易　雪，關(guān)　軍，趙　霞，周　英，劉小紅，余　丹，鄒　亮，張　婷

(湖北省武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院血液科　430022)

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·經(jīng)驗(yàn)交流·

18例自體DC-CIK治療多發(fā)性骨髓瘤的回顧性分析*

易雪，關(guān)軍，趙霞，周英，劉小紅，余丹，鄒亮，張婷

(湖北省武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院血液科430022)

目的探討以樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(DC-CIK)為效應(yīng)細(xì)胞的生物免疫療法治療多發(fā)性骨髓瘤的臨床意義。方法回顧性分析18例接受DC-CIK治療的多發(fā)性骨髓瘤患者，其中10例為完全緩解(CR)和非常好的部分緩解(VGPR)組(CR/VEPR組)，8例為部分緩解(PR)和疾病進(jìn)展(PD)組(PR/PD組)。比較DC-CIK對(duì)兩組患者的臨床效應(yīng)。結(jié)果DC-CIK治療后CR/VGPR組患者的生存質(zhì)量和免疫不全麻痹程度較PR/PD組改善明顯(P<0.05)。結(jié)論DC-CIK免疫治療多發(fā)性骨髓瘤有一定臨床意義。

多發(fā)性骨髓瘤；樹(shù)突細(xì)胞；細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞

以免疫調(diào)節(jié)劑硼替佐米為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療在過(guò)去11年里被證明能有效延緩初診或復(fù)發(fā)多發(fā)性骨髓瘤總生存期，二次自體造血干細(xì)胞移植和異基因造血干細(xì)胞移植及自體聯(lián)合異基因造血干細(xì)胞移植等毒性更強(qiáng)的治療方案被積極用于臨床，并取得較單純化療顯著延長(zhǎng)無(wú)進(jìn)展生存期和總生存期的結(jié)論。盡管如此，多發(fā)性骨髓瘤仍然無(wú)法治愈，幾乎所有患者最終會(huì)復(fù)發(fā)。如何有效延長(zhǎng)平臺(tái)期，提高患者的生存質(zhì)量，成了多發(fā)性骨髓瘤治療的目標(biāo)。樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(DC-CIK)作為一種過(guò)繼性免疫療法近年來(lái)已成為實(shí)體瘤治療的熱點(diǎn)。本院嘗試將自體DC-CIK治療用于多發(fā)性骨髓瘤患者，目的在于了解DC-CIK在多發(fā)性骨髓瘤中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1　資料與方法

1.1一般資料回顧性分析2013年2月至2014年12月本院血液科收治的給予自體DC-CIK治療的多發(fā)性骨髓瘤患者共18例，男14例，女4例；年齡52～78歲，中位年齡65.5歲。18例患者均符合2003年國(guó)際骨髓瘤工作組(IMWG)診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。分期參考國(guó)際預(yù)后分期系統(tǒng)(ISS)。給予DC-CIK治療前評(píng)估2組患者療效，采用歐洲血液和骨髓移植協(xié)作組(EBMT)標(biāo)準(zhǔn)將患者分為兩組，一組包括完全緩解(CR)和非常好的部分緩解(VGPR)的CR/VEPR組；對(duì)照組對(duì)為包括部分緩解(PR)和疾病進(jìn)展(PD)的PR/PD組。所有患者體力狀態(tài)(ECOG)評(píng)分小于或等于2分，無(wú)嚴(yán)重并發(fā)癥和夾雜病?；举Y料見(jiàn)表1。

表1　　治療前患者一般資料

1.2方法[2]

1.2.1DC培養(yǎng)及鑒定無(wú)菌抽取患者靜脈血50 mL，通過(guò)密度梯度離心法提取外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，將PBMC重懸于血清培養(yǎng)基中(購(gòu)自北京寶日醫(yī)公司)，置于37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱中孵育，2 h后將非貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)到另一培養(yǎng)瓶用于培養(yǎng)CIK，貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中加入細(xì)胞因子rhGM-CSF 1 000 U/mL和rhIL-4 500 U/mL刺激細(xì)胞向DC分化；在培養(yǎng)的第6小時(shí)，加入TNF-α 100 ng/mL刺激DC成熟；18 h后收集并計(jì)數(shù)貼壁DC細(xì)胞。DC活細(xì)胞經(jīng)過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色，應(yīng)達(dá)到80%以上；流式細(xì)胞儀檢測(cè)確定是否成熟。

