郭　杰，尹曉剛

（1.南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校第一附屬醫(yī)院門(mén)診部，河南南陽(yáng)　473000；2.南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南南陽(yáng)　473000）

酸棗仁湯對(duì)老年失眠模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響

郭杰1＊，尹曉剛2#

（1.南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校第一附屬醫(yī)院門(mén)診部，河南南陽(yáng)473000；2.南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南南陽(yáng)473000）

目的：研究酸棗仁湯對(duì)老年失眠模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響。方法：將大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、陽(yáng)性組［艾司唑侖片，2×10-3g/（kg·d）］和酸棗仁湯低、中、高劑量組［5、10、15 g/（kg·d）］，每組10只。除正常組外，其余各組大鼠均于頸背部ih D-半乳糖+睡眠剝奪以復(fù)制老年失眠模型，造模6周后各給藥組大鼠連續(xù)ig相應(yīng)藥物1周，正常組和模型組大鼠ig生理鹽水。觀察大鼠逃避潛伏期、原平臺(tái)象限游泳時(shí)間百分比、穿過(guò)原平臺(tái)位置的次數(shù)，測(cè)定大鼠腦組織中谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）和下丘腦中白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、5-羥色胺（5-HT）含量。結(jié)果：與正常組比較，各組大鼠逃避潛伏期延長(zhǎng)、原平臺(tái)象限游泳時(shí)間百分比降低、穿過(guò)原平臺(tái)位置的次數(shù)減少，腦組織中Glu、GABA含量增加，下丘腦中IL-1β、5-HT含量減少（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組大鼠上述指標(biāo)均得到明顯改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與陽(yáng)性組比較，酸棗仁湯中、高劑量組大鼠上述指標(biāo)變化更為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：酸棗仁湯可明顯增加老年失眠模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，且可降低腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量、減輕Glu、GABA參與的遲發(fā)性神經(jīng)元損害。

酸棗仁湯；老年失眠模型大鼠；學(xué)習(xí)記憶能力；神經(jīng)遞質(zhì)

失眠是最常見(jiàn)的一種睡眠障礙類(lèi)型，一般指睡眠時(shí)間和（或）質(zhì)量不滿(mǎn)足且影響白天社會(huì)功能的一種主觀體驗(yàn)［1］。流行病學(xué)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，失眠發(fā)病率呈不斷上升趨勢(shì)，且常見(jiàn)于老年人，其中40%～50%65歲以上的老年人都表現(xiàn)出失眠的相關(guān)癥狀［2］。失眠是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，近年有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)遞質(zhì)參與了睡眠機(jī)制的調(diào)節(jié)［3］。酸棗仁湯收載于《金匱要略》，由酸棗仁、甘草、知母、茯苓、川芎等5味藥材組成，具有明顯的鎮(zhèn)靜、催眠、抗焦慮、抗抑郁以及改善睡眠等作用［4］，但目前對(duì)其作用機(jī)制尚不明確。故在本研究中作者擬考察酸棗仁湯對(duì)老年失眠模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力和腦組織中谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）、5-羥色胺（5-HT）以及下丘腦中白細(xì)胞介素1β（IL-1β）含量的影響，以進(jìn)一步探討酸棗仁湯的作用，為其基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用提供參考。

1　材料

1.1儀器

7180全自動(dòng)生化分析儀（日本日立公司）；TGL-160臺(tái)式高速離心機(jī)（上海醫(yī)用分析儀器廠）；MP31001電子天平（上海舜宇恒平科技儀器有限公司）；Waters e2695高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）。

