葉毅飛，胡健聲，朱聲濤（廣東省東莞市動物疫病預(yù)防控制中心，廣東 東莞 523086）

應(yīng)用全自動熒光酶聯(lián)免疫法檢測肉類中的大腸桿菌O157

葉毅飛，胡健聲，朱聲濤
（廣東省東莞市動物疫病預(yù)防控制中心，廣東 東莞 523086）

腸出血性大腸桿菌是引起食物中毒的一類重要的致病性細(xì)菌，大腸桿菌O157是其中的一個重要的血清型。本研究采集凍肉樣品，進(jìn)行大腸桿菌O157檢測，結(jié)果從雞肉和鴨肉中各檢出一份陽性樣品，陽性率分別為5.9%和12.5%，從結(jié)果可以看出，我市凍肉中存在有大腸桿菌0157污染。

全自動熒光酶聯(lián)免疫法；肉類；大腸桿菌O157

腸出血性大腸桿菌引起的腹瀉是目前世界范圍內(nèi)的重要公共衛(wèi)生問題之一，而大腸桿菌O157是其中的一個重要的血清型。自上世紀(jì)70年代后期發(fā)現(xiàn)以來，該病已在全球范圍內(nèi)引起數(shù)百起暴發(fā)流行。大腸桿菌O157感染人后，能引起人的出血性腹瀉和腸炎，且并發(fā)急性腎損傷、血栓性血小板減少性紫癜、微血管溶血性貧血等，嚴(yán)重的可致人死亡，重癥患者死亡率可達(dá)到5%～10%。近年來，國際上該病時有暴發(fā)，給人類健康和社會經(jīng)濟(jì)帶來了巨大損失。因此，日本、加拿大等國已將“大腸桿菌O157”列為必須報(bào)告的傳染病，予以高度重視。本研究采用全自動熒光酶免疫分析法（VIDAS法）檢測肉類中的大腸桿菌O157，為防止該病的進(jìn)一步傳播奠定基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1儀器和試劑

VIDASO157（含H7）檢測試劑盒（法國梅里埃）、改良EC肉湯基礎(chǔ)（廣州環(huán)凱），其余試劑均為分析純試劑；全自動熒光酶免疫分析儀（MINI VIDAS，法國梅里埃）、水浴鍋、生物安全柜。

1.2樣品

無菌采取凍肉庫中的凍肉，冷藏運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室待檢。

1.3方法

1.3.1無菌操作取25g樣品放入盛有225mL改良EC肉湯中，42℃培養(yǎng)18～24h。

1.3.2取1mL培養(yǎng)后的菌液，95～100℃加熱5min，冷卻至室溫。

1.3.3取0.5mL培養(yǎng)液，加入mini VIDAS檢測試劑條的加樣孔內(nèi)，上機(jī)檢測，最后根據(jù)儀器讀出的熒光值自動判定結(jié)果。

2　結(jié)　果

將樣品進(jìn)行培養(yǎng)后，上機(jī)檢測，其結(jié)果如表1所示。

表1　樣品中大腸桿菌O157檢測結(jié)果

3　討　論

VIDAS法只需要將煮沸后的增菌肉湯加入到樣品孔，所有的檢測步驟均有儀器自動操作完成，最后由儀器自動判讀結(jié)果，并打印結(jié)果報(bào)告單。該方法省去了提取DNA的步驟，比熒光PCR效率更高，更節(jié)省人力。而VIDAS O157（含H7）檢測試劑盒是目前檢測大腸桿菌O157的最快方法之一，并同時獲得了AFNOR/ISO 16140和AOAC-RI兩項(xiàng)認(rèn)證。該方法主要應(yīng)用重組噬菌體蛋白質(zhì)，是食品病原體篩查的最新技術(shù)，具有獨(dú)一無二的的特異性和敏感性。該方法最快只需8h即可得出結(jié)果，而傳統(tǒng)的方法需要長達(dá)24h才能出結(jié)果。因此該方法十分適合于臨床大腸桿菌O157的快速篩檢。

本研究從凍肉庫中采集部分樣品進(jìn)行大腸桿菌O157的檢測，從結(jié)果可以看出，從雞肉和鴨肉中各檢出一份陽性樣品，陽性率分別為5.9%和12.5%。而豬肉和羊肉中則未檢測到陽性樣品。由于是隨機(jī)檔口采樣，所以導(dǎo)致各肉類的樣品數(shù)量不同，有些樣品基數(shù)較少，可能是沒有檢測到陽性樣品的原因之一。接下來，要進(jìn)一步對全市范圍內(nèi)的肉類食品進(jìn)行大范圍采樣，進(jìn)行大腸桿菌O157篩選，確保食品安全。

從結(jié)果可以看出，我市凍肉類食品中存在有大腸桿菌O157污染情況，鑒于該細(xì)菌的嚴(yán)重危害，應(yīng)該引起我們的警惕，以免引起該病在我市范圍內(nèi)暴發(fā)。本研究為初期使用該方法，驗(yàn)證方法的可行性，從過程來看，該方法值得在全市范圍內(nèi)推廣使用，用于大腸桿菌O157的快速檢測，將問題控制在最小范圍內(nèi)，最大程度的保障市民的身體健康。

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.08.021

葉毅飛（1983～），廣東省東莞市人，助理獸醫(yī)師