1.2.2CIK制備方法和質(zhì)控非貼壁細(xì)胞用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)(購(gòu)自北京寶日醫(yī)公司)，調(diào)整濃度為1×106/mL，加入IFN-γ 1 000 U/mL培養(yǎng)24 h后，加入抗CD3單克隆抗體50 μg/mL、rhIL-2 300 U/mL，每培養(yǎng)3～4 d，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)液和rhIL-2，并調(diào)整細(xì)胞濃度至2×105/mL。CIK活細(xì)胞經(jīng)過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色，應(yīng)達(dá)到80%以上；流式細(xì)胞儀檢測(cè)確定CD3+CD56+細(xì)胞的比例是否明顯提高。

1.2.3DC-CIK共培養(yǎng)和質(zhì)控收集DC細(xì)胞后與CIK細(xì)胞按約1∶10比例共培養(yǎng)14 d，無(wú)菌檢測(cè)后，收集細(xì)胞，其數(shù)量達(dá)到1×1010個(gè)以上。DC-CIK活細(xì)胞經(jīng)過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色，應(yīng)達(dá)到80%以上；流式細(xì)胞儀檢測(cè)確定CD3+CD56+細(xì)胞的比例應(yīng)該在20%以上。細(xì)胞殺傷試驗(yàn)：以DC-CIK為效應(yīng)細(xì)胞，以腫瘤細(xì)胞為靶細(xì)胞，將效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞按10∶1(數(shù)目比)的比例加入96孔U型板中，每孔含靶細(xì)胞1×104個(gè)，終體積為200 μL，設(shè)3個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)4 h，然后取上清，用乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒檢測(cè)效應(yīng)細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷率。

1.2.4DC-CIK回輸細(xì)胞質(zhì)量檢測(cè)合格后分3 d經(jīng)靜脈回輸給患者?；剌斍芭懦?xì)胞污染，離心，加入生理鹽水100 mL，混勻后2 h靜脈滴注。靜脈滴注前肌肉注射鹽酸異丙嗪25 mg。2次周期之間間隔6周。18例患者治療周期均大于或等于2周期。

1.3療效評(píng)估(1)兩組患者生存質(zhì)量(QOL)及免疫不全麻痹恢復(fù)情況。QOL參照美國(guó)芝加哥Rush-Presbyterian-St.Luke.醫(yī)學(xué)中心研制出的癌癥患者生命質(zhì)量測(cè)定量表(FACT-G)。免疫不全麻痹標(biāo)準(zhǔn)[3]：至少1個(gè)未受累免疫球蛋白指標(biāo)低于正常下限(IgG<7 g/L，IgA<0.7 g/L或IgM<0.4 g/L)。免疫不全麻痹程度：根據(jù)未受累免疫球蛋白定量低于正常下限的水平分為4度：無(wú)(正常下限以上，IgG≥7 g/L，IgA≥0.7 g/L或IgM≥0.4 g/L)，輕度(低于正常下限0～25%)，中度(低于正常下限26%～50%)，重度(低于正常下限值大于50%)。免疫不全麻痹改善的標(biāo)準(zhǔn)：治療后定期測(cè)定免疫球蛋白的數(shù)量，參照以上分度標(biāo)準(zhǔn)，再次分度，與初診時(shí)分度比較，分度提升1度為改善1級(jí)，以此類(lèi)推，改善級(jí)別分為2級(jí)、3級(jí)。(2)瘤負(fù)荷水平：參考2006年IMWG骨髓瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[4]分別于治療前和治療后3個(gè)月記錄患者骨髓瘤細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、β2微球蛋白(β2-M)水平、清蛋白、血清異常M蛋白水平、24 h尿液輕鏈、血肌酐(Scr)水平。(3)不良反應(yīng)：治療期間觀察患者一般生命體征，記錄不良事件。

2　結(jié)　　果

2.1治療效果治療后3個(gè)月的CR/VGPR組的FACT-G及免疫不全麻痹等指標(biāo)平均值均優(yōu)于PR/PD組患者(P<0.05),見(jiàn)表2。兩組患者治療后免疫不全麻痹恢復(fù)情況由治療前緩解狀態(tài)決定，VGPR/CR組的患者免疫狀態(tài)改善較PR/PD組患者顯著。VGPR/CR組治療前及治療后3個(gè)月骨髓瘤細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、β2-M水平、清蛋白、血清異常M蛋白、Scr等指標(biāo)的平均值較PR/PD組改善差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表3。