1.2藥材、藥品與試劑

酸棗仁、甘草、知母、茯苓、川芎均來(lái)自南陽(yáng)醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校第一附屬醫(yī)院中藥房，經(jīng)該院主任中藥師王書(shū)梅鑒定均為合格藥材；艾司唑侖片（焦作市博愛(ài)藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20140806，規(guī)格：1 mg/片）；IL-1β酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（上海星科生物科技有限公司）；5-HT ELISA試劑盒（上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司）；醋酸鈉緩沖液、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.3動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠60只，♂，體質(zhì)量（180±20）g，由北京維通利華公司提供［合格證號(hào)：SCXK（京）2007-0001］。常規(guī)飼養(yǎng)2周，室溫為23～25℃，相對(duì)濕度為40%～70%。

2　方法

2.1酸棗仁湯的制備[4]

稱(chēng)取酸棗仁15 g、甘草3 g、知母6 g、茯苓6 g、川芎6 g，加適量冷水浸泡30 min，再以“武火”煮沸約10 min后改為“文火”慢煎30 min，煎煮2次；分別濾出藥液，將2次藥液混勻，濃縮，得每1 ml含生藥2 g的藥液，即得。

2.2實(shí)驗(yàn)分組、造模與給藥

將60只健康SD大鼠隨機(jī)分為6組，即正常組、模型組、陽(yáng)性組［艾司唑侖片，2×10-3g/（kg·d）］和酸棗仁湯低、中、高劑量組［5、10、15 g/（kg·d）］，每組10只。除正常組外，其余各組大鼠均于頸背部連續(xù)ih D-半乳糖［60 mg/（kg·d）］6周復(fù)制亞急性衰老模型［5］。然后將大鼠放入自制睡眠剝奪箱中給予睡眠剝奪，睡眠剝奪時(shí)間為1周［當(dāng)大鼠進(jìn)入眼球快速運(yùn)動(dòng)睡眠時(shí)相時(shí)肌張力減弱，掉入水環(huán)境中，然后會(huì)迅速爬上平臺(tái)，處于一種想睡而不能睡的狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)時(shí)保持水環(huán)境和實(shí)驗(yàn)室溫度相同（均保持在22～25℃），實(shí)驗(yàn)箱每日換水；睡眠剝奪從早晨6：00開(kāi)始，每天1 h］，以大鼠呵欠、瞌睡、精神不振、活動(dòng)量少、目光呆滯為造模成功。造模成功后，各給藥組大鼠ig相應(yīng)藥物，正常組和模型組大鼠ig等量生理鹽水，連續(xù)1周。艾司唑侖片給藥劑量為人臨床用量的6倍，酸棗仁湯高、中、低劑量分別為人臨床用量的18、9、4.5倍。

2.3各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的考察

給藥結(jié)束后，采用Morris水迷宮對(duì)各組大鼠進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)，考察大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。本實(shí)驗(yàn)所用水迷宮為高50 cm、直徑120 cm的圓形水池，分4個(gè)象限，池中水溫控制在20～23℃。將直徑為12 cm的圓形平臺(tái)固定于某一象限，使平臺(tái)面低于水面1 cm，實(shí)驗(yàn)前先將大鼠放入水中適應(yīng)環(huán)境。（1）定位航行實(shí)驗(yàn)：該試驗(yàn)分別以4個(gè)象限的某一固定點(diǎn)為起點(diǎn)、平臺(tái)為終點(diǎn)，然后面向池壁將大鼠放入水池中，記錄大鼠由起點(diǎn)游至終點(diǎn)的時(shí)間，即逃避潛伏期。實(shí)驗(yàn)允許最大逃避潛伏期為60 s。（2）空間探索實(shí)驗(yàn)：將平臺(tái)撤去，于水池中任意一點(diǎn)將大鼠放入水中游泳，記錄大鼠在120 s內(nèi)穿過(guò)原平臺(tái)位置的次數(shù)，并記錄大鼠在原平臺(tái)象限游泳的時(shí)間占總游泳時(shí)間的百分比。

2.4各組大鼠腦組織中Glu、GABA含量的測(cè)定

各組大鼠禁食、禁水24 h后，采用斷頭法處死。取大鼠左側(cè)腦組織，以離心半徑為10 cm、3 000 r/min離心15 min，重復(fù)操作2次，收集上清液。采用高效液相色譜法檢測(cè)腦組織中Glu、GABA含量［6］。

