.

Sinomenine topical paste；Preparation technology；Adhesiveness index；Orthogonal test；Sinomenine；Content determination；HPLC

R285.2

A

1001-0408（2016）22-3112-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.22.26

黑龍江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.H201472）

＊碩士研究生。研究方向：中藥新藥與新劑型。E-mail：493809332@qq.com

副教授，碩士生導(dǎo)師。研究方向：新藥研發(fā)及新劑型。電話：0451-87266893。E-mail：wrdx@sina.com

2016-02-18

2016-04-05）