表2　　兩組患者QOL(FACT-G評(píng)分)和免疫 不全麻痹改善情況

表3　　瘤負(fù)荷水平評(píng)估±s)

a:與CR/VGPR組比較，t=2.07，P=1.89；b:與CR/VGPR組比較，t=1.89，P=0.06；c:與CR/VGPR組比較，t=1.35，P=0.194；d:與CR/VGPR組比較，t=1.92，P=0.072；e:與CR/VGPR組比較，t=1.34,P=0.197。

2.2不良反應(yīng)治療期間18例患者均無(wú)明顯骨髓抑制；18例患者基本無(wú)感染發(fā)生；4例患者回輸后出現(xiàn)短暫寒戰(zhàn)低熱，給予抗過(guò)敏處理后緩解。

3　討　　論

國(guó)內(nèi)外研究表明，CIK與功能最強(qiáng)的專(zhuān)職抗原提呈細(xì)胞樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)共培養(yǎng)，產(chǎn)生了更多的CD3+CD8+和CD3+CD56+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，和較多的NK樣T淋巴細(xì)胞[5-6]。CIK的增殖活性顯著增加，高分泌IL-12、IL-2、IFN-γ，細(xì)胞毒作用加強(qiáng)，DC表面標(biāo)記CD86、CD80、CD40的表達(dá)明顯增加，抗原提呈能力更強(qiáng)[7]。具有高效殺傷活性的CIK細(xì)胞和具有強(qiáng)大腫瘤抗原遞呈能力的DC聯(lián)合，兩者協(xié)同加強(qiáng)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用[8-10]。

本研究回顧性分析了本院2013年2月至2014年10月間行自體DC-CIK治療的18位多發(fā)性骨髓瘤患者,發(fā)現(xiàn)治療前疾病狀態(tài)是DC-CIK效應(yīng)的決定因素。回輸前瘤負(fù)荷越低，患者從DC-CIK治療中獲益越大，如QOL(主要在情感狀況和社會(huì)/家庭狀況方面)、免疫不全麻痹恢復(fù)程度(1級(jí)或2級(jí)為主)均改善明顯，瘤負(fù)荷水平變化不顯著?；剌斍凹膊√幱赑D的患者，單用DC-CIK者骨髓瘤持續(xù)進(jìn)展，QOL和免疫不全麻痹無(wú)改善；聯(lián)合化學(xué)治療者，雖然瘤負(fù)荷水平有所下降，但QOL和免疫不全麻痹無(wú)明顯改善。因?yàn)楸狙芯坷龜?shù)少，且為單臂分析，聯(lián)合化療、單用細(xì)胞免疫治療和單用化學(xué)治療之間并未充分對(duì)比，故是否聯(lián)合化學(xué)治療更能提高回輸后緩解率還有待進(jìn)一步研究證實(shí)。孫薏等[11]利用DC-CIK聯(lián)合沙利度胺治療26例復(fù)發(fā)難治性骨髓瘤，總體有效率為73.1%。

在安全性方面，本研究顯示，DC-CIK細(xì)胞免疫治療并未發(fā)現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)。這與其他研究結(jié)論一致[6,12-13]。

文獻(xiàn)表明，進(jìn)一步優(yōu)化和修飾DC-CIK技術(shù)也許能彌補(bǔ)DC-CIK在降低瘤負(fù)荷水平方面的不足。例如，采用單倍體DC(來(lái)自子女)體外刺激CIK細(xì)胞能增強(qiáng)IFN-γ分泌，抑制IL-4分泌，從而加強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷作用；透明質(zhì)酸介導(dǎo)的細(xì)胞游走受體(RHAMM)在多種腫瘤中高表達(dá)，DC-CIK聯(lián)合疫苗回輸靶向性更強(qiáng)，也許能達(dá)到體內(nèi)有效抗腫瘤作用[14-15]；將 DC、CIK 和某些抗原肽共同培養(yǎng),可以增強(qiáng)對(duì)某些缺乏特異性抗原的腫瘤細(xì)胞的殺傷能力[16-17]。

或許，免疫治療的目標(biāo)并不在于提高疾病緩解率，降低各種并發(fā)癥如感染的發(fā)生率，提高QOL才應(yīng)該逐漸成為衡量免疫治療療效的指標(biāo)。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2016.12.034

武漢市臨床醫(yī)學(xué)科研項(xiàng)目(WX14C01)。作者簡(jiǎn)介：易雪(1977-)，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事骨髓移植及移植物抗宿主病研究?！?/p>

，E-mail:hui_ch_eng@yahoo.com.cn。

R733.3

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1671-8348(2016)12-1687-03

2016-01-23

2016-02-26)