2.5各組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量的測(cè)定

取上述處死的大鼠，迅速剪斷延髓，將腦組織快速去除，分離出下丘腦，洗凈血液，于-80℃條件下保存。采用ELISA法測(cè)定下丘腦IL-1β、5-HT含量，具體操作按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3　結(jié)果

3.1各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力考察結(jié)果

與正常組比較，模型組及各給藥組大鼠逃避潛伏期延長(zhǎng)，穿過(guò)原平臺(tái)位置的次數(shù)減少，原平臺(tái)象限游泳時(shí)間百分比降低（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組大鼠逃避潛伏期縮短，穿過(guò)原平臺(tái)位置的次數(shù)增加，原平臺(tái)象限游泳時(shí)間百分比升高（P＜0.05）；與陽(yáng)性組比較，酸棗仁湯中、高劑量組大鼠逃避潛伏期縮短，穿過(guò)原平臺(tái)位置的次數(shù)增加，原平臺(tái)象限游泳時(shí)間百分比升高（P＜0.05）。各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力考察結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力考察結(jié)果（±s，n=10）Tab 1　The learning and memory ability of rats in each group（±s，n=10）

表1　各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力考察結(jié)果（±s，n=10）Tab 1　The learning and memory ability of rats in each group（±s，n=10）

注：與正常組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與陽(yáng)性組比較，ΔP＜0.05Note：vs.normal group，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05；vs. positive group，ΔP＜0.05

原平臺(tái)象限游泳時(shí)間百分比，% 36.28±1.76 26.94±3.10＊34.67±2.71＊#35.03±3.14＊#37.99±2.91＊#Δ41.63±2.58#Δ組別正常組模型組陽(yáng)性組酸棗仁湯低劑量組酸棗仁湯中劑量組酸棗仁湯高劑量組劑量，g/（kg·d）2×10-35 10 15逃避潛伏期，s 36.28±1.76 54.38±2.14＊40.39±2.13＊#41.31±2.09＊#39.39±2.19＊#Δ36.03±1.58#Δ穿過(guò)原平臺(tái)位置的次數(shù)5.89±1.32 0.00±0.00＊1.94±0.34＊#1.89±0.41＊#2.63±0.37＊#Δ3.56±0.48＊#Δ

3.2各組大鼠腦組織中Glu、GABA含量測(cè)定結(jié)果

與正常組比較，模型組及各給藥組大鼠腦組織中Glu、GABA含量增加（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組大鼠腦組織中Glu、GABA含量減少（P＜0.05）；與陽(yáng)性組比較，酸棗仁湯中、高劑量組大鼠腦組織中Glu、GABA含量減少（P＜0.05）。各組大鼠腦組織中Glu、GABA含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　各組大鼠腦組織中Glu、GABA含量測(cè)定結(jié)果（±s，n= 10，g/L）Tab 2　The contents of Glu and GABA in cerebral tissue of rats in each group（±s，n=10，g/L）

表2　各組大鼠腦組織中Glu、GABA含量測(cè)定結(jié)果（±s，n= 10，g/L）Tab 2　The contents of Glu and GABA in cerebral tissue of rats in each group（±s，n=10，g/L）

注：與正常組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與陽(yáng)性組比較，ΔP＜0.05Note：vs.normal group，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05；vs. positive group，ΔP＜0.05

GABA 0.24±0.05 0.42±0.08＊0.35±0.06＊#0.36±0.07＊#0.32±0.05＊#Δ0.27±0.04＊#Δ組別正常組模型組陽(yáng)性組酸棗仁湯低劑量組酸棗仁湯中劑量組酸棗仁湯高劑量組劑量，g/（kg·d）2×10-35 10 15 Glu 0.28±0.06 0.59±0.14＊0.46±0.10＊#0.49±0.08＊#0.40±0.06＊#Δ0.35±0.05＊#Δ

3.3各組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量測(cè)定結(jié)果

與正常組比較，模型組各給藥組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量均減少（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量增加（P＜0.05）；與陽(yáng)性組比較，酸棗仁湯中、高劑量組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量增加（P＜0.05）。各組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　各組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量測(cè)定結(jié)果（±s，n=10）Tab 3　The contents of IL-1β and 5-HT in hypothalamus of rats in each group（±s，n=10）

表3　各組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量測(cè)定結(jié)果（±s，n=10）Tab 3　The contents of IL-1β and 5-HT in hypothalamus of rats in each group（±s，n=10）

注：與正常組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與陽(yáng)性組比較，ΔP＜0.05Note：vs.normal group，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05；vs. positive group，ΔP＜0.05

5-HT，ng/g 315.42±25.23 228.94±14.35＊259.89±16.42＊#254.48±19.48＊#276.39±15.40＊#Δ293.56±17.65＊#Δ組別正常組模型組陽(yáng)性組酸棗仁湯低劑量組酸棗仁湯中劑量組酸棗仁湯高劑量組劑量，g/（kg·d）2×10-35 10 15 IL-1β，pg/ml 180.45±15.45 108.49±12.89＊143.29±15.69＊#140.39±16.42＊#156.32±18.32＊#Δ168.49±14.26＊#Δ

4　討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為失眠屬“不得眠”“不寐”等范疇；中醫(yī)理論認(rèn)為該病實(shí)證多因邪熱擾心引起，虛證多因心失所養(yǎng)、陰血不足引起，故而肝血虛所致的失眠較為常見(jiàn)［7-8］。酸棗仁湯中酸棗仁具有養(yǎng)血補(bǔ)肝、寧心安神的作用，茯苓寧心安神，知母滋陰潤(rùn)燥、清熱除煩，川芎調(diào)肝血而疏肝氣，甘草調(diào)和諸藥，故該方為治療失眠的一劑良方。艾司唑侖片是常用的一種抗失眠藥物，具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)靜催眠作用。夏路風(fēng)等［9］報(bào)道，其治療失眠癥患者的總有效率達(dá)91.83%，故筆者在本實(shí)驗(yàn)中選其作為陽(yáng)性對(duì)照藥物。

Morris水迷宮是一種通過(guò)強(qiáng)迫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物游泳來(lái)學(xué)習(xí)尋找隱藏于水中平臺(tái)的操作過(guò)程，是世界上公認(rèn)的較為客觀的學(xué)習(xí)記憶能力的評(píng)價(jià)方法。在本實(shí)驗(yàn)中，與正常組比較，模型組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力明顯減弱，具體表現(xiàn)為避潛伏期延長(zhǎng)、穿過(guò)原平臺(tái)位置的次數(shù)減少、原象限游泳時(shí)間百分比降低，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)造模成功。與模型組比較，酸棗仁湯各劑量組大鼠逃避潛伏期縮短、穿過(guò)原平臺(tái)位置的次數(shù)增加、原象限游泳時(shí)間百分比升高，提示給藥后大鼠的學(xué)習(xí)記憶得到了改善。

神經(jīng)遞質(zhì)是機(jī)體信息傳遞的物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)還參與機(jī)體很多生理、病理過(guò)程，具有調(diào)節(jié)睡眠的作用［10］。機(jī)體中樞神經(jīng)興奮和抑制功能失調(diào)與失眠有密切關(guān)系，其中Glu和GABA是哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要神經(jīng)遞質(zhì)［6］。Glu作為興奮性氨基酸，能夠引起覺(jué)醒增多、總睡眠時(shí)間與慢波睡眠減少［11］。GABA是一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，廣泛分布于外周神經(jīng)系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，對(duì)哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有普遍的抑制作用［12］。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，酸棗仁湯各劑量組大鼠腦內(nèi)Glu、GABA含量均顯著減少，且隨著給藥劑量的增加腦內(nèi)Glu、GABA含量減少越明顯。近年研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子可作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)參與睡眠的調(diào)節(jié)。大鼠下丘腦中的IL-1表達(dá)存在晝夜規(guī)律，表達(dá)高峰相與睡眠高反抑制，通過(guò)外源性補(bǔ)充IL-1后能夠延長(zhǎng)大鼠的快速動(dòng)眼睡眠時(shí)間。5-HT神經(jīng)元胞體主要集中于中縫核群，中縫核頭部的5-HT能神經(jīng)元能夠參與維持和產(chǎn)生非快速動(dòng)眼睡眠，并且5-HT神經(jīng)元在覺(jué)醒時(shí)興奮性最高，興奮5-HT能神經(jīng)元能夠使覺(jué)醒時(shí)間延長(zhǎng)。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，酸棗仁湯各劑量組大鼠腦內(nèi)IL-1β、5-HT含量均顯著增加（P＜0.05）。

綜上所述，酸棗仁湯可明顯改善老年失眠模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，其機(jī)制可能與降低腦內(nèi)Glu、GABA含量，減輕Glu、GABA參與的遲發(fā)性神經(jīng)元損傷，增加下丘腦IL-1β、5-HT含量有關(guān)。但其更多的可能作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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（編輯：林靜）

Effects of Suanzaoren Decoction on Learning and Memory Ability and Brain Neurotransmitters Content of Senile Insomnia Model Rats

GUO Jie1，YIN Xiaogang2
（1.Outpatient Department，the First Affiliated Hospital of Nanyang Medical College，Henan Nanyang 473000，China；2.Dept.of Neurology，the First Affiliated Hospital of Nanyang Medical College，Henan Nanyang 473000，China）

OBJECTIVE：To study the effects of Suanzaoren decoction on learning and memory ability and brain neurotransmitters content of senile insomnia model rats.METHODS：Rats were randomly divided into normal group，model group，positive group［Estazolam tablet，2×10-3g/（kg·d）］and Suanzaoren decoction low-dose，middle-dose and high-dose groups［5，10，15 g/（kg·d）］，with 10 rats in each group.Except for normal group，those groups were given D-galactose ih on the back+sleep deprivation to induce senile insomnia model.6 weeks after modeling，treatment groups were given relevant medicine intragastrically for one week，and normal group and model group were given normal saline intragastrically.The escape latency，the percentage of swimming time and the time of original platform crossing were observed，and the contents of Glu and GABA in cerebral tissue were determined as well as the contents of IL-1β and 5-HT in hypothalamus.RESULTS：Compared with normal group，escape latency of rats prolonged and the contents of IL-1β and 5-HT in hypothalamus decreased，while the percentage of swimming time of original platform quadirant，the time of original platform crossing and the contents of Glu and GABA in cerebral tissue increased （P＜0.05）.Compared with model group，above index of treatment groups improved significantly，with statistical significance（P＜0.05）.Compared with positive group，the changes of above index were more significant in Suanzaoren decoction middle-dose and high-dose groups，with statistical significance（P＜0.05）.CONCLUSIONS：Suanzaoren decoction could markedly enhance the learning and memory ability of senile insomnia model rats，and reduce neurotransmitters content and relieve the delayed neuronal damage which led by Glu and GABA.

Suanzaoren decoction；Senile insomnia model rats；Learning and memory ability；Neurotransmitter

R285

A

1001-0408（2016）22-3085-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.22.18

＊主治中醫(yī)師。研究方向：神經(jīng)內(nèi)科。E-mail：nywx@163.com

副主任醫(yī)師，碩士。研究方向：神經(jīng)內(nèi)科。電話(huà)：0377-63328308

2016-01-16

2016-06